倒千里光碱对肝大部分切除小鼠肝脏损伤后再生修复的影响

背景:目前大多数应用倒千里光碱造成肝损伤模型都是以大鼠为实验对象,有研究报道倒千里光碱并不能抑制小鼠肝细胞增殖,也有报道倒千里光碱对小鼠的肝细胞具有增殖抑制作用.目的:观察单纯肝脏大部分切除及其联合应用倒千里光碱致小白鼠对肝损伤后再生修复的影响.方法:40只C57BL/6J小鼠随机数字表法分为2组,每组20只.倒千里光碱/肝脏部分切除组:腹腔注射倒千里光碱溶液70 mg/kg,注射2次,每次间隔2周,4周后肝脏2/3切除.肝脏部分切除组:腹腔注射生理盐水70 mg/kg,注射2次,每次间隔2周,4周后行肝脏2/3切除.观察术后14 d肝脏大体结构恢复情况;苏木精-伊红染色观察术后第3,7天肝细胞损伤情况;BrdU染色观察术后第3天成熟肝细胞增殖情况;CK19和C-kit免疫组织化学方法观察术后第3,7,14天肝脏卵圆细胞增生情况.结果与结论:肝脏部分切除组14 d肝大体结构基本恢复正常,而倒千里光碱/肝脏部分切除组肝脏大小没有明显的恢复.苏木精-伊红染色可见倒千里光碱/肝脏部分切除组明显的肝细胞变性改变;BrdU染色肝脏部分切除组术后第3天有明显肝细胞增殖,而倒千里光碱/肝脏部分切除组肝细胞增殖很少.CK19和C-kit免疫组织化学结果显示倒千里光碱/肝脏部分切除组术后第3天开始肝脏主要通过肝卵圆细胞增生并逐渐向肝细胞和小胆管分化,从汇管区开始向肝小叶内延伸以修复损伤.提示倒千里光碱可抑制小鼠肝脏损伤后肝细胞增殖再生.建立倒千里光碱/肝脏部分切除小鼠模型可诱导肝脏卵圆干细胞增生.     

uPA及V-ATPase在肝细胞癌中的表达及意义

目的研究尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）和ATP动力型质子泵（V-ATPase）在肝癌细胞株的表达,及抑制V-ATPase与癌细胞抑制和凋亡的关系。方法用RT-PCR和Western blot检测稳定转染真核表达质粒pCMV-uPA-HA的HCC97L细胞及转染空载体pCMV-HA的HCC97L细胞中uPA和V-ATPase mRNA和蛋白的表达;在转染uPA的HCC97L细胞培养基中加入不同浓度的Bafilomycin A1,用流式细胞仪和CCK-8分别检测癌细胞凋亡及受抑制情况。结果将uPA转染入低转移潜能肝癌细胞株HCC97L后,uPA mRNA和蛋白表达强于转染空载体的HCC97L,V-ATPase mRNA和蛋白表达随着转染uPA而增强。在细胞培养基中加入Bafilomycin A1后细胞生长增殖受到抑制、凋亡增加,且抑制率和凋亡率均随Bafilomycin A1浓度的加大而增加。结论 V-ATPase mRNA和蛋白表达随癌细胞转移能力的提高而增强;Bafilomycin A1抑制V-ATPase,干扰癌细胞内H＋泵出,从而抑制癌细胞生长增殖、促进癌细胞凋亡。     

V-ATPase在肝细胞癌中的表达及其与浸润转移的关系

目的 研究V-ATPase在肝癌组织的表达及其与肝癌浸润转移的关系.方法 用RT-PCR和免疫组织化学方法 检测肝癌组织中V-ATPase mRNA和蛋白的表达.用癌细胞体外迁移实验观察培养基中加入V-ATPase抑制剂Bafilomycin A1后细胞迁移能力的改变.结果 肝癌组织V-ATPase mRNA和蛋白的表达明显强于癌旁组织和正常肝组织.加入Bafilomycin A1后肝癌细胞迁移能力减弱.结论 V-ATPase在肝癌组织高表达并与转移有关,Bafilomycin A1抑制V-ATPase,干扰癌细胞内H+的泵出,削弱癌细胞的迁移能力.     

uPA基因真核表达载体的构建和鉴定

目的:构建人尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)基因真核表达载体,并转染人肝癌细胞,为进一步体外研究uPA在肝癌发生发展中的作用奠定基础.方法:从肝癌组织中提取RNA,通过RT-PCR的方式,获得基因uPA的全长cDNA,并克隆于含有HA2-标签(tag)的真核表达载体pCMV上,酶切鉴定,质粒测序鉴定,用pCMV-uPA-HA2进行细胞瞬时转染及WesternBlotting鉴定.结果:经过测序证实得到获得包含uPA基因的pCMV-HA2真核表达载体,瞬时转染细胞有蛋白表达.结论:克隆了人肝癌的uPA基因,成功构建真核表达载体.     

尿激酶型纤溶酶原激活物、基质金属蛋白酶在肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的探讨尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)、基质金属蛋白酶(MMP-9)在肝细胞癌中的表达及其临床意义。方法用RT-PCR和免疫组织化学法检测45例肝细胞癌及其癌旁组织u-PA和MMP-9的mRNA及蛋白表达,7例肝血管瘤旁肝组织作为对照组。结果肝癌组织中u-PA和MMP-9mRNA阳性率均为100%(45/45);其对应的癌旁组和对照组的阳性率分别为84.44%(38/45)、28.57%(2/7)和86.67%(39/45)、57.14%(4/7);三组比较差异均有显著性(P<0.05)。免疫组化显示,u-PA和MMP-9在肝癌组中阳性率分别为75.56%(34/45)、66.67%(30/45),癌旁组分别为26.67%(12/45)、22.22%(10/45),对照组分别为28.57%(2/7)、14.29%(1/7),三组比较差异有显著性(P<0.05)。此外,在肝癌组织中u-PA、MMP-9的mRNA和蛋白的阳性率均与静脉癌栓形成、肝内外转移有关(P<0.01),与乙型肝炎、病理分级、血清AFP水平以及肿瘤直径无明显关系(P>0.05)。结论肝细胞癌中的u-PA和MMP-9mRNA及蛋白的高表达与肝癌的侵袭转移有关;检测u-PA和MMP-9有助于判断肝细胞癌的预后。     

癌基因表达与甲状腺癌变关系的研究进展

细胞的过度增生与细胞死亡减少,最终可导致肿瘤的发生,而细胞的增生和死亡是通过基因来调控的.随着实验技术的不断改进和提高, 人们已经能从分子和蛋白水平揭示肿瘤发病的机理.现已证明,许多癌基因、抑癌基因与甲状腺癌的发生、发展和转归有密切关系[1,2],现将国内外研究综述如下.     

uPA在肝癌细胞株及肝癌组织中的表达及意义

目的:从mRNA水平探讨uPA在不同转移潜能肝癌及恶性黑色素瘤细胞株中的表达,从蛋白水平探讨uPA在肝癌组织中的代表表达及其与肝癌转移的关系。方法:检测uPA在不同转移潜能人肝癌及恶性黑色素瘤细胞株中的mRNA表达,用免疫组织化学方法检测uPA在肝癌组织中的蛋白表达。结果:uPAmRNA在高转移潜能肝癌和恶性黑色素瘤细胞株呈高表达,在相应低潜能转移细胞株呈低表达;uPA蛋白在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织和正常对照组,在有转移及静脉癌栓形成的肝癌组织阳性表达高于无转移及无癌栓者,癌巢边缘的癌细胞表达强于癌巢中央,血管内癌栓呈强阳性表达。结论:uPA在肝癌的的生长、侵袭和转移中起重要作用,可能作为治疗的操作、预防转移复发的对象。     

运动量对糖尿病动脉粥样硬化大鼠TLR2、TLR4的影响

目的:探讨不同强度的运动对糖尿病动脉粥样硬化大鼠主动脉组织Toll样受体2(TLR-2)、Toll样受体4(TLR-4)的影响.方法:选取健康SD大鼠100只,随机分成对照组20只及糖尿病动脉粥样硬化组80只,糖尿病动脉粥样硬化模型采用高糖高脂饮食加链脲佐菌素(STZ)(30 mg/kg)注射建立.其中糖尿病动脉粥样硬化组又分成模型组、小运动量组、中等运动量组和大运动量组(每组20只).经过估计力竭运动时间及游泳训练后,小运动量组(12 min/次),中等运动量组(21 min/次),大运动量组(30 min/次),进行6周的运动干预,1次/d,一周6次.用PCR法测定各组大鼠主动脉组织的TLR2、TLR4mRNA的表达.结果:模型组较对照组血管组织中TLR2、TLR4水平升高;运动干预后,各运动组TLR2、TLR4水平较模型组降低,以中等运动量、大运动量组下降明显.结论:糖尿病动脉粥样硬化大鼠主动脉组织中TLR2、TLR4水平升高,TLR2、TLR4水平的升高可能是糖尿病动脉粥样硬化的发病机制之一,运动能够降低TLR2、TLR4的表达.     

CD56在肺小细胞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨CD56在肺小细胞癌(SCLC)中表达及其临床病理意义。方法应用免疫组化MaxVisionTM法检测60例SCLC标本中CD56蛋白的表达。结果 CD56在SCLC肿瘤组织中的阳性率(91.67%)显著高于肺非小细胞癌组织中的阳性率(12.50%)(P<0.001);CD56在SCLC肿瘤组织中的阳性率明显高于NSE(60.00%)、CKp(40.00%),差异有高度显著性(P<0.001)。结论 CD56在SCLC中高表达,可作为临床病理诊断SCLC的特异性阳性标记物。     

倒千里光碱对肝大部分切除小鼠肝脏损伤后再生修复的影响**☆

背景：目前大多数应用倒千里光碱造成肝损伤模型都是以大鼠为实验对象,有研究报道倒千里光碱并不能抑制小鼠肝细胞增殖,也有报道倒千里光碱对小鼠的肝细胞具有增殖抑制作用。 目的：观察单纯肝脏大部分切除及其联合应用倒千里光碱致小白鼠对肝损伤后再生修复的影响。 方法：40只C57BL/6J小鼠随机数字表法分为2组,每组20只。倒千里光碱/肝脏部分切除组：腹腔注射倒千里光碱溶液70 mg/kg,注射2次,每次间隔2周,4周后肝脏2/3切除。肝脏部分切除组：腹腔注射生理盐水70 mg/kg,注射2次,每次间隔2周,4周后行肝脏2/3切除。观察术后14 d肝脏大体结构恢复情况;苏木精-伊红染色观察术后第3,7天肝细胞损伤情况;BrdU染色观察术后第3天成熟肝细胞增殖情况;CK19和C-kit免疫组织化学方法观察术后第3,7,14天肝脏卵圆细胞增生情况。 结果与结论：肝脏部分切除组14 d肝大体结构基本恢复正常,而倒千里光碱/肝脏部分切除组肝脏大小没有明显的恢复。苏木精-伊红染色可见倒千里光碱/肝脏部分切除组明显的肝细胞变性改变;BrdU染色肝脏部分切除组术后第3天有明显肝细胞增殖,而倒千里光碱/肝脏部分切除组肝细胞增殖很少。CK19和C-kit免疫组织化学结果显示倒千里光碱/肝脏部分切除组术后第3天开始肝脏主要通过肝卵圆细胞增生并逐渐向肝细胞和小胆管分化,从汇管区开始向肝小叶内延伸以修复损伤。提示倒千里光碱可抑制小鼠肝脏损伤后肝细胞增殖再生。建立倒千里光碱/肝脏部分切除小鼠模型可诱导肝脏卵圆干细胞增生。