狂犬病毒核蛋白单抗和荧光抗体中和试验的建立与应用

目的建立狂犬病毒血清中和抗体效价的快速检测方法，以实现狂犬疫苗免疫效果的定量评价，指导高危人群及动物种群的免疫预防。方法采用常规方法建立杂交瘤细胞株并制备抗狂犬病毒核蛋白单抗，以亲和层析法进行纯化，异硫氰酸荧光黄标记制备荧光抗体；以BHK-21细胞系培养狂犬病毒细胞适应株CVS-11，以染毒细胞测定荧光抗体的工作浓度后，通过荧光抗体染色法测定CVS-11细胞半数感染量（TCID50）；利用狂犬病毒灭活疫苗免疫犬制备抗狂犬病毒血清，并以国际兽疫局标准品进行标定；参考世界卫生组织及国际兽疫局推荐方法，确定中和试验程序，对51份样品血清进行测定，并与国际狂犬病参考实验室的检测结果进行比较，评价其精确及可靠程度。以Kaber法公式和Microsoft Excel软件为基础，设计被测样品中和效价计算方法。结果制备的抗狂犬病毒核蛋白单抗的亚型为IgG2a；纯化、标记后的荧光抗体工作浓度为1：400；CVS-11株的使用量为每孔100 TCID50；本研究建立的检测程序对51份人及犬血清测得的中和效价结果与国际参考实验室的测定结果一致；自行设计的计算方法操作简便，计算快捷。结论成功建立了与国际标准相当的狂犬病毒中和抗体效价测定和计算方法。     

狂犬病动物抗体水平检测和监测

检测人和动物体内狂犬病抗体的主要目的有三个方面,第一,对暴露前预防免疫的人或动物进行抗体监测,确定人的预防免疫效果和动物的免疫水平及免疫覆盖率;第二,对暴露后免疫治疗的人体内的中和抗体进行检测,以确定暴露后治疗效果;第三,对狂犬病疑似患者或患畜,通过测定患病早期和     

FAVN与RFFIT在动物和人狂犬病中和抗体检测中的比较

目的比较荧光抗体病毒中和试验(FAVN)和快速荧光灶抑制试验(RFFIT)两项技术用于动物和人血清狂犬病中和抗体检测的差异。方法以FAVN和RFFIT两种方法分别对60份动物及人血清进行狂犬病中和抗体的平行定量检测,应用配对定量资料的t检验对所得数据进行统计学分析。结果以0.5IU/mL的国际推荐标准,对同一样品经FAVN和RFFIT两种方法测定的中和抗体效价进行定性判定,二者对全部60份样品的检测符合率为96.67%(58/60)。统计学分析显示,两种检测方法对总体样品及不同动物样品的定量检测结果差异均无统计学意义(P0.05)。结论 FAVN和RFFIT可通用于动物和人血清的狂犬病中和抗体检测。     

我国狂犬病现状与防控意见

狂犬病（rabies）是由狂犬病病毒（rabies virus）感染引起的一种人兽共患传染病,全世界每年报告的狂犬病死亡人数约有5．5万例,实际死亡人数应明显高于该统计数字。目前除日本、英国、夏威夷等国家和地区没有狂犬病发生以外,本病呈世界性分布流行。     

动物狂犬病中和性抗体竞争ELISA检测试剂盒的研制

目的研制一种能够定量检测狂犬病血清中和抗体的直接竞争ELISA试剂盒,以满足我国动物狂犬病免疫监测的需要。方法以表达狂犬病病毒糖蛋白的真核细胞培养物为包被抗原,捕获抗体为具有病毒中和活性的酶标单克隆抗体,标准血清为经荧光抗体病毒中和试验（FAVN）准确定量的犬血清。结果本试剂盒的最低检测限为0.25U/ml,线性检测范围为0.25～8U/ml,标准曲线的平均板内变异系数为2.8%,板间平均变异系数为4.9%,在4℃下至少可以存放6个月。结论本研究提供了一种操作安全、定量准确的动物狂犬病中和抗体检测试剂盒,具有良好的实际应用前景。     

汉坦病毒S基因在原核细胞中高效表达的研究

目的通过基因工程的方法从鼠肺中扩增出汉坦病毒的S基因，并实现其蛋白的体外表达。方法应用RT—PCR方法扩增汉坦病毒汉城型（SEO）的YZG-Changchun株S基因，然后克隆到pMD18-T载体中，经序列分析后，定向克隆入原核表达载体pET-28a中，转化大肠埃希菌Rosetta用IPTG诱导表达后，将全菌裂解，用SDS-PAGE和Westem—blot检测重组菌中外源蛋白的表达情况和免疫反应性的分析。结果S基因在原核细胞中得到了高效表达，表达的蛋白占菌体蛋白总量的37％，且具有良好的免疫反应性。结论汉坦病毒S基因蛋白可通过基因工程手段获得体外高效表达，这将对其功能的研究及为汉坦病毒疫苗的研究提供基础。     

孕妇单纯疱疹病毒Ⅱ型感染的分子流行病学调查

采用ＤＮＡ聚合酶链反应即ＰＣＲ法调查了大连市８００名孕妇和２００名已婚非妊娠期妇女（作对照组）宫颈ＨＳＶ－Ⅱ型感染情况。结果表明孕妇组感染率为１８．０％，对照组感染率为６．０％，总感染率为１５．６％，两组比较有差别（Ｐ＜０．０５），即孕妇的感染率高于对照组。孕妇感染阳性者的异常妊娠结局占１２．５％，感染阴性的异常妊娠结局占０．７６％，两组比较有非常显著差别（Ｐ＜０．０１）。     

应用PCR法对孕妇HSV-Ⅱ型感染的调查

单纯疱疹病毒(HSV）感染是主要性传播疾病之一，尤其对妇女儿童的危害很大。HSV虽可以引起感染症状，但多数感染无症状或症状轻微，属隐性或亚临床感染。为调查大连市妇女的感染水平以及其感染与妊娠结局的关系，我们应用PCR法对800名孕妇和200名已婚妇女(非妊娠期)HSV-Ⅱ型感染情况进行了调查，现报道如下。     

冀、京、吉犬群犬腺病毒中和抗体调查

目的为表达狂犬病病毒糖蛋白的犬2型腺病毒（CAV-2）重组狂犬病口服疫苗的投放工作提供流行病学依据。方法通过病毒中和试验对随机采自河北省,北京市,吉林省等地的387份犬血清进行犬腺病毒中和抗体检测,以确定犬群腺病毒感染率。结果河北、吉林农村流浪犬或家养犬腺病毒中和抗体阳性率较低,阳性率为16％（30／192）,而北京市犬腺病毒中和抗体阳性率高达69％（135／195）,说明城乡犬只犬腺病毒中和抗体存在明显差异。结论农村流浪犬或家养犬腺病毒中和抗体阳性率较低,适用于CAV-2及其重组疫苗首次免疫、尤其是口服免疫。