胶质纤维酸性蛋白的原核表达、纯化及鉴定

目的为获得高纯度的人胶质纤维酸性蛋白（GFAP）。方法从人脑胶质瘤组织中提取mRNA,采用RT-PCR的方法克隆GFAP基因全长序列,利用限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ将GFAP基因插入到原核表达载体pGEX4T2,对重组表达载体pGEX4T2-GFAP进行双酶切和测序鉴定。选择测序正确的质粒转化大肠杆菌BL21,用终浓度为1mmol/L的异丙基-β-D-硫酸代半乳糖苷（IPTG）进行诱导表达GFAP-GST融合蛋白。经亲和层析纯化获得GFAP融合蛋白,并通过SDS-PAGE和western blot进行鉴定。结果重组质粒经双酶切和测序鉴定证实插入序列准确无误。宿主菌BL21经IPTG诱导表达并纯化得到目的蛋白GFAP-GST融合蛋白,经SDS-PAGE鉴定分子量约为70～90kD,符合预期,westernblot证实该目的蛋白能被特异性抗人GFAP多克隆抗体识别。结论成功构建GFAP表达载体,并可通过原核表达获得高纯度的目的蛋白,为进一步开展相关研究打下基础。     

神经干细胞与胶质瘤微环境

神经胶质瘤的恶性比率逐年增高,尤其是中老年患者.多形性胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme,GBM)患者因其肿瘤基因的不稳定性、细胞异质性和广泛浸润性即使接受手术、放化疗,平均生存期也只有12-15个月[1].常规的放化疗并不能杀死所有的肿瘤细胞,如胶质母细胞瘤细胞通过下调P53基因[2]和上调DNA修复酶如O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶[3]躲避放化疗伤害.恶性胶质瘤患者迫切需要更有效的、分子水平的联合治疗方法.     

中央沟附近胶质瘤的诊断和手术治疗

目的提高中央沟附近胶质瘤的手术治疗效果,改善生活质量。方法回顾性总结1995年至2001年我科治疗的中央沟附近87例胶质瘤的临床表现、诊断和手术方式的选择与预后。结果87例胶质瘤中,肿瘤主体位于中央沟前38例,位于中央沟后30例,主体位于中央沟下方19例。临床上首发症状为癫痫的62例,以进行性一侧肢体无力15例,以头痛等颅内压增高症状为主要表现起病的10例。术后病理提示星形细胞瘤58例,少突胶质瘤细胞瘤20例,少突胶质细胞与星形细胞混合瘤6例,胶质细胞增生3例。按Kernohan分级分类,其中星形细胞瘤中星形细胞瘤Ⅰ级6例,星形细胞瘤Ⅱ级29例,星形细胞瘤Ⅲ-Ⅳ级23例;少突胶质细胞瘤中Ⅰ级6例,Ⅱ级14例。在肉眼下肿瘤全切除70例,次全切除17例。术后肢体功能障碍较术前减轻20例,不变25例,短期加重而后肢体恢复的有12例,加重30例,无手术死亡。结论术前要充分了解肿瘤的解剖位置和周围结构的毗邻关系,采用显微外科技术在软膜下切除肿瘤,保护中央沟静脉解剖和功能的完整,是手术的关键。     

亚低温对大鼠液压脑损伤后脑细胞外液中乳酸含量变化的影响

目的：探讨亚低温治疗颅脑外伤的脑保护机理。方法：本研究以大鼠为实验动物，采用液压脑损伤模型，以微量透析技术采集脑细胞外液（ＥＣＦ），观察中度脑损伤后脑ＥＣＦ中乳酸含量的变化，及伤前采用亚低温（３０℃）治疗对ＥＣＦ中乳酸含量的影响。结果：（１）大鼠中度损伤后，损伤区ＥＣＦ中乳酸含量显著升高，其升高值与伤后脑水肿的程度相关；（２）亚低温能显著抑制伤后ＥＣＦ中乳酸增加，减轻伤后脑水肿；（３）亚低温能抑制伤后高血压反应。结论：亚低温抑制伤后ＥＣＦ中乳酸堆积和高血压反应是其脑保护机理之一。     

男性垂体泌乳素腺瘤的显微手术治疗

目的分析总结男性垂体泌乳素腺瘤的诊断和治疗特点。方法对7年间33例男性垂体泌乳素腺瘤的临床特点和肿瘤的病理、内分泌、影像学及治疗特点进行分析。患者平均年龄39.2岁。临床表现以性功能、视力视野障碍多见。患者平均血清泌乳素水平为(2405.57±39.85)ng/ml,肿瘤直径为(29.9±10.4)mm,75.76%的肿瘤为侵袭性。结果显微手术全切除27例,次全切除6例。经手术及药物治疗后,患者泌乳素降至正常23例(69.70%,),明显下降7例(21.21%);26例性功能障碍患者14例恢复正常或改善;18例视力下降的患者16例视力恢复正常或改善;17例视野缺损的患者14例视野恢复正常或改善。结论男性泌乳素腺瘤侵袭性生长多见,泌乳素水平高,采取显微神经外科手术尽可能切除肿瘤,并辅助药物治疗可以取得满意效果。     

雌二醇对脑缺血大鼠海马血管内皮生长因子表达的影响

目的:探讨雌二醇对脑梗死/再灌注损伤大鼠海马区血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响.方法:雌性成年大鼠,双侧卵巢切除后随机分为3组.雌二醇治疗组给予苯甲酸雌二醇2 mg·kg-1·d -1腹腔注射,连续7 d;模型组、假手术组腹腔注射等量麻油.模型组和雌二醇治疗组分别建立大脑中动脉梗死(MACO)模型,缺血2 h后再灌注48 h.Western 印迹技术和RT-PCR技术分别检测VEGF蛋白及基因表达.结果:大脑梗死/再灌注损伤后VEGF蛋白、基因表达均增加,雌二醇治疗组VEGF表达高于模型组(P<0.05).结论:雌二醇增加脑梗死/再灌注损伤大鼠海马VEGF的表达.     

视神经慢性损伤相关差异表达cDNA文库的鉴定与分析

目的:对构建的猫视神经慢性损伤相关差异表达cDNA文库进行初步克隆、鉴定和分析.方法:用氯化钙转化法转化大肠杆菌进行cDNA文库扩增和蓝白斑筛选,每个文库随机挑取300个白色克隆用菌落PCR进行鉴定.对阳性克隆菌落进行DNA测序以获得差异表达基因片段序列.将测序所得的序列通过互联网用Blast程序查找日本国家DNA数据库进行同源性分析.用实时定量PCR验证差异克隆.结果:PCR鉴定获得1000个阳性菌落,测序获得674个EST片段,序列长度在200～800 bp之间.同源性分析结果提示4周正向文库得到14个同源基因,4周反向文库得到20个同源基因,8周正向文库得到23个同源基因,8周反向文库得到19个同源基因.这些基因可归类于能量代谢、物质转运、信号转导、基因转录、细胞损伤与修复、MHC分子等.实时定量PCR检测的4个克隆证实是差异表达序列.结论:本研究构建的视神经慢性损伤相关差异表达cDNA文库为进一步鉴定和研究慢性视神经损伤相关基因提供了实验基础.     

创伤性颈动脉海绵窦瘘合并蝶窦假性动脉瘤的诊断和治疗

目的 探讨创伤性颈动脉海绵窦瘘合并蝶窦假性动脉瘤的诊疗方法.方法 介入方法诊断和治疗6例创伤性颈动脉海绵窦瘘合并蝶窦假性动脉瘤患者.结果 5例出现反复鼻腔大出血;所有患者均行瘘口和假性动脉瘤球囊闭塞,2例颈内动脉保留,1例合并对侧间接型颈动脉海绵窦瘘行经面静脉-眼上静脉瘘口弹簧圈栓塞术.术后颅内杂音均即刻消失,结膜充血水肿2周～3个月内消退.无介入相关并发症.所有患者均行随访,无临床症状复发,均恢复工作.结论 车祸是致颈动脉海绵窦瘘合并蝶窦假性动脉瘤的主要原因;受力部位多集中在患侧眶额部到眶颧部的眶前外侧区;头颅MRI结合临床表现对于术前确诊该病非常有帮助;可脱球囊闭塞瘘口和假性动脉瘤或闭塞颈内动脉是安全、有效的治疗方法.     

Id2shRNA慢病毒载体的构建及其转染后对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的 构建能高效敲减分化抑制因子2 (Id2) 基因的短发夹状小干扰RNA(shRNA)慢病毒载体,并观察敲减Id2对胶质瘤细胞株U251增殖和凋亡的影响.方法 设计并合成特异性针对Id2基因的shRNA序列,将其构建到慢病毒载体pGCSIL-GFP中.以含有Id2基因的质粒为模板,扩增Id2基因cDNA序列的特异性片...