利用PCR，FISH对异常核型中额外染色体的证实

目的：检测在常规G显带下，45，X［115］/46，X+mar［45］/46，XY［29］异常核型中额外小染色体的来源。方法：利用PCR对SRY基因进行检测；对人的Y染色体进行标记，利用荧光原位杂交技术，在荧光显微镜下观察。结果：用Y染色体杂交，发现在额外小染色体上有荧光信号。结论：额外小染色体来源于Y染色体。     

连接蛋白26与神经内分泌特异蛋白的羧基端相互作用

目的：应用酵母双杂交技术筛选和鉴定连接蛋白26（connexin 26, Cx26）的相互作用蛋白质。方法：以正常人DNA为模板,PCR扩增Cx26（GJB2）全长编码区作为诱饵,基因重组法定向克隆到第3代MatchMaker Gal4双杂交系统的pGBKT7质粒,用构建的pGBKT7-Cx26质粒筛选人胎脑cDNA文库,获得的阳性克隆的插入子为Cx26的相互作用蛋白质（猎物）,将Cx26和筛选到的相互作用蛋白再一对一回复进行酵母双杂交实验,去除假阳性。对阳性克隆插入子的DNA序列进行测序,在GenBank中作匹配及生物信息学分析。结果：1个阳性克隆的插入子与神经内分泌特异蛋白（neuroendocrine specific protein, NSP）羧基端的145个氨基酸残基序列一致,阅读框无移位。结论：Cx26与NSP的羧基端具有相互作用,NSP可能在Cx26蛋白的转运、装配成间隙连接或间隙连接功能等生理活动过程中起一定作用。     

小鼠螺旋神经节细胞电压依赖性钙通道亚单位分析

目的 分析小鼠螺旋神经节细胞电压依赖性钙通道亚单位的类型。方法 手术分离新生小鼠的耳蜗螺旋神经节细胞进行培养,24 h后提取RNA。逆转录后获得螺旋神经节细胞cDNA,根据电压依赖性钙通道7种亚单位序列设计的引物进行聚合酶链反应扩增,通过聚合酶链反应结果分析和DNA测序确定螺旋神经节细胞表达的亚单位类型。结果 逆转录聚合酶链反应扩增出α1D、α1E、α2/δ、β1和β3亚单位的片段,测序进一步证明小鼠螺旋神经节细胞中有这几种亚单位的存在。结论 小鼠螺旋神经节细胞中有α1D、α1E、α2/δ、β1和β3亚单位的表达。α1D和α1E亚单位的共表达证明在哺乳动物的螺旋神经节细胞中有L型和R型电压依赖性钙通道。     

平皿—微滴法玻璃化冷冻保存小鼠胚胎

目的：使用平皿－微滴法玻璃化冷冻小鼠8－12细胞胚胎，检验该方法对胚胎的冻存效果。方法：胚胎在EG20中平衡3min，EFS40中平衡1min，将含有胚胎的小于0.5μl的EFS40微滴吹于35mm平皿上并立即直接浸入液氮保存。结果：解冻后胚胎回收率达到98．1％，透明带无破损，冷落后存活率为95．2％。冻融胚胎体外发育和体内发育能力与对照组胚胎比较差异无显著性（84．3％对90．1％，12．1％对13．5％，P＞0．05）。结论：小鼠8－12细胞胚胎可以用平皿－微滴法有效地进行玻璃化冻存。     

遗传性痉挛性截瘫spastin、atlastin和paraplegin基因突变分析

目的探讨遗传性痉挛性截瘫(HSP)spastin、atlastin和parap legin基因的突变特点。方法应用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)结合DNA序列分析方法对24个常染色体显性遗传HSP家系和14例散发患者进行spastin基因和atlastin基因突变分析;对12个常染色体隐性遗传HSP家系和14例散发患者进行parap legin基因突变分析。结果在5个不同的常染色体显性遗传HSP家系中发现4个spastin基因新突变(1223 insCTCA、1258T→A,1293A→G和1668delCTA),在2例散发患者中发现2个spastin基因多态(IVS1-31C→G和IVS2-47A→G);在常染色体显性遗传HSP家系和散发患者中未发现atlastin基因突变或多态;在常染色体隐性遗传HSP家系和散发患者中未发现致病突变,仅在2例散发患者中发现2个parap legin基因多态(2063G→A及2066G→A)。结论我国遗传性痉挛性截瘫患者中spastin基因突变较常见,atlastin和parap legin基因的突变率可能较低。     

无保护左主干病变导致急性心肌梗死合并心源性休克的临床分析北大核心CSCD

目的分析无保护左主干（ULMCA）病变导致急性心肌梗死（AMI）合并心源性休克（CS）患者的临床表现和近、远期预后。方法从1999年1月至2014年5月,共完成5798例急诊冠状动脉造影,入选经急诊造影证实梗死相关血管（IRA）为ULMCA的AMI患者。根据住院期间是否存在CS将患者分为休克组和对照组,收集入选患者的临床资料、造影及介入治疗资料。比较两组患者的临床情况和近、远期临床随访结果。分析ULMCA病变导致AMI患者合并CS的临床特点,以及合并CS对该类患者近、远期临床预后的影响。结果最终有58例ULMCA病变所致AMI患者纳入研究,其中31例患者（53．4％）存在CS。与对照组比较,CS组患者术前侧支循环2—3级的比率、最终的TIMI血流3级比率和左室射血分数较低。Logistic回归分析则提示仅有较低的术前侧支循环2-3级是住院期间发生CS的预测因素（OR=0．19,P=n02）。住院期间一共死亡23例（39．7％）,其中休克组住院病死率明显高于对照组（64．5％郴．11．1％,P〈0．01）。Logistic回归分析提示CS是住院期间死亡的预测因素（OR：6．94,P=0．01）。35例患者存活出院,完成中位数42．0个月（12．0,60．0）的随访。Kaplan—Meier分析估算无休克患者的总累计生存率为51．8％,而休克患者的总累计生存率仅为20．3％（Log—rank,P〈0．01）。COX多因素回归分析显示,住院期间存在CS则是ULMCA病变所致AMI患者总病死率的唯一预测因素（HR=4．67,P=0．004）。结论ULMCA病变所致的AMI患者病情凶险,CS发生率高,CS与该类患者近、远期病死率相关。     

一种简便快速构建基因突变体的有效方法

目的 介绍一种简便、快速、准确构建定点诱导突变体的新技术。方法 设计3条引物，一条突变引物，另外两条引物位于突变引物的两侧，并带上合适的酶切位点，以供突变片段构建完成以后可以克隆进入合适载体。然后以突变引物与其附近的反向引物一起扩增带突变位点的片段，再以此PCR产物片段为引物与剩下的另一条引物一起扩增，扩增出的片段带有合适的酶切位点可以克隆进入合适载体。结果 用该方法成功地在Parkin基因的7196bp处C→T和913bp处C→T构建成两种突变。结论 该方法简便、快速、准确，确保100％的突变率，可在任何基因上构建所需的点突变，且不需要购买任何试剂盒。     

人类间隙连接蛋白CX58基因的克隆

目的 利用同源性分析，克隆定位新的人类间隙连接蛋白基因，并探讨该基因和遗传性耳聋的关系。方法 将小鼠Cx57基因的编码区与美国国家生物信息中心（National Center for Biotechnology Information,NCBI)的表达序列标签数据库（database of expressed sequence tags,dbEST)进行BLAST（basic local alignment search tool）分析，在得到的代表人类新基因的EST序列构建重叠群上设计引物CX58F1/CX58F2和CX58R1／CX58R2，分别与cDNA文库及Ready cDNA载体臂上引物行巢式聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR)、cDNA末端快速扩增（rapid amplification of cDNA ends,RACE),获得cDNA后与大规模测序结果比较，定位该基因，并在常染色体显性遗传性耳聋家系中进行突变分析。结果 将利用同源性分析得到的9个人类新的EST，构建重叠群设计引物行巢式PCR、RACE，在肝、肾的Ready cDNA和胎盘cDNA文库中得到1个全长cDNA并命名为CX58。通过与大规模测序结果比较，将该基因定位于1p32.3-p34.1。12个常染色体显性遗传性耳聋家系中未检测到突变。结论 通过同源性分析，我们克隆定位了1个新的人类间隙连接蛋白基因CX58。该基因突变可能不是引起常染色体显性遗传性耳聋的常见原因或与该病无关。     

Ataxin-3相互作用蛋白A3IP的克隆与细胞及组织定位的初步研究

目的 根据前期筛选到的与ataxin-3蛋白羧基端相互作用的A3IP部分序列,进行A3IP基因的克隆,并探讨其细胞及组织定位情况.方法 应用生物信息学及Northern印迹方法克隆A3IP基因并检测其转录本在人体组织和人脑不同部位的表达情况;应用Western印迹及免疫荧光方法检测A3IP蛋白在细胞中的表达及定位情况;应用免疫组织化学染色方法检测A3IP蛋白在人体各组织和人脑不同部位的表达及定位情况.结果 对A3IP基因序列全长阅读框进行了cDNA克隆及序列拼接;检测了A3IP的3个转录本(1 kb、1.35 kb、6 kb)在人体不同组织和人脑不同部位的表达谱;获得了A3IP-pEGFP在COS-7细胞和人大脑皮质、小脑、肌肉、周围神经、肝脏、肾脏的表达及定位情况.结论 所克隆的A3IP基因编码ataxin-3的一种相互作用蛋白A3IP,其3个剪切本在人体多种组织和人脑不同部位广泛表达,是一种细胞胞浆蛋白.     

不完全外显的遗传性痉挛性截瘫一家系临床与致病基因排除定位分析

目的 描述一个遗传了4代的不完全外显的遗传性痉挛性截瘫(hereditary spastic paraplegia,SPG)大家系的临床特征,并进行致病基因排除定位分析.方法 对SPG家系内11例患者的临床资料进行回顾性分析,并采用荧光多重PCR、毛细管凝胶电泳、Linkage软件包,选择对已定位常染色体显性遗传致病基因位点附近微卫星标记进行连锁分析.结果 该SPG家系的11例患者的发病年龄2～10岁,表现为缓慢进展的双下肢僵硬无力,四肢肌张力轻度增高,双上肢为主的腱反射亢进,剪刀步态和病理征阳性,无小便失禁或尿频、感觉障碍、眼震、痴呆等;遗传学分析该家系符合常染色体显性遗传,但外显不完全,连锁分析和突变分析发现该家系与已知的常染色体显性遗传SPG致病基因位点不连锁.结论 该SPG家系具有典型的"单纯型"痉挛性截瘫临床特点,发病年龄早,上肢体征较下肢明显,遗传学分析不支持该家系与已定位常染色体显性遗传位点相连锁,是一种新的SPG亚型.