超声引导下腹腔内化学疗法对进展期胃癌癌性腹水患者疗效及免疫调控作用

目的观察超声引导下腹腔内化学疗法（化疗）对进展期胃癌伴癌性腹水患者的疗效及其免疫调控作用。方法进展期胃癌癌性腹水60例随机分为治疗组和对照组,治疗组行超声引导下腹腔化疗（EAP方案,VP16100mg／m^2＋表阿霉素60mg／m^2＋卡铂200mg／m^2）,对照组为EAP静脉化疗。结果治疗后,治疗组与对照组比较,肿瘤体积、癌性腹水治疗有效率、生活质量、免疫功能、中位生存期以及生存率均显著改善,不良反应发生率显著降低。结论超声引导下腹腔化疗可显著提高胃癌患者肿瘤近期有效率和癌性腹水近期有效率,并可显著改善生活质量,不良反应低,延长非手术胃癌患者的中位生存期和提高生存率,这可能与治疗后改善了免疫调控功能有关。     

miR-136对胶质瘤U251细胞生物学功能的影响

目的: 初步探讨miR 136对胶质瘤U251细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法: 选取胶质瘤U251细胞系,分别转染miR 136 mimic(模拟物组)和miR 136模拟物阴性对照(对照组),采用qRT PCR法检测转染效率,观察2组细胞miR 136表达差异;显微镜下观察转染24 h后细胞密度,并拍照记录;CCK 8法检测转染后细胞增殖活性;Transwell和划痕实验分别检测转染后细胞侵袭及迁移能力;检索miRnada生物信息学数据库,预测并分析miR 136下游靶基因;qRT PCR和蛋白质印迹法分别检测细胞中FZD4 mRNA和FZD4蛋白的表达。结果： 与对照组相比,模拟物组细胞miR 136表达水平明显升高(P<0.05);转染24 h之后,模拟物组细胞密度低于对照组;CCK 8检测显示模拟物组细胞增殖活性较对照组明显降低(P<0.05);Transwell和划痕实验显示模拟物组细胞侵袭和迁移能力较对照组降低;miRnada数据库分析显示FZD4是miR 136的下游靶基因;与对照组相比,模拟物组FZD4 mRNA和FZD4蛋白表达水平均明显降低(P均<0.05)。 结论： miR 136可能通过靶向调控FZD4基因的表达抑制胶质瘤U251细胞的增殖、侵袭和转移。     

肺炎嗜衣原体MOMP和人IL-2融合基因DNA疫苗的免疫原性研究

目的构建肺炎嗜衣原体(Chlamydophila pneumoniae,Cpn)主要外膜蛋白(MOMP)单基因及momp和人IL-2融合基因的真核表达载体并比较其免疫反应性,为研制Cpn核酸疫苗提供理论和实验依据。方法扩增Cpn momp及人IL-2基因并将二者融合,将momp和momp-IL-2分别克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体;制备纳米粒DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,免疫荧光组化法检测重组质粒在小鼠组织内的稳定表达;ELISA法检测小鼠血清中的特异性抗体和小鼠脾细胞培养上清中IFN-γ水平;MTT法测定脾淋巴细胞特异性增殖反应。结果成功制备了pcDNA3.1(+)-momp和pcD-NA3.1(+)-momp-IL-2的纳米核酸疫苗;Cpn momp单基因和momp-IL-2融合基因核酸疫苗均能刺激小鼠产生特异性抗体,且pcDNA3.1(+)-momp-IL-2能诱导小鼠产生更高效价的特异性抗体(P<0.05);pcDNA3.1(+)-momp-IL-2诱导小鼠脾细胞产生IFN-γ的量及对特异抗原的刺激指数明显高于pcDNA3.1(+)-momp。结论Cpn momp单基因核酸疫苗和momp-IL-2融合基因核酸疫苗均能刺激小鼠产生较强的体液免疫和细胞免疫应答;pcDNA3.1(+)-momp-IL-2的免疫效果强于pcDNA3.1(+)-momp。     

新药临床试验过程中的项目管理

 项目管理作为管理学的一个应用分支，已经越来越受到人们的关注，特别是在建筑、IT、制造等行业已经得到深入广泛的应用。由于项目管理特别适用于投资巨大、关系复杂、时间和资源有限的一次性工作任务，新药研发过程也需要借助项目管理。新药研发是一项有逻辑、有步骤的复杂过程，从实验室研究到新药上市，要经过合成提取、生物筛选、药理、毒理等临床前研究、制剂处方及稳定性实验、生物利用度测试和放大实验等一系列过程，还需要经历人体临床试验、注册上市和售后监督等诸多复杂环节^[1]。在这样一个复杂而庞大的系统工程中，能否进行有效的项目管理，对项目的成败起着关键作用。但项目管理在我国新药研发中，特别是在涉及人体用药安全的临床试验过程中尚未得到系统、成熟的应用，研究人员的项目管理思维和意识不强。因此，加强新药临床试验过程中项目管理的应用具有重要意义。 1 新药临床试验过程中应用项目管理的必要性 新药研发具有投入高和周期长的特点。在我国，一个新化学实体（new chemical entity，NCE）从发现先导化合物到获批新药证书，往往需投入上千万元资金，且这一过程往往持续数年甚至数十年。新药研发周期主要包括 4 个环节：①发现和甄别——药物基础研究和应用筛选，以确定目标临床试验药物； ②临床前研究——为确定药物疗效和安全性所进行的动物实验； ③临床研究与注册——药物人体安全性及疗效验证试验及资料整理报批注册； ④后续工作——新药申请复查和药物延伸研究^[2]。根据我国《药品注册管理办法》和《药物临床试验质量管理规范》规定，药物临床试验研究阶段 NCE 临床研究项目需逐项进行 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ 期共 4 期临床试验，从而进一步延长了创新药物的研发周期。由于药物临床研究涉及单位、人员较多，特别是为充分保护受试者利益，新药临床研究投入资金所占比重很大。在德国，临床试验经费约占整个新药开发经费的 92%^[3]     

表皮生长因子5'非编码区rs4444903单核苷酸多态性与儿童肾母细胞瘤易感性及预后因素的研究

目的 研究表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)5'非编码区rs4444903单核苷酸多态性(SNP)与儿童肾母细胞瘤易感性及病理分期的关系.方法 采用病例对照研究,收集临床病理确诊的儿童肾母细胞瘤外周血96例,及正常同龄儿童外周血200例,应用聚合酶链反应-连接酶特异检测技术(PCR-LDR)分析两组儿童外周血DNA中EGF rs444490位点的多态性,比较不同基因型与前列腺癌易感性及病理分期的关系.结果 Logistic回归分析显示,儿童携带EGF rs4444903 GG和GG+ GA基因型能增加罹患肾母细胞瘤的风险(OR =2.45,95％CI=1.12～4.87,OR=1.25,95％ CI=1.08～ 2.34,P＜0.05),与患儿病理分期呈正相关(Ⅲ-Ⅴ期vs Ⅰ-Ⅱ期:OR =2.28,95％ CI=1.30 ～4.48,P＜0.01),并且GG/GA携带者其EGF血清表达亦增高(P＜0.05).结论 EGFrs444490位点多态性与肾母细胞瘤易感性及其预后相关,携带GG/GA基因型的肾母细胞瘤患儿预后较差.     

肺炎衣原体热休克蛋白10的表达及对炎症因子的诱生作用

目的在大肠杆菌中表达肺炎衣原体(Cpn)热休克蛋白10(Hsp10),并观察该蛋白诱生巨噬细胞(MΦ)分泌TNF-α和IL-6等促炎因子的作用。方法将Hsp10基因克隆于pQE30载体,在大肠杆菌(E.coli)M15中表达重组蛋白rHsp10,经亲和层析获得纯化rHsp10。以不同浓度的rHsp10作用于小鼠MΦRAW264.7,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞因子TNF-α和IL-6。结果成功构建了pQF30/Hsp10基因,并在大肠杆菌M15中得到高效表达,该蛋白能诱导小鼠MΦ以时间、剂量依赖方式分泌TNF-α和IL-6。结论表达并纯化的rHsp10蛋白能诱导MΦ分泌TNF-α和IL-6等促炎因子。     

飞行时间质谱多基因检测系统检测心血管用药11个基因的性能验证研究

目的对飞行时间质谱多基因检测平台的检测性能进行验证,建立基于飞行时间质谱多基因检测平台的性能验证研究方案。方法选择2017年9月至2018年10月来自中国医学科学院阜外医院已测部分心血管用药相关基因位点的DNA标本998例和全血标本20例,其中男性512例,女性506例。18~30岁280例,31~64岁442例,≥65岁296例。用飞行时间质谱法对998份DNA标本心血管用药相关11个基因进行检测,检测结果与已知结果进行比对,评价998例已测标本符合率;选择20例全血标本,对心血管用药相关11个基因分别进行飞行时间质谱检测和Sanger测序,对比两次结果,以Sanger测序为金标准进行准确度评价。从998例DNA标本中选择部分样本进行以下研究,选择10份包含所有位点为野生型的基因组DNA,用飞行时间质谱检测,进行特异性评价;选择4份包含所有位点杂合基因型标本,梯度稀释后检测,评价位点的测定下限;选择14份包含中国人群所有常见位点基因型标本,进行批间和批内精密度评价;选择2份包含代表性峰形的野生和纯合突变标本各1份,进行抗干扰研究。结果该方法单次检测的符合率高于99.5%,飞行时间质谱平台与Sanger测序法检测完全一致,测定下限为0.4 ngDNA,批间和批内精密度均为100%,UNG酶的降解能力为10^5拷贝/μl的气溶胶,反应体系对基因组和PCR各中间产物气溶胶有很强的抗干扰能力,点样及检测过程中芯片不同基质间无交叉污染。结论飞行时间质谱多基因检测系统检测性能良好,可应用于临床检测,并且本文建立了基于飞行时间质谱平台多基因检测系统的性能验证研究方案,为广大科研和检验工作者研究该平台打下基础。     

《金匮要略》治利思想探骊

目前中医界论＂痢＂,总将其鼻祖归于＂诸病源候论＂名下,并已形成共识。然而,只要我们仔细分析论＂痢＂之起源,此本应归属于东汉末年张仲景所著的《伤寒杂病论》。本文认为：前贤仲景在《伤寒论》、《金匮要略》中,首创了＂利＂之理论,并从病因、病机、辨证论治、治疗方法、临床使用的具体方剂中描述了＂利＂及后世所指＂痢疾＂的辨证体系。仲景提出＂痢无止法＂的观点,至今仍为治＂痢＂之要法,首创的＂白头翁汤＂、＂桃花汤＂之治痢有效方剂,至今仍在沿用。细考其间,东汉末年,其字虚少实多,故而,通常一字多意,文字中有＂利＂而无＂痢＂。＂利＂、＂痢＂本为通假,故而＂痢＂之鼻祖,理应属仲景无疑。     

肺炎嗜衣原体热休克蛋白10经TLR2及TLR4调控THP-1分泌TNF-α

目的 探讨肺炎嗜衣原体(Cpn)热休克蛋白10(HSP10)诱导人单核细胞分泌炎症因子的作用及Toll样受体(TLR)2、TLR4与此作用的相关性.方法 制备Cpn HSP10(CHSP10)纯化蛋白,去内毒素活性后用不同浓度(0.5、1、5、10、20、30μ/ml)刺激THP-1细胞0、6、12、24、36、48、60 h,并比较蛋白不同处理组别中TNF-α的水平差异;以间接免疫荧光及RT-PCR鉴定THP-1细胞上的TLR4及TLR2;分离C3H系野生型和TLR4缺陷型小鼠巨噬细胞,以CHSP10刺激后检测TNF-α水平;用抗TLR2/TLR4单克隆抗体预孵育细胞,ELISA检测CHSP10刺激细胞前后TNF-α的变化.结果 CHSP10刺激THP-1细胞引起上清液炎症因子TNF-α水平显著增加,经加热等处理后蛋白诱生TNF-α的作用明显降低.THP-1细胞可检测到TLR2及TLR4的mRNA及蛋白表达,CHSP10诱生C3H系野生型小鼠细胞分泌的TNF-α明显高于TLR4缺陷型小鼠细胞,TLR2/4经单克隆抗体作用后均可显著降低CHSP10诱导THP-1分泌TNF-α的水平.结论 CHSP10可能作为炎症相关蛋白参与了Cpn对宿主细胞的致炎作用;并且TLR2及TLR4在该炎症刺激信号的传递过程中发挥一定的作用.