泌乳乳腺作为真核基因的有效表达系统研究

目的 探讨泌乳腺组织作为真核基因快速表达系统的可行性。方法 以蚓激酶（LK）作为目的标志基因，分别构建了在泛组织嗜性的巨细胞病毒（CMV）立即早期启动子、逆转录病毒长末端重复序列（LTR）和组织特异性的beta-酪蛋白启动子调控下的3种真核表达载体pICLK、pLLKSN和pIbLK。制备各重组质粒后，以泌乳期羊乳腺作为支持系统，在处于稳定泌乳阶段分别注射不同量的重组质粒于山羊乳腺组织中。在注射后不同时间采集奶汁，检测纤溶活性。结果蚓激酶的不同重组质粒在注射到乳腺组织之后迅速得到表达，注射后6～9h蚓激酶表达量达到高峰，并可持续至72h以上；不同表达载体间表达量略有变化，但差异无统计学意义。结论 泌乳乳腺组织可以作为真核基因的1种快速有效的表达系统。     

蚓激酶基因在山羊乳腺中的瞬时表达

构建了包括山羊β-酪蛋白基因启动子和蚓激酶基因cDNA的乳腺表达载体pβLK。通过直接注射将重组载体DNA导入山羊的乳腺组织,以纤维蛋白平板法测定乳汁中蚓激酶基因表达产物的活性。实验证实蚓激酶基因可以在山羊乳腺中瞬时表达。在进行山羊乳腺的瞬时表达时,适宜的注射剂量为500μg/ml。注射后6~9 h的表达量最高,达到2.0×105U/L,并持续表达至60 h。     

犬IL-18 cDNA的克隆及其免疫学特性

目的：获得犬白介素-18(cIL-18)基因并探讨其作为基因疫苗佐剂的免疫效果。方法：从犬的外周血中分离白细胞，经ConA刺激培养5～12h。提取犬白细胞总RNA作为模板，通过RT-PCR技术扩增cIL-18 cDNA。将其克隆到载体pMD18-T中测序，并与已发表的序列进行比较。将cIL-18 cDNA克隆入pIRES1 neo中，构建cIL-18真核表达载体。以200txg：200txg的比例，与狂犬病病毒糖蛋白表达载体plGneo混合免疫犬，并与糖蛋白单独免疫犬的免疫应答进行比较。结果：扩增获得单一长约0．6kh核酸带，测序证明长度为582bp，编码193个氨基酸，与从犬肺巨噬细胞中扩增的cIL-18基因的序列完全一致。以构建的表达载体pIIL18与pIGneo混合免疫与用pIGneo单独免疫相比较，前者抗狂犬病病毒特异性抗体的水平显著低于后者；但混合免疫组犬外周血淋巴细胞对特异性和非特异性抗原刺激的反应性显著高于糖蛋白单独免疫组。结论：cIL-18全长为582bp，其真核表达载体具有增强细胞免疫应答的能力，同时可显著抑制体液免疫应答。本研究为cIL-18作为基因疫苗佐剂的研究奠定了基础。     

疱疹病毒与人兽共患病

疱疹病毒目（Herpesvirales）是一群较大的有囊膜的双链DNA病毒,主要感染人或脊椎动物,也感染无脊椎动物（如软体动物）。在病毒分类上,过去疱疹病毒独立划分为1个科,根据国际病毒分类委员会2005年7月发表的最新病毒分类第8次报告,已将原疱疹病毒科（Herpesuiridae）升级为目,下分3个科,即Herpesviridae（包括哺乳动物、鸟类和爬虫类疱疹病毒）、     

蚓激酶重组逆转录病毒载体pLN-BCP-LK~R的构建及其在山羊乳腺组织中的表达

目的在山羊奶中表达蚓激酶。方法将含有蚓激酶基因的表达盒插入到逆转录病毒载体pLNCL中获得了蚓激酶重组逆转录病毒载体,转染泌乳期奶山羊乳腺小叶并获得暂时表达。利用脂质体转染PA317包装细胞,G418进行筛选得到阳性细胞克隆,克隆扩大培养后病毒上清感染妊娠期奶山羊乳腺小叶组织,山羊产后采奶纤维蛋白平板溶圈法检测蚓激酶活性。结果产后奶样经纤维蛋白平板溶圈法检测羊奶具有明显纤溶活性。结论蚓激酶基因已经整合到奶山羊乳腺组织并能实现相对稳定的表达。     

甘草泻心汤对小鼠的免疫机能和常压缺氧耐受力的影响

２０、１０ｇ／ｋｇ甘草泻心汤均可增高小鼠脾指数，２０ｇ／ｋｇ还增高胸腺指数并提高吞噬细胞的吞噬率；３０、１５ｇ／ｋｇ均延长小鼠常压缺氧下的生存时间     

1例潜伏期长达39年的狂犬病病例个案调查

2008年5月浙江省东阳市人民医院临床确诊1例潜伏期长达39年的狂犬病病例,现将具体调查情况报告如下:     

非洲猪瘟流行病学与媒介钝蜱研究进展

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起的烈性动物传染病,是全球养猪业的头号杀手。ASFV的宿主包括非洲疣猪、野猪、家猪及钝蜱。其中,钝蜱对于ASFV在自然界的维持以及向家猪群体扩散起着重要作用。本文就全球范围内非洲猪瘟流行病学及参与非洲猪瘟传播和维持的钝蜱媒介种类进行了深度辨析,介绍ASFV的主要媒介仔猪钝蜱和摩洛钝蜱并综述全球范围内的非洲猪瘟潜在宿主和媒介软蜱种类,为我国非洲猪瘟的防控提供理论参考。     

MALDI质谱成像技术在狂犬病病毒小鼠组织内定位研究中的应用

目的:建立基于MALDI质谱的狂犬病病毒小鼠脑组织内质谱成像实验方法,寻找狂犬病病毒脑组织内定位标记物。方法:制备冰冻切片,进行组织上原位酶解及基质覆盖,利用MALDI质谱扫描成像,以及FlexImaging 2.1软件分析,对差异肽段进行二级质谱鉴定。结果:初步鉴定出了四段狂犬病病毒肽段,可作为组织内狂犬病病毒定位标志物。结论:为进一步提高狂犬病病毒组织内定位的精确度奠定了研究基础。