Tet-on系统调控A20基因在鼻咽癌肝转移亚系中的表达

目的构建pSUPERIOR-A20可调控性载体,检测其在肝转移亚系中表达的可调控性。方法通过基因芯片筛选出鼻咽癌肝转移相关基因,结合文献调研获得头颈部癌转移标签基因,并通过荧光定量PCR检测发现A20可能在鼻咽癌肝转移过程中发挥了重要作用。在线设计A20特异性干扰片段,选择相应酶切位点后将其插入pSUPERIOR质粒中,应用酶切鉴定和序列分析方法验证所构建载体的正确性。将pSUPERIOR质粒和Tet-on质粒共转染肝转移亚系5-8F-H3,PCR检测A20的表达。结果Real-time PCR检测A20在肝转移亚系5-8F-H3中的表达显著上调,结果具有统计学意义(P=0.005)。且成功构建了pSUPERIOR-A20载体,与Tet-on质粒共转染5-8F-H3后经嘌呤霉素筛选克隆,经荧光定量PCR检测阳性克隆A20基因的表达显著下调。结论成功构建pSUPERIOR-A20载体,并可有效干扰鼻咽癌肝转移亚系5-8F-H3中A20基因的表达,为进一步研究A20在鼻咽癌肝转移中的作用奠定了良好的基础。     

中华按蚊、嗜人按蚊不同地理株基因组DNA的限制酶切长度差异(RFLD_s)

我们制备了上海,广西和郑州三株中华按蚊、江苏和广西两株嗜人按蚊的基因组DNA,分别用BglⅡ,HaeⅢ和Pst Ⅰ消化各基因DNA,琼脂糖凝胶电泳,溴乙啶染色后,观察比较同种各株间基因组DNA重复序列DNA的限制酶切长度差异。结果发现,各地理株间的酶切引型,既具有种的特征,主带相同,稳定;     

可视化鼻咽癌细胞模型CNE2-EGFP的建立

目的利用pEGFP-N1质粒转染鼻咽癌细胞株,建立稳定表达绿色荧光蛋白的鼻咽癌细胞株CNE2-EGFP．为整体鼻咽癌可视化研究提供良好的试验材料。方法利用脂质体转染法,将pEGFP—N1质粒转染鼻咽癌细胞株．通过G418抗性筛选、亚克隆扩增获得GFP稳定表达的人鼻咽癌细胞株CNE2-EGFP。结果成功获得多个稳定表达GFP的人鼻咽癌细胞CNE2-EGFP细胞株,比较CNE2和CNE2-EGFP发现,两者生长曲线、细胞周期分布、裸鼠成瘤能力等均无显著性差异。结论建立了非G418依赖、稳定表达GFP且保持母株细胞特性的人鼻咽癌细胞株CNE2-EGFP,为鼻咽癌整体可视化研究打下了坚实的基础。     

以肿瘤干细胞为靶的免疫治疗

肿瘤干细胞(cancer stem cell,CSC)是肿瘤发生和转移的种子细胞,CSC具有自我更新、增殖和不完全分化的能力。CSC对化疗/放疗的抵抗以及免疫逃逸成为肿瘤复发的根源,要提高肿瘤治愈率必须彻底清除CSC。认识CSC的标记特征和"干性"调节关键分子才能有效和特异地攻击CSC。免疫治疗具有抗原识别的靶向性和时空效应性,是以CSC为靶的治疗的基础;以单克隆抗体和致敏的免疫细胞为主要治疗技术的免疫治疗清除CSC具有可实践性和挑战性。     

EB病毒及其相关动物模型

恶性肿瘤的发生、发展是一个受多种外界致癌因素作用导致多种遗传学改变并逐渐积累的过程.病毒是许多恶性肿瘤的重要诱因,因而病毒基因结构与功能的研究一直是恶性肿瘤病因发病学研究领域中的焦点.EB病毒与许多人类恶性疾病的发生密切相关.本综述就EB病毒基因结构与功能的关系、EB病毒进入细胞的机制、EB病毒相关的动物模型的建立等方面作一较为详细的阐述.     

3号染色体短臂21-22区域63个新基因在鼻咽癌组织中的差异表达

目的寻找与鼻咽癌发病密切相关的未知基闪。方法对63个定位于3号染色体短臂21-22 D3S1609-D3S1295区域的单拷贝并代表未知基因的EST簇进行网上克隆，在获取基因大片段或全长cDNA序列的基础上，应用半定量逆转录．聚合酶链反应检测63个未知基因在4种鼻咽癌细胞铢、32例鼻咽部低分化鳞状细胞癌组织和16例鼻咽部慢性炎症组织中的表达状况。结果49个未知基因在鼻咽癌组织和鼻咽部慢性炎症组织问的表达水平无显著性差异；8个未知基因在鼻咽癌和鼻咽部慢性炎症组织中均不表达；2个未知基因在鼻咽癌组织中表达明显增强；4个未知基因在鼻咽癌组织中表达明显减弱，其中Hs．27566基因在鼻咽癌细胞和组织中均显著低表达或不表达。结论在染色体3p21-22D3S1609．D3S1295区域构建了63个未知基因在鼻咽癌的表达差异谱：筛选出6个在鼻咽癌组织中差异表达的未知基因。     

逆转录病毒载体介导的基因转移技术研究进展

逆转录病毒载体能稳定、高效率整合进入宿主细胞染色体基因组,并在宿主细胞内高效率的表达。这种基因转移技术为将外源基因导入哺乳动物和人细胞,从而为进行基因结构和功能,基因表达和调控,人类遗传病的基因治疗等当代分子生物学研究领域前沿问题的探讨提供了有力的手段。近年来,国外的一些实验室对逆转录病毒载体及包装细胞进行了一系列的深入研究,取得了许多重要成果。本文对了这些方面的主要进展进行了简述。     

鼻咽癌组织中EB病毒潜伏相关基因的表达

目的： 通过检测鼻咽癌组织中EB病毒的潜伏膜蛋白LMP1的序列以及LMP1、EBNA1、EBNA2的mRNA表达来探讨EB病毒的感染状态及其表达产物与鼻咽癌的关系。方法: 应用PCR法检测鼻咽癌组织中LMP1 DNA的存在，并对鼻咽癌来源的LMP1和EB病毒永生化狨猴B淋巴细胞系B95-8来源的LMP1进行测序，比较序列的差异。利用巢式RT-PCR检测鼻咽癌组织中LMP1、EBNA1、EBNA2的mRNA表达。结果: 47例鼻咽癌组织均含有LMP1 DNA，所有鼻咽癌来源的LMP1 DNA与B95-8来源的LMP1 DNA序列比较均存在着多个单核苷酸变异，最明显的是XhoⅠ酶切位点的丢失。测序后显示鼻咽癌来源的LMP1 DNA有30个核苷酸的丢失。巢式RT-PCR显示LMP1、EBNA1、EBNA2在鼻咽癌中的mRNA表达率分别为76.6％、80.0％和74.5％。其中EBNA1的表达是由Qp启动的，而B95-8细胞中EBNA1的表达是由Cp启动的。结论: 鼻咽癌中EB病毒的作用途径比较复杂，LMP1、EBNA1、EBNA2等潜伏期基因还有早期裂解基因BARF1均可能参与鼻咽癌的发生发展过程。     

鼻咽及其邻近部位各类型癌组织中EBV DNA的原位检测

改进了生物素标记探针与石蜡组织切片的ＤＮＡ－ＤＮＡ原位杂效技术，采用ＥＢ病毒的ＢａｍＨＩ－Ｗ片段为探针，检测鼻咽部及其邻近部位各种不同组织学和分化类型的癌组织及慢性炎症标本中ＥＢＶ的存在与分布情况。结果表明：ＥＢ病毒的存在与癌的组织类型和分化程度密切相关，并不局限于鼻咽部。在鼻咽部的低，中，高分化鳞状细胞癌标本，ＥＢＶＤＮＡ阳性例数分别为３９／４１个，１／７个和０／３个；腭部及扁桃体氏体低鳞癌标本     

人胚鼻咽上皮细胞培养、化学转化及鼻咽癌恶性转化基因的克隆

鼻咽癌是我国南方和东南亚国家相当高发的恶性肿瘤。湖南省鼻咽癌的死亡率在全国列第四位,严重危害人民的生命健康。有效地防治鼻咽癌已提到十分突出的位置。但迄今为止,鼻咽癌的病因发病机理尚不清楚。人们试图从流行病学、病理学、分子生物学等方面进行探讨,也取得了一些有意义的研究结果,但未能系统、