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三氟拉嗪诱发细胞凋亡及对DNA依赖蛋白激酶催化亚单位表达和P38磷酸化的抑制作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨三氟拉嗪(TFP)对肿瘤细胞生长的抑制作用和分子机制,寻找抑制肿瘤生长的作用靶分子。方法 用不同剂量TFP作用于人宫颈癌上皮细胞(HeLa) ,体外细胞计数绘制生长曲线;荧光染料染色及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;γ射线及TFP处理细胞观察TFP对细胞辐射敏感性的影响;Western印迹分析蛋白表达或磷酸化。结果TFP作用后HeLa细胞的生长受到抑制,对γ射线的敏感性增加,且随着剂量的增加细胞凋亡的比率也增加。TFP还可有效诱导DNA修复蛋白DNA依赖蛋白激酶催化亚单位(DNA-PKcs)被切割,且可抑制辐射诱发的P3 8的磷酸化。结论 TFP可抑制肿瘤细胞的生长,对DNA-PKcs的表达和P3 8的磷酸化都有抑制作用 相似文献
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α-粒子诱发BEP2D细胞恶性转化中DNA修复基因DNA-PK的表达和突变分析 总被引:1,自引:0,他引:1
目的: 研究α-粒子诱发人支气管上皮细胞(BEP2D)恶性转化中DNA修复基因DNA-PK的结构和表达变化.方法:用Northern blot杂交检测基因转录水平,聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析基因编码序列结构变化.结果:癌变细胞中DNA修复基因Ku70(XRCC-6)的编码碱基发生突变,第1 148~1 153位点由AGGATC突变为GAGTAC,致使编码的氨基酸由RI变为EY;细胞恶性转化过程中,DNA修复基因DNA-PKcs(XRCC-7)的表达发生改变,在恶性转化早期即α-粒子照射后第21代就已被抑制,但发生癌变(第35代)后,部分细胞克隆的该基因表达又重新上调.结论:DNA修复基因DNA-PK的结构和表达的变化,导致细胞DNA修复能力缺陷,基因组不稳定性增加,是α-粒子癌变的分子机制之一. 相似文献
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患风湿性关节炎等疾病时超氧化物自由基(O-·2)得不到充分清除,O-·2及其衍生的活性氧会损伤机体。用牛SOD治疗,可使其病情大为减轻,取得很好疗效,但异体酶可能发生抗原抗体反应,而用人SOD却无此缺点。我们试制成人红细胞SOD冻干制剂,完成了临床试验前一系列实验,已取得临床试验批准文号[(97)制申体第02号]。1 制剂质量按照血液制品的要求从健康采血员抽取抗凝血,分离出红细胞,按照McCordFridovich法提取SOD,但有部分改进,其试制品达到电泳纯、光谱纯,而且等电点、铜锌含量及亚基分子质量等理化常数符合纯S… 相似文献
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目的 了解不同组织来源癌细胞株和人体肿瘤组织原代细胞的DNA双链断裂损伤修复的个体差异性,探寻预测癌细胞辐射敏感性的生物指标。方法 60Co γ射线照射诱发DNA损伤,脉冲电场凝胶电泳检测DNA双链断裂损伤修复,细胞克隆形成能力法检测细胞辐射敏感性。结果 8个不同组织来源癌细胞株的辐射敏感性有较大的差异(D0为0.65~2.15 Gy),不同细胞株20 Gy γ射线照射诱发产生的DNA双链断裂原初损伤有一定的差别,但与细胞辐射抗性无相关性。辐射敏感细胞SX-10的DNA双链断裂修复缺陷发生在早期快速修复相,而A2780细胞的修复缺陷是发生在晚期慢速修复相。20 Gy照射修复2 h后DNA双链断裂残留量与细胞辐射敏感性指标D0或SF2值有显著的相关性。不同个体患者脑肿瘤组织原代细胞之间,辐射诱发DNA双链断裂的修复反应存在明显差异,修复2 h后残留损伤的个体差异性分布类似于癌细胞株。结论 DNA双链断裂残留损伤与癌细胞辐射抗性有显著相关性,可作生物指标预测肿瘤组织细胞对放射治疗的反应性。 相似文献
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目的克隆人AP内切核酸酶基因(hape)cDNA全长编码序列,研究hape反义核酸对细胞辐射敏感性和H2O2细胞毒的影响。方法反转录PCR克隆人hapecDNA,应用基因重组技术构建真核反义表达载体,用Lipofectamine介导基因转染,细胞克隆形成法分析细胞存活。结果从人胚肺(HEL)细胞中克隆出hapecDNA全长编码序列,构建了hape的真核反义表达质粒pCIN/AShape并转染HOC8细胞,研究表明hape反义核酸,提高了HOC8细胞对γ射线和H2O2损伤的敏感性。结论利用分子生物学技术手段,阻断细胞DNA修复过程中的某一环节,是细胞辐射或化疗药物增敏的一种有效途径。 相似文献
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目的 研究α粒子诱发人支气管上皮细胞(BEP2D)癌变细胞系BERP35T-1和BERP35T-4的DNA断裂损伤修复能力,分析其DNA断裂修复基因XRCCs系列的mRNA表达。方法 脉冲电场凝胶电泳法检测DNA双链断裂,RT-PCR分析DNA修复基因的mRNA表达。结果 恶性转化细胞系BERP35T-1和BERP35T-4受0~150Gyγ射线照射后修复4h的DNA断裂残留损伤显着高于亲本BEP2D细胞,mRNA表达分析显示修复基因XRCC2、XRCC3和Ku80(XRCC5)表达下调2.5~6.5倍,而BERP35T4细胞中DNAPKcs(XRCC7)表达上调2.4倍。结论 α粒子诱发恶性转化细胞系的DNA链断裂修复机理缺陷,其中部分原因是DNA修复基因的表达抑制。DNA修复缺陷将导致细胞基因组不稳定性,α粒子诱发细胞恶性转化机理可能与此相关。 相似文献
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目的:克隆低剂量辐射诱导基因,研究辐射对其转录调控作用和生物学功能。方法:用mRNA差异显示技术分离辐射诱导表达基因,用RACE技术获取cDNA旁侧序列,Northern杂交分析基因的转录调节,生物信息学分析基因的结构和功能。结果:获得包括3'端在内的辐射诱导新基因LRIGx的cDNA片段,序列同源性比较显示与人染色体20ql 1.2-12一段DNA高度同源(>99%),Northern杂交结果揭示该基因转录子全长约8.5kb,在0.2Gy照射后2h出现诱导表达,4h后转录子水平为对照细胞的5倍多,也受0.02Gy更低剂量照射诱导表达,2Gy大剂量照射后1h出现短暂诱导表达,但不如低量照射明显,2h后恢复正常水平,生物信息学分析结果显示该基因编码产物含有解旋酶活性保守区,结论:分离鉴定出一低剂量辐射反应基因,其编码蛋白可能参与DNA代谢(如修复)等细胞辐射反应过程。 相似文献
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DNA-PKcs反义核酸增强HeLa细胞对辐射及化疗药物顺铂的敏感性 总被引:4,自引:0,他引:4
目的构建表达DNA-PKcs反义核酸的真核表达载体,建立DNA—PKcs表达被反义核酸抑制的细胞模型。方法采用RT-PCR扩增DNA—PKcs的cDNA片段,DNA重组技术构建四环素控制表达的真核表达载体;利用Lipofectamine介导基因转染,Western blot分析鉴定反义核酸抑制DNA—PKcs表达的细胞模型;细胞克隆形成法和细胞生长曲线分析细胞对UV和顺铂的敏感性。结果克隆了DNA-PKcs 5’端320bp cDNA片段,重组于tet启动子控制表达质粒pCl^neo-Tet-splice,转染Hela细胞,获得3个稳定转化克隆;Western blot结果表明细胞中DNA-PKcs表达受到反义核酸的抑制,并且细胞对紫外线辐射和顺铂敏感性增加。结论成功建立了DNA-PKcs表达受到反义核酸抑制的细胞模型,抑制DNA-PKcs表达提高了细胞的辐射和顺铂的敏感性。 相似文献
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西妥昔单抗联合化疗药物的方案优化及其机制研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)的单克隆抗体西妥昔单抗(Cetuximab,C225)与化疗药物联合作用于大肠癌和肺癌细胞的最佳联合方案及其联合机制。方法:采用MTT法测定不同药物单药、两药及三药联合分别对大肠癌细胞LoVo和肺腺癌细胞A549的IC50值;计算不同联合方案的联合指数(combination index,CI),以确定最佳联合方案;Western blot法检测不同给药方案对EGFR下游信号通路的关键分子AKT、MAPK磷酸化表达的影响;流式细胞仪检测不同联合方案对细胞周期分布及凋亡比例的影响。结果:C225与化疗药物联合可增强其对细胞的杀伤作用,且以先化疗药物、后C225的序贯方案协同作用最强。先化疗药物、后C225的序贯方案对AKT、MAPK磷酸化的抑制明显强于其它联合方案,并且能诱导更多肿瘤细胞发生凋亡以及产生G2/M期阻滞。结论:C225与化疗药物联合存在最佳联合方案,其机制可能与药物对EGFR下游信号通路关键分子的磷酸化抑制及促进细胞凋亡和影响细胞周期分布有关。 相似文献