核干细胞因子RNA干扰慢病毒载体的构建及鉴定

目的 构建核干细胞因子基因RNA干扰（RNA interference,RNAi）慢病毒表达载体并对其在白血病细胞株中的干扰效果进行鉴定,为后期研究奠定基础.方法 针对核干细胞因子基因的序列设计RNAi有效靶点,合成含RNA干扰序列、Loop环、Age I和EcoR I酶切位点,以及终止信号的单链DNA oligo,经退火形成双链DNA,与双酶切线性化的带有GFP荧光标记和嘌呤霉素抗性标记的GV248慢病毒空载体进行连接产生重组慢病毒载体,转化感受态细菌,挑取重组阳性转化子进行菌落PCR反应,并对PCR阳性克隆进行测序.将重组慢病毒载体及其两种辅助包装原件载体质粒pHelper1.0和pHelper2.0共转染293T细胞进行病毒的包装,收集、浓缩病毒液后测定其滴度,并转染HL-60、NB4以及K562等三种人白血病细胞株,倒置荧光显微镜下观察其转染效率,real-time PCR检测核干细胞因子基因的敲减效率.结果 经测序证实正确构建出了核干细胞因子基因的RNAi重组慢病毒载体,包装、浓缩后其滴度为4×108 TU/ml,荧光显微镜下显示其能有效转染进入HL-60、NB4及K562等白血病细胞株中,转染效率均在80％以上;real-time PCR显示转染后核干细胞因子基因mRNA表达水平较阴性对照组显著下降（P＜0.05）,在HL-60、NB4和K562细胞中核干细胞因子基因的抑制效率分别为52.3％、80.5％、62.3％.结论 成功构建出了核干细胞因子基因的RNAi慢病毒载体,其能有效干扰人白血病细胞株HL-60、NB4及K562中的核干细胞因子基因表达.     

局部注氧对兔软组织损伤后血清乳酸的影响

软组织损伤的治疗多以热疗为主 ,通过改善血液循环 ,促进炎症吸收 ,以达到消肿止痛的目的。但使用不当会加重病情 ,且见效慢 ,易复发。软组织损伤所致炎症可导致组织呼吸功能受损 ,局部缺氧 ,生物氧化功能障碍 ,乳酸增加。我们应用局部注氧观察其对兔软组织损伤的影响[1] ,现报道如下。一、材料和方法1.动物 :日本大耳白兔 60只 ,体重 2 .4～ 2 .7kg ,平均2 .5 6kg ;兔龄 1.5～ 2 .1岁 ,平均 1.7岁。白兔随机分为注氧组与对照组 ,每组 3 0只 ,每只白兔左臀部剃毛 ,用做实验区。2 .软组织损伤模型 :自制板状夹子 ,其单侧面积为 2 .0cm×1.5cm…     

老年性高血压合并肾病的观察与护理

目的：探讨老年性高血压合并肾病的观察与合理体会。方法：回顾性分析我院2007年2月～2010年3月内科住院部收治的68例高血压合并肾病患者的临床资料。结果：本组68例患者经护理干预后均顺利出院。结论：高血压性肾损害患者应该严格控制血压以防止肾功能进一步损害,合理的治疗和护理手段有利于提高患者预后。     

RP—HPLC法同时测定复方明目胶囊中绿原酸和秦皮甲素的含量

目的:建立复方明目胶囊中绿原酸和秦皮甲素含量的测定方法。方法:采用反相高效液相色谱法,ZORBAX～C_(18)(4.6mm×250 mm,5μm)色谱柱,乙腈-0.1%磷酸溶液(用三乙胺调节 pH=4.5)(8:92)为流动相,检测波长327 nm,流速0.8 mL·min~(-1),柱温25%。结果:绿原酸在1.0～6.0μg范围内与峰面积呈良好线性关系,r=0.9993,绿原酸平均加样回收率为100.2%,RSD 为0.9%(n=5);秦皮甲素在1.60～12.32μg范围内与峰面积呈良好线性关系,r=0.9996,秦皮甲素平均加样回收率为97.3%,RSD 为1.2%(n=5)。结论:本方法可靠性高,准确性和重复性好,适用于复方明目胶囊中绿原酸和秦皮甲素的含量测定。     

配伍使用赖氨匹林与庆大霉素对豚鼠的听力影响实验

 目的观察混合给药后的配伍安全以及豚鼠ABR检测和细胞形态学的变化。方法混合2种药物后,进行灯检,pH值、旋光度检测,两种药物均为临床使用剂量,观察两种药物在临床使用剂量下混合给药的安全性和有效性。健康杂色雄性豚鼠随机分为3组,GM组、GM+Aspirin-DL-Lysine组、对照组,采用听性脑干反应(ABR)、耳蜗铺片观察用药前后听阈及耳蜗毛细胞形态学改变,并检测庆大霉素血药浓度。结果混合后药物的pH值、颜色、及澄明度均无变化,混合试液与单纯药物溶液之间的旋光度无明显差异。①GM组不同频率下的ABR阈移分别为:1kHz15～18dB,8kHz17～20dB,GM+Aspirin-DL-Lysine组的阈移分别为:1kHz9～15dB,8kHz10～15dB。两组间差异显著(P<0.05);②耳蜗铺片结果显示:耳蜗铺片GM组底圈毛细胞有损伤,与正常组比较排列不整齐,毛细胞损伤向上逐渐减轻,提示与听阈升高的程度相平行。而GM+As-pirin-DL-Lysine组的毛细胞排列整齐,无损伤。结论赖氨匹林(来比林)与庆大霉素可以安全的配伍使用。单独注射正常量庆大霉素4周使豚鼠的高频ABR升高,混合注射GM+Aspirin-DL-Lysine后对豚鼠的ABR影响不明显。注射正常量庆大霉素使豚鼠耳蜗毛细胞有损伤,底圈比顶圈重,与正常组比较,毛细胞排列紊乱。而配伍使用GM+Aspirin-DL-Lysine可以减轻庆大霉素对毛细胞的损伤。与正常组比较无明显差别。     

生脉注射液对重度有机磷农药中毒患者心肌损伤的保护作用研究

目的：研究生脉注射液对重度有机磷农药中毒患者心肌损伤的保护作用。方法：将61名重度急性有机磷农药中毒患者随机分为生脉组（34例）和对照组（27例）。生脉组患者静脉滴注生脉注射液80ml,其他治疗两组相同。检测两组患者的CK-MB、cTnT、MYO、收缩压（SBP）、心电图胸导ST段下移之和（∑ST）。结果：生脉组患者的CK-MB、cTnT、MYO、SBP、∑ST分别为（73.3±16.1）IU/L、（0.47±0.08）ng/ml、（78.5±14.5）ng/ml、（100±15）mm Hg、（0.45±0.13）mV;对照组分别为（85.4±19.6）IU/L、（0.72±0.11）ng/ml、（97.7±18.5）ng/ml、（89±16）mmHg、（0.56±0.18）mV;两组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：生脉注射液能够减少氧自由基和脂质过氧化产物生成,增加抗氧化酶的活性,减轻心肌能量代谢障碍和超微结构损伤,改善血流动力学状态,从而减轻AOPP患者心肌损伤,提高收缩压,对心肌损伤具有很好保护作用,在重度有机磷农药中毒患者治疗中应该积极推广使用。     

药学专业学员毕业设计初探

通过对药学专业学员在化学教研室毕业设计的指导,总结了如何搞好药学学生毕业设计的一些实践经验与教学方法,以期对提高药学生毕业设计的整体质量及相关能力有现实指导意义。     

花芪通脉颗粒质量标准的研究

目的：建立花芪通脉颗粒的质量标准。方法：采用薄层色谱法（TLC）对处方中的灯盏花、黄芪和延胡索进行鉴别，用高效液相色谱法（HPLC）测定灯盏花中灯盏乙素的含量。结果：在TLC色谱中均能检出灯盏花、黄芪、延胡索；在HPLC色谱中灯盏乙素在0．74—3．70μg范围内与峰面积呈良好线性关系，r=0．9996，灯盏乙素平均加样回收率为98．7％，RSD为0．69％（n=5）。结论：所建鉴别方法专属性强，定量方法准确性和重现性好，适用于花芪通脉颗粒的质量控制。     

高效液相色谱分离纯化九节龙皂苷I

目的 采用制备色谱系统从九节龙皂苷粗品中分离纯化九节龙皂苷I,建立其纯化工艺.方法 九节龙皂苷粗品采用柱色谱分离,然后采用制备色谱系统,收集对应峰的回收液,即得九节龙皂苷I,并对产品进行了TLC定性和质量分数定量分析.结果 产品经HPLC检测,为九节龙皂苷I,质量分数达99％以上.结论 用制备色谱系统进行九节龙皂苷I的分离和纯化,具有简便、快捷、周期短、自动化程度高、收集全面等优点.     

经不对称双羟化反应合成紫杉醇的新途径

目的 寻求一种高效、低廉的半合成紫杉醇的途径.方法 在可回收非支载型手性配体的催化作用下,通过不对称双羟化反应合成紫杉醇C13侧链,对侧链的羟基和氨基进行保护后生成(4S,5R)-N-苯甲酰基-2-(4‘-甲氧基)苯基-4-苯基-1,3-氧氮杂戊环-5-甲酸,进而和7-三乙基硅烷巴卡亭-Ⅲ缩合、去保护获得紫杉醇.结果 获得了高光学纯度的紫杉醇C13侧链(化学产率52%,光学纯度99%),紫杉醇的总产率为30%,光学纯度为99%.结论 此方法反应步骤少、操作简单、成本低廉,为紫杉醇的半合成开辟了一条新路线.