MICM综合分析在骨髓增生异常综合征诊断中的应用效果

目的 探讨细胞形态学、免疫学、细胞遗传学、分子生物学(简称MICM)综合分析在骨髓增生异常综合征(MDS)诊断中的应用效果,以及存在的问题。方法 选取2021年1月至2021年12月就诊于该院血液病医学中心的60例外周血细胞减少(至少1系血细胞减少)且形态学疑诊为MDS的患者作为研究对象,均不同程度完善MICM等检测。采用Kappa检验分析不同技术诊断MDS的一致性,并以患者临床诊断结果为判断标准,计算各技术的灵敏度、特异度和准确度。结果 Kappa检验分析结果显示,60例患者骨髓涂片(BMS)、骨髓活检(BMB)、流式细胞免疫学(FCM)、细胞遗传学(CGM)诊断MDS的一致性较差(Kappa<0.750),与BMS比较,诊断MDS一致性从高到低依次为FCM、CGM、BMB(Kappa=0.344、0.099、0.075)。BMS、BMB、FCM、CGM和MICM综合分析诊断灵敏度分别为85.11%、84.62%、90.48%、75.86%、95.35%,特异度分别为71.43%、28.57%、66.67%、20.00%、 90.91%,MDS诊断率分别为74.07%、40.7...     

3种G-CSF动员224例外周血干细胞效果比较

目的比较3种粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对外周血干细胞的动员效果。方法我科自体外周血干细胞移植病人224例,采用3种粒细胞集落刺激因子(吉赛欣、欣粒生、惠尔血)进行外周血干细胞动员,对干细胞动员情况、干细胞质量、移植后造血重建和药物毒副作用进行比较。结果224例病人全部移植成功,其动员效果、干细胞质量及在移植后造血重建中的临床效果差异均无显著性,毒副作用小。结论吉赛欣和欣粒生两种国产制剂及惠尔血能可靠用于外周血干细胞动员及造血重建,尤其是国产制剂的价格明显低于进口产品,在有效保证动员效果的同时大大减轻了病员的经济负担,值得临床应用推广。     

Cx43和GFP双基因共表达重组腺病毒载体的构建和鉴定

目的构建间隙连接蛋白43（Cx43）和绿色荧光蛋白（GFP）双基因共表达重组腺病毒载体。方法利用PCR方法从真核表达载体pcDNA3.0-Cx43扩增Cx43片断,利用DNA重组技术,将目的基因Cx43克隆至含有报告基因GFP的穿梭质粒pAdTrack-CMV,然后在BJ5183细胞中将重组穿梭质粒pAdTrack-Cx43与pAdeasy-l质粒进行同源重组,产生重组腺病毒载体pAd-Cx43-GFP,用PacⅠ单酶切鉴定重组载体;将pAd-Cx43-GFP转入293细胞中包装,荧光显微镜观察报告基因GFP的表达,Western blot方法检测293细胞中Cx43表达。结果（1）通过PCR方法从载体pcDNA3.0-Cx43扩增出单一条带,与Cx43片断大小相符;（2）重组穿梭质粒pAdTrack-Cx43经NotⅠ/XhoⅠ双酶切后,电泳可见2个大小约为9、1kb条带,证明pAdTrack-Cx43构建成功;（3）同源重组产物pAd-Cx43-GFP经PacⅠ酶切后,电泳可观察到2个大小约为31、4kb左右条带,与预期结果相符,提示同源重组成功;（4）荧光显微镜下观察可见转染pAd-Cx43-GFP后293细胞在培养1-2d即有绿色荧光表达;（5）利用WesternBlot法检测到转染pAd-Cx43-GFP后293细胞中Cx43的表达较未转染组增强。结论Ad-Cx43-GFP重组腺病毒载体构建成功。     

HIF-1α基因miR RNAi慢病毒载体的构建与鉴定

目的 构建人HIF-1α的miR RNAi慢病毒载体.方法 利用已经构建成功的针对人HIF-1α基因的miRNA干扰质粒pcDNATM6.2-GW/EmGFP-HIF-1α miR,通过BP/LR反应,将EmGFP-HIF-1α-miR表达框整合重组到产毒质粒pLenti6/V5-DEST中测序鉴定,用PLP1、PLP2和PLP/VSVG质粒共转染包装293FT细胞产毒,并利用GFP蛋白表达水平进行滴度测定.结果 经测序鉴定证实成功构建针对人HIF-1α基因的miRNA慢病毒干扰载体pLenti6/V5-GW/EmGFP-HIF-1α miR.结论 成功构建针对人HIF-1α基因的miRNA慢病毒RNA干扰载体.     

裸鼠造血微环境损伤实验动物模型的建立

目的建立适合移植实验使用的裸鼠造血微环境损伤动物模型。方法分别用3．5Gy、5Gy、6．5Gy、8Gy4个^60Coγ辐射剂量照射裸鼠，检测经过辐照后各组裸鼠1、3、5、7、14、21d血象变化，检测辐射后1、7、14、21d裸鼠骨髓基质CFU—F形成情况，用流式细胞仪检测辐射后1、7、14、21d骨髓基质细胞VCAM-1的表达。结果8．0Gy辐射剂量裸鼠死亡率100%；3．5Gy、5Gy、6．5Gy辐射剂量组裸鼠的造血损伤均能在辐射后21天之内自我恢复；6．5Gy组骨髓CFU—F于移植后7d（22±6）、14d（33±6）较3．5Gy、5Gy组均具有显著降低（P〈0．01），VCAM-1表达于7d（21．67±7．45）、14d（22．33±9．07）、21d（23．33±4．51）较对照组显著降低（P〈0．01）、较3．5Gy组差异有显著性（P〈0．05），21d（23．33±4．51）较5Gy组（34．00±4．36）差异有显著性（P〈0．05）。结论6．5Gy是裸鼠造血微环境损伤实验动物模型的适宜辐射剂量。     

Effects of anti-CXCR4 monoclonal antibody 12G5 on proliferation and apoptosis of human acute myelocytic leukemia cell line HL-60

Objective:To investigate the expression of CXCR, on HL-60 cell line and the proliferation, apoptosis of HL-60 cell line cocultured with bone marrow stromal cells, so as to assess the possibility of 12G5. an anti-CXCR4 monoclonal antibody, in eradicating the minimal residual disease. Methods:The activity of SDF-1 was inhibited by 10μg/ml 12G5. After treatment with 12G5. the status of adhesion was observed, and the adhesion rates, apoptosis and cell cycles were detected after 24 h of treatment. Cell growth rates were measured by trypan blue exclusion. Cell growth curve was plotted, and the expression of PCNA and apoptosis related protein including PCNA, Bcl-2 and Fas were detected with immunohis-tochemical technique. Results :(1) There was middling degree expression of CXCR4 on HL-60 membrane. From 0 h to 6 h, as the time of 12G5 incubation along, the expression of CXCR4 decreased gradually. (2) After treatment for 24 h, the adhesion rates in the experiment group and the control were (39. 4±7. 9)% and (51. 4±5. 9)%, respectively. (3)After treatment for 24 h, the percentage of HL-60 cells in G0/G1 phase were (55. 21±4. 9)%, and that in S phase and G2/M phase were (30. 40±4. 1)% and (14. 39±5.2)%, respectively, with the corresponding proportions being (44. 67±2. 2) % , (45. 30±3. 7)% . and (10. 03±2. 6)% in the control. (4) The percentage of apoptotic HL-60 cells was (8. 95±1. 7)% in the experiment group, compared to (3. 97±2. 4)% in the control. (5)The survival rates of HL-60 cells decreased markedly at 48 h to 96 h, and the proliferation slowed down at this time duration. (6)The expression of PCNA and Bcl-2 down-regulated significantly, but the Fas protein expression was up-regulated. Conclusion :12G5 could inhibit the capability of adhesion and proliferation of HL-60 cells and it can induce more cells to enter G0/G1 phase and promote apoptosis. It may be helpful by inhibiting the bioactivity of SDF-1 with 12G5 in the therapy of marrow residual disease.     

造血干细胞移植患者院外随访的实施及体会

目的提高干细胞移植患者的临床效果和生活质量。方法建立移植后随访观察表和登记制度,采取电话和门诊随访,建立电子文档登记,指导患者后续治疗并监测其病情变化。结果 85.25%的患者坚持了门诊随访,43%的患者接受了用药和临床护理指导。随访患者院外感染发生率较未随访患者低。结论坚持对造血干细胞移植患者出院后的长期规范化随访,有利于患者的后续治疗,可减少移植后相关并发症的发生,同时达到早期发现和控制并发症的目的,提高移植患者的总生存率,改善生活质量。     

慢性粒细胞性白血病初诊时合并恶性淋巴瘤2例及文献复习

慢性粒细胞性白血病是一种骨髓造血多能干细胞克隆性恶性血液病,是骨髓增殖性疾病之一。恶性淋巴瘤是原发于淋巴结或身体其他淋巴组织的恶性肿瘤。两种血液系统恶性疾病在同一病人身上造和较为罕见,据文献报道［１］,迭和淋巴瘤的白血病类型以急非淋多见,其次为急淋,慢性粒细胞性白血病少见,且初诊时迭和者更少。我科１９９０年、１９９８年各收治一例,现报道如下： 病例１：谢某,男,５７岁。１９９０年７月出现反复鼻出血伴头昏、乏力、无畏寒、发热,骨关节疼痛。２月后出现刺激性咳嗽,颜面浮肿,胸片提示右上纵隔增宽。于１９…     

自体外周血干细胞移植联合生物治疗及长间歇维持化疗序贯治疗成人急性非淋巴细胞白血病的临床研究

目的 评价大剂量化疗、自体外周血干细胞移植、生物治疗,长间歇维持化疗序贯治疗成人急性非淋巴细胞白血病(ANLL)的疗效.方法 32例成人急性非淋巴细胞白血病患者首次缓解并经3个周期大剂量阿糖胞苷强化治疗后,行自体外周血干细胞移植,预处理方案采用MAC、CEAC等,造血重建后予以大剂量IL-2生物治疗4个疗程,之后每3～4个月予以长间歇化疗1次,共维持2年,常用方案包括TA、MA、HEA 等.结果 32例患者移植后均成功重建造血,无一例移植相关死亡.长间歇维持化疗满2年的12例中,有8例存活;存活中位时间为确诊后1268(953-1926)d,移植后986(725-1742)d,平均生存时间为1475.7 d,3年无病存活率为(66.7±8.1)%;其余维持化疗还未到2年的20例患者中,有2例复发(10.0%),其中1例死亡(5.0%),其余18例至今病情稳定.结论 大剂量化疗、自体外周血干细胞移植、生物治疗、长间歇维持化疗序贯治疗成人急性非淋巴细胞白血病,治疗相关死亡率低,无病生存率较高,可作为改善成人ANLL治疗效果的重要措施.