人CD83基因转染细胞株的构建及其功能初步研究

目的构建人CD83全长编码基因转染293细胞,并探讨其对单核细胞的作用。方法 RT-PCR方法从成熟人树突状细胞(DC)扩增出CD83 cDNA,插入pIRES2-EGFP载体,脂质体转染293细胞,筛选出稳定表达目的基因细胞株;从人外周血单个核细胞(PBMC)中磁珠分选单核细胞,LPS刺激的同时加入293/CD83细胞或293/mock,24 h后检测细胞活化状态以及培养上清中TNF-α水平。结果经流式细胞术反复检测绿色荧光蛋白(GFP)报告基因及CD83表达水平,筛选获得获得一株稳定表达膜型CD83分子的基因转染细胞株293/CD83;体外实验显示293/CD83可促进LPS刺激的单核细胞活化水平和TNF-α分泌量。结论成功构建表达人CD83分子的293细胞株,293/CD83对LPS刺激的单核细胞有协同刺激作用。     

一株鼠抗人TLT-2单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定

为了制备鼠抗人TLT-2单克隆抗体(mAb)并对其生物学特性进行初步的研究。以TLT-2基因转染细胞株免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗人TLT-2 mAb,收集腹水,并用ProteinG亲和层析法纯化。以流式细胞术、IP和Western blot等方法鉴定该单抗的特异性。并通过流式细胞术、CCK8和ELISA等方法对单抗的生物学特性进行了初步分析。结果:获得一株持续稳定分泌鼠抗人TLT-2 mAb的杂交瘤细胞株,命名为8C10。杂交瘤细胞分泌的mAb的Ig亚类(型)为IgG1(κ)。IP和Western blot分析证明,8C10能特异性识别人TLT-2分子。经8C10荧光染色后流式细胞术的结果表明:TLT-2在T细胞表面呈弱阳性表达,在单核细胞和B细胞表面呈强阳性表达。细胞增殖实验结果显示,该mAb对T细胞的增殖有抑制作用。提示,成功获得了一株特异性鼠抗人TLT-2 mAb,该mAb对T细胞体外增殖及其细胞因子IFN-γ、IL-2、和IL-10的分泌均有明显的抑制作用。     

间充质干细胞株C3H10移植治疗小鼠实验性变态反应性脑脊髓炎的实验研究

观察鼠源性间充质干细胞株C3H10移植对实验性变态反应性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型小鼠疾病进程的影响,为研究多发性硬化症(multiple sclerosis,MS)等自身免疫性疾病的治疗提供实验基础。采用MOG35-55抗原与完全弗氏佐剂(IFA)免疫C57BL/6雌性小鼠制作EAE模型;24只小鼠分成三组,即未干预对照组、C3H10细胞移植组和正常对照组。通过HE染色,Fast-blue染色观察小鼠脑和脊髓的病理学改变,结合神经功能评分和体重测量的方法观察C3H10细胞移植对EAE小鼠的影响。结果:(1)动物行为学的改变:免疫后第10天开始,未干预对照组小鼠陆续出现EAE临床症状,第14至第18天达到发病高峰,平均神经功能评分为2.3±0.36(P<0.05),持续评分30d;C3H10细胞移植组小鼠有1只14 d和18 d神经功能评分为1分,正常对照组小鼠一直未出现临床症状(0分),持续观察30 d;(2)未干预对照组小鼠体重呈逐渐下降,第14天体重约(918.93±2.12)g,第22天约(18.65±2.04)g;C3H10细胞移植组小鼠体重有上升趋势,于造模后第14天称得体重为(18.7±0.93)g,造模后22 d小鼠体重保持在(19.26±0.58)g,两组相比具有统计学差异(P<0.05);(3)病理学改变:未干预对照组小鼠脑和脊髓小血管周围炎细胞浸润,呈袖套状或脱髓鞘改变,而C3H10细胞移植组和正常对照组小鼠未出现明显的脑和脊髓小血管炎症病理变化。小鼠间充质干细胞株C3H10移植于EAE小鼠可明显减少并延缓EAE发病,呈现一定的治疗作用。     

CD138分子生物学特性与肿瘤关系的研究进展

CD1 38 (Syndecan 1 )是跨膜硫酸乙酰肝素蛋白聚糖家族的成员 ,通过其硫酸乙酰肝素链共价结合多种胞外配体。CD1 38是一种细胞粘附分子 ,具促进细胞增殖、细胞 基质及细胞 细胞粘附等多种功能 ,其表达受高度调节并具细胞类型和发育阶段的特异性。CD1 38在某些肿瘤细胞的表达明显缺失 ,导致细胞丧失生长接触抑制的功能 ,使得瘤细胞大量增殖 ,并具极强的侵袭活性。     

G-CSF联合化疗动员外周血干细胞过程中某些生物因子的动态变化

目的　探讨IL 8、可溶性血管细胞粘附分子 1 (sVCAM 1 )及可溶性细胞间粘附分子 1(sICAM 1 )在自体造血干细胞动员过程中的变化及其意义。方法　采用酶联免疫吸附实验方法动态分析患者造血干细胞动员过程中血浆IL 8、sICAM 1及sVCAM 1水平的变化 ;通过免疫荧光标记和流式细胞仪检测CD3 4+细胞 ;体外半固体培养CFU GM集落及血细胞计数法观察白细胞和血小板数量变化。结果　①在动员过程中 ,外周血IL 8[(2 4 7.4± 84.2 ) μg L]、sICAM 1 [(530 .3± 2 86 .1 ) μg L]及sVCAM 1[(575 .3± 350 .4) μg L]含量均较动员前和正常人显著升高 (P <0 .0 1 ) ;②患者外周血中IL 8、sVCAM 1水平与CD3 4+细胞和CFU GM集落数呈正相关 (P <0 .0 0 1 )。结论　在自体干细胞动员过程中 ,血浆IL 8和sVCAM 1的含量与患者CD3 4+细胞数和CFU GM集落形成有显著的相关性 ,分析这些生物因子的变化具有临床实用价值     

急性早幼粒细胞白血病全反式维甲酸治疗时IL—8及其受体表达 …

目的：探讨白细胞介素８（ＩＬ－８）及其Ａ型受体（ＩＬ－８ＲＡ）的表达在全反式维甲酸（ＡＴＲＡ）诱导治疗急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）中的临床意义。方法：动态检测ＡＰＬ患者１８例ＡＴＲＡ治疗中血浆ＩＬ－８水平（ＥＬＩＳＡ法）取３例骨髓单个核细胞（ＭＮＣ）加ＡＴＲＡ（１０＾－６ｍｍｏｌ／Ｌ）体外诱导，流式细胞仪动态检测ＭＮＣ膜Ｌ－８ＲＡ的表达。结果：ＭＮＣ加入ＡＴＲＡ诱导７２小时，上清ＩＬ－８水平明显     

脐血源性间充质干细胞向神经样细胞诱导分化的研究

目的探讨来源于人脐带血来源的间充质干细胞(MSCs)体外诱导分化成神经样细胞的可行性。方法取第5代的脐血间充质干细胞,用不同浓度的脑源性神经营养因子(BDNF)和睫状神经营养因子(CNTF)单独或联合诱导脐源血间充质干细胞向神经样细胞分化。倒置相差显微镜观察细胞形态变化,于实验第1、3、6天分别进行神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞化学染色并计数分化为神经元样细胞及神经胶质细胞的比例。结果与对照组相比,BDNF和CNTF能显著提高人脐血源MSCs分化为神经元的比例。其中20 ng/mL的BDNF联合20 ng/mL CNTF诱导人脐血源MSCs分化为神经样细胞的比例最高。结论人脐血MSCs经BDNF和CNTF体外诱导,能够分化为神经样细胞。     

Studies on mechanism of treatment of granulocyte colony-stimulating factor,recombinant human interleukin-11 and recombinant human interleukin-2 on hematopoietic injuries induced by 4.5 Gy γ-rays irradiation in beagles

Objective To investigate the mechanism of treatment of granulocyte colony-stimulating factor(rhG-CSF),recombinant human interleukin-11(rhIL-11)and recombinant human interleukin-2 (rhIL-2)on hematopoietic injuries induced by 4.5 Gy60 Coγ-ray irradiation in beagles,and to provide experimental evidence for the clinical treatment of extremely severe myeloid acute radiation sickness (ARS).Methods Sixteen beagle dogs were given 4.5 Gy60 Co γ-ray total body irradiation(TBI),then randomly assigned into irradiation control group,supportive care group or cytokines+supportive care (abbreviated as cytokines)group.In addition to supportive care,rhG-CSF,rhlL-11 and rhIL-2 were administered subcutaneously to treat dogs in cytokines group.The percentage of CD34+cells,cell cycle and apoptosis of nucleated cells in peripheral blood were examined by Flow cytometry.Results After 4.5 Gy 60 Co γ-ray irradiation,the CD34+cells in peripheral blood declined obviously(61.3%and 52.1% of baseline for irradiation control and supportive care group separately).The cell proportion of nucleated cells in Go/G1 phase was increased notably(99.27% and 99.49% respectively).The rate of apoptosis(26.93% and 21.29% separately)and necrosis(3.27% and 4.14%,respectively)of nucleated cells were elevated significantly when compared with values before irradiation(P<0.05) 1 d post irradiation.When beagles were treated with cytokines and supportive care,the CD34+cells in peripheral blood were markedly increased(135.6% of baseline).The effect of G0/G1 phase blockage of nucleated cells became more serious(99.71%).The rate of apoptosis(5.66%)and necrosis(1.60%)of nucleated cells were significantly lower than that of irradiation control and supportive care groups 1 d after exposure.Conclusions Cytokines maybe mobilize CD34+cells in bone marrow to peripheral blood,indce cell cycle block at G0/G1 phase and reduce apoptosis,and eventually cure hematopoieticinjuries induced by irradiation.     

第2，3鳃裂联合瘘管1例

患者男，１７岁。出生后即发现颈前左下方有一逐渐增大的包块，１岁时在当地医院手术切除，后经反复换药抗炎治疗，切口一直不愈合，间断溢脓，进流汁时有液体渗出，但无食物残渣。１９９５年７月患者就诊我院外科以“颈段食道皮肤疹”收入院，请我科行食道镜检查食道内未见瘘口，Ｘ线碘油吞服造影见碘油从左侧梨状窝流入颈部软组织内。瘘管口注射碘油造影见：瘘管向颈上内方深部走行，而转入我科。查体：一般情况好，颈软、甲状腺及气管未见异常。左侧锁骨上窝锁骨中点上方有一瘘口，周围皮肤糜烂，瘢痕增生，可挤出少许脓性分泌物。 气管…