双向凝胶电泳技术、蛋白质组学与基础和临床医学

双向凝胶电泳 (two dim ensional electrophoresis,2 DE)技术建立于 70年代 ,90年代之后又重新兴起。2 DE的复兴主要源于两方面的原因 :一是双向电泳从理论到技术的完善 ,如固相 p H梯度 (imm obilized ph gradi-ent,IPG)的建立 ,IPG等电聚焦精度的提高 ;二是双向电泳技术与质谱、N-端测序等下游技术结合适应了蛋白质组研究发展的要求 ,已在新药发明、疾病诊断等方面发挥作用     

活化激酶C受体1在切应力调控血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的 探讨活化激酶C受体1（receptor for actived C kinase 1, RACK1）在内皮细胞（endothelial cells, ECs）感受切应力刺激调控血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖中的作用及其机制。方法 应用平行平板流动腔系统,对联合培养的大鼠ECs和VSMCs施加1.5 Pa正常切应力（normal shear stress, NSS）和0.5 Pa低切应力（low shear stress,LowSS）,应用BrdU ELISA方法检测VSMCs增殖水平,对蛋白质组学研究发现的力学响应分子RACK1表达以及Akt磷酸化,应用Western blot技术进行检测。静态条件下,应用RNA干扰技术特异性抑制VSMCs的RACK1表达,检测其对细胞增殖和Akt磷酸化的作用。应用ECs与VSMCs隔开培养和联合培养模型,检测ECs对VSMCs的RACK1表达和Akt磷酸化水平的影响。结果 血管差异蛋白质组学的结果发现,与NSS组相比,RACK1在LowSS组血管组织的表达水平明显升高。细胞实验结果显示,LowSS诱导了与ECs联合培养的VSMCs增殖,上调VSMCs的RACK1表达和Akt磷酸化。静态条件下,特异性抑制VSMCs的RACK1表达后,VSMCs的增殖水平和Akt磷酸化水平均显著下降。与ECs联合培养VSMCs,其RACK1表达和Akt磷酸化水平较隔开培养组均上调。结论 VSMCs的RACK1表达受细胞接触与切应力的影响,并可能通过PI3K/Akt信号通路参与LowSS诱导的VSMCs增殖的调控。探讨VSMCs增殖功能变化及其力学生物学机制对于认识动脉粥样硬化等疾病发病机理和疾病防治有重要意义。     

毛细管无胶筛分电泳在苯丙氨酸羟化酶基因短串联重复序列分析及苯丙酮尿症基因诊断中的应用

应用毛细管无胶筛分电泳技术苯丙氨酸羟化酶基因内含子３中四核苷酸理复序列的多态性。方法通过毛细管毛细管无胶筛分电泳分离分析特异ＰＣＲ产物。结论与聚丙烯酰胺变性凝胶电泳相比，毛细管电泳具有准确、快速，自动化和高分辨等优点。     

医院管理的道德标准

医院管理应以高尚的道德标准为基础。管理的道德标准能够为整个医院的业务工作及其与外界的关系树立一种风气。管理道德有许多尺度,至少包括下列内容:     

胰高血糖素瘤综合征的诊治

胰高血糖素瘤综合征是胰腺内分泌肿瘤引起的综合征,极为罕见,其有特殊的四联症:坏死性溶解性游走性红斑(NME)、糖尿病或糖耐量异常、黏膜病变和体重下降[1,2].我院2003年收治了1例,现结合文献对该例的诊治作一探讨.     

腹腔镜胆囊切除术开展初期减少并发症发生的一些体会

当前腹腔镜胆囊切除术 (ＬＣ)的发展势头对传统的开腹胆囊切除术 (ＯＣ)提出了取代性的挑战。越来越多的基层医院拟开展ＬＣ术 ,而开展ＬＣ术的初期阶段往往是并发症的高发期〔1〕。因此 ,本文结合我院的经验 ,对降低ＬＣ术开展初期并发症的发生进行探讨 ,并提出一些经验体会以供借鉴。临床资料1.一般资料 :本组收集自 1996年 4月至 2 0 0 0年12月间接受ＬＣ的患者 6 5 0例 (男 2 6 2例 ,女 388例 ) ;年龄范围 12～ 82岁 ,6 0岁以上 2 72例。慢性结石性胆囊炎 (ＣＣＣ) 5 0 9例 ,慢性非结石性胆囊炎(ＣＡＣ) 2 5例 ,胆囊炎急性发作 (ＡＣ) 3…     

脆性X综合征基因的快速直接筛查法

目的建立一种简便易行、可以快速筛查脆性Ｘ综合征突变基因的方法。方法用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＦＭＲ－１基因中ＣＧＧ三核苷酸重复序列。通过测定样品中ＣＧＧ重复序列的拷贝数判断ＦＭＲ－１基因是否正常、或处于前突变状态（携带者），从而对临床可疑病例进行快速筛查。结果在正常人中可扩出含２０～３０个ＣＧＧ拷贝的片段；携带者可扩出５０～１００个拷贝；患者由于ＣＧＧ拷贝数大于２００而难以扩出。不能扩增的样品经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交法检测证实为脆性Ｘ综合征患者。结论这种方法可以快速、简便地从可疑人群中确定正常人与携带者，在脆性Ｘ综合征群体筛查中有实际应用价值。     

T型钙通道基因CACNA1H是儿童失神癫癎的易感基因

目的在既往工作的基础上,进一步明确T型钙通道CACNA1H基因是否为儿童失神癫癎(CAE)的易感基因.方法本组48例,分别来源于北京大学第一医院、首都医科大学附属北京儿童医院、首都儿科研究所附属医院以及山西省儿童医院.对本组患儿进行T型钙通道CACNA1H基因外显子6～12及其相邻的部分内含子PCR 产物测序,寻找突变.96个正常对照来自同一地区的无关个体,均无癫癎病史或遗传病家族史.结果共发现13个单核苷酸多态性,还发现4个突变位点只在CAE中出现,其中2个为错义突变G773D和H515Y,均为杂合突变.突变H515Y是新发现的错义突变,患儿从其母亲接受该突变.G773D在第3个CAE家系中发现相同的突变,本例从其父亲接受该突变.结论 T型钙通道CACNA1H基因很可能是CAE 的易感基因.