活化性杀伤细胞免疫球蛋白样受体阳性的NK细胞对靶细胞的杀伤作用

Objective To study the killing effects of the killer cell immunoglobutin-like receptors (KIR) KIR2DS1-positive natural killer (NK) cells against acute, myeloid leukemia (AML) target cells, and to explore the KIR, human leucocyte antigen-Cw, and Cw loci (HLA-Cw) of NK cells, and, HLA-Cw of target cells mismatches destruction mechanism. Methods High-purified NK cells separated by DNYAL bead negative selection from healthy donor peripheral blood were taken as effector cells, and the freshly isolated bone marrow mononuclear cells from newly diagnosed AML patients as target cells. The anti-CD158a, CD158b monoclonal antibody was used to block inhibitory KLR receptors of NK cells (such as: KIR2DL1, KIR2DL2, KIR2DL3). The NK cells cytotoxicities against target cells before and after KIR blockades were detected by MTT reduction assay in vitro. Polymerase chain reaction and sequence specific primers (PCR-SSP) genotyping techniques were used to detect HLA-Cw, KIR gene of the healthy donors and patients. NK cells and target cells were divided into group C1 (expressing HLA-Cw 01, 03, 07, 08, 12, 14, 16 alleles), C2 group (expressing HLA-Cw 02, 04, 05, 06, 15, 17, 18 alleles) and the C1/C2 group (co-expressing the alleles in C1 group and C2 group) based on HLA-Cw. Results The purity of NK cells analyzed by flow cytometry was (90.8±6.08)%, and the killing effects of NK cells were significantly enhanced after inhibitory KIR blockades (t=-3.00, P=0.005). The cell lysis in C1 group, KIR2DS1+ NK cells against C2 group target cells (57.37±1.40)% was significantly higher than that against C1 group (44.19±4.67) % and C1/C2 group (36.77±6.56)% target cells (F= 11.87, P = 0.021), furthermore the differences in cell lysis among the above three groups become more evident after the inhibitory KIR blockades (F = 18. 72, P=0. 009). Conclusions The activity of NK cells was increased after the inhibitory KIR blockades, and the killing activities of KIR2DS1+ NK cells were higher than KIR2DS1 NK cells. The incompatibility between KIR, HLA-Cw of NK cells and HLA-Cw of target cells mediated NK alloactivation, realizing "missing self" recognition, and enabling NK cells cytotoxieity against targets.     

负载U937细胞冻融抗原的DC诱导CTL的特异性杀伤

树突状细胞 (DC)作为重要的专职抗原提呈细胞 ,其抗原提呈能力远强于巨噬细胞和B细胞等抗原提呈细胞。因而 ,以DC为中心的免疫治疗是肿瘤生物学治疗的主要方向之一。我们应用当前普遍采用的rhGM CSF、rhIL 4培养体系 ,自骨髓单个核细胞诱导产生CD14 - CD1a 的前体DC ,使其负载     

GM-CSF+IFN-α诱导CML患者骨髓单个核细胞分化的树突细胞的免疫应答

目的:为研究临床注射用IFN-α GM-CSF诱导慢性髓性白血病(CML)患者的骨髓单个核细胞(BMMNC)向树突细胞(DC)的分化及其免疫效应。方法:将取8例CML慢性期患者的BMMNC,接种于用含100 mL/L人AB血清的RMPI1640培养液中,加入不同细胞因子的组合(A组:GM-SCF IL-4;B组:临床注射用IFN-α GM-CSF)后进行培养。培养8 d后,在倒置显微镜下观察DC的形态,用流式细胞术检测细胞上的表面标记。采用异基因混合淋巴细胞反应(allo-MLR)检测DC刺激健康供者外周血淋巴细胞增殖的功能,用MTT比色法检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)特异性杀伤白血病细胞的活性。结果:在不同细胞因子组合诱导下分别培养诱导8 d后的DC,其特征性表面标记(CD80、CD86、HLA-DR、CD83、CD1a)的表达率均高于培养前的DC(P<0.05);但培养8 d的两组DC表面标记的表达率无明显差异。allo-MLR在DC与淋巴细胞之比为1∶10时,B组的刺激指数高于A组(P<0.05)。DC能够刺激异体T淋巴细胞产生特异性的CTL。结论:CML患者的BMMNC在GM-CSF IFN-α诱导下培养后分化的DC可较强地刺激淋巴细胞增殖并可杀伤患者的白血病细胞,有望用于CML的免疫治疗。     

BAFF分子在部分肾移植受者外周血淋巴细胞异常高表达及其可能的生物学意义

目的：分析BAFF分子在肾移植受者外周血淋巴细胞的表达情况以及初步分析其异常表达的生物学意义。方法：以来院随访的肾移植受者为研究对象,采集患者外周血,以EDTA-Na2抗凝。采用单色和多色标记的免疫荧光分析法,分析BAFF分子在外周血淋巴细胞的表达情况,同时检测淋巴细胞CD3、CD4、CD8、CD134、CD25和CD127的表达。结果：共分析了86位肾移植受者。BAFF分子在受者外周血淋巴细胞的表达率分别介于0.18%至76.97%之间。以15%为界将所有数据分成两组（表达率〉15%组和表达率〈15%组）,对所获得的数据进行统计分析。在BAFF分子表达率〉15%组其BAFF分子表达的平均值为36.91%;BAFF^＋细胞群的增加与外周血CD4^＋/CD8^＋比值、与循环中CD4^＋CD25^＋CD127^-/low T细胞群等没有显著相关性;但是与循环中CD134^＋ T细胞群和CD4^＋CD134^＋ T细胞群的增加存在显著相关性（P〈0.01和P〈0.05）,具有统计学意义。而BAFF表达率〈15%组所检测的相关指标均没有统计学意义。结论：BAFF分子在部分肾移植受者外周血淋巴细胞的异常高表达可能与移植排斥反应相关。     

Ph1染色体的急性双表型白血病的诊断及其预后的探讨

目的观察Ph^1染色体急性双表型白血病（BAL）生物学特征和治疗预后。方法患者骨髓标本分别进行细胞形态学及细胞化学染色，确定其FAB类型；用流式细胞仪对直接免疫荧光标记的骨髓单个核细胞进行免疫分型；采用改良的热处理姬姆萨（RHG）显带技术进行核型分析，同时应用RT-PCR检测ABL／BCR融合基因和MDR1耐药基因。治疗采用针对AML、ALL或二者兼顾的方案。结果Ph^1染色体急性双表型白血病（BAL）治疗效果差，生存期较短。结论Ph^1染色体急性双表型白血病（BAL）具有独特的临床生物学特征。     

医院麻醉药品的管理使用现状以及干预分析

目的:探讨医院麻醉药品的管理使用现状以及干预分析.方法:选择我院2014年7月～2016年6月麻醉药品处方作为研究对象,选择2014年7月～2015年6月我院处方共1200张作为对照组,选择2015年7月～2016年6月处方共1200张作为观察组,观察组加强麻醉药品的管理干预,分析比较医院麻醉药品的管理现状以及干预之后的使用情况.结果:干预之前麻醉药品使用频率较高的为盐酸布桂嗪注射液、盐酸吗啡注射液和盐酸哌替啶注射液,以注射液为主,干预之后口服用药的使用频率增加,使用较高的为硫酸吗啡缓释片、盐酸吗啡注射液和盐酸羟考酮缓释片,干预前后麻醉药品处方分布发生了很大的改变,差异具有统计学意义(P<0.05);干预之后盐酸布桂嗪注射液、盐酸哌替啶注射液和盐酸吗啡注射液的DDDs值明显下降,硫酸吗啡缓释片明显上升,干预前后麻醉药品DDDs发生了很大的改变,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:医院麻醉药品的使用还存在不合理的情况,严格按照《处方管理办法》以及《麻醉药品和精神药品管理条例》中的规定管理使用,能够促进麻醉药品的合理使用.     

米托蒽醌为主的化疗方案对CD34+高表达白血病的疗效观察

目的进一步探讨米托蒽醌(MTZ)在急性白血病(AL)化疗中的作用特点,提高临床对难治性白血病的化疗疗效和AL的完全缓解(CR)率和无病生存率(FDS)。方法57例CD34 抗原高表达的AL患,随机选择3种常规化疗方案(MA／MAE、DA／DAE、HA／HAE),联合化疗1～2个疗程后分别比较缓解率、骨髓抑制及其它毒副作用;同时骨髓白血病细胞体外培养72h,进行药物杀伤效应实验,分别比较MTZ、柔红霉素(DNR)、高三尖杉酯碱(HHT)在体外对白血病细胞不同分化阶段的抑制作用。结果以MTZ为主的MA／MAE方案有效率最高,急性髓系白血病(AML)为80．0％(24／30),比DA／DAE和、HA／HAE方案高28．8％和56．9％;急性淋巴细胞白血病(ALL)的COMP方案有效率为92．6％(25／27),比CDOP方案高27．4％。药物抑制试验显示MTZ对分化较早期阶段的CD34^ 白血病细胞的抑制显高于DNR和HHT。结论MTZ具有较强的抗白血病活性,临床骨髓抑制明显和较少产生耐药,可能与其主要作用于白血病细胞的分化较早阶段有关。     

急性髓系白血病患者hDMP1表达特点及临床意义

目的探讨人类细胞周期调节蛋白依赖性Myb样蛋白1(hDMP1)在急性髓系白血病(AML)中的表达及其临床意义。方法 93例初诊AML患者及19例健康志愿者(对照组)骨髓标本,以β胆色原脱氢酶(GAPDH)表达水平为内参,应用实时定量RT-PCR方法检测hDMP1及肾母细胞瘤基因(WT1)的表达水平。分析hDMP1表达水平与患者临床资料、染色体核型的关系。结果AML患者骨髓细胞中hDMP1在表达水平较对照组显著降低(476.6vs.2103.0)(P<0.01),WT1基因表达水平较对照组显著升高(202.6vs.1.2)(P<0.01)。hDMP1和WT1基因表达水平与患者性别、年龄、有无肝脾淋巴结肿大、起病时外周血WBC计数、骨髓中原始细胞比例、AML亚型、染色体核型分组无关。结论 AML患者hDMP1的低表达伴随WT1基因高表达,两者均参与AML发病。     

正常人骨髓间充质干细胞体外对K562细胞生长及分化抗原表达的影响

目的 探索正常人骨髓间充质干细胞(MSCs)对K562细胞增殖及表面分化抗原表达的影响.方法 分别将K562细胞悬浮培养及与MSCs黏附培养,绘制K562细胞生长曲线;用流式细胞术检测K562细胞周期及表面分化抗原的表达.结果 与悬浮培养比较,与MSCs黏附培养的K562细胞增殖受抑,G0/G1期细胞增加(P<0.05),G2/M期细胞增加(P<0.05),而S期细胞减少(P<0.05);但悬浮培养与黏附培养在细胞分化抗原的表达上没有明显的影响.结论 K562细胞与MSCs黏附培养可以抑制K562细胞的生长,但对其分化没有明显的影响.     

供鼠细胞经氟达拉滨处理后移植对aGVHD的影响

目的 探讨临床注射用氟达拉滨对大鼠同种异基因骨髓移植(Allo-BMT)后造血重建及急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影响.方法 建立大鼠Allo-BMT模型,以清洁级Wistar大鼠为供鼠,清洁级SD大鼠20只随机分为A、B、C三组,受鼠接受全身照射(TBI)6.0Gy作为清髓性预处理.4h后,A组输注生理盐水作为对照组,B组经尾静脉输注供鼠骨髓及脾混合单个核细胞,C组经尾静脉输注用氟达拉滨体外培养24h的供鼠骨髓及脾混合单个核细胞.移植后每天观察三组受鼠造血恢复情况及aGVHD的发生情况.结果 移植后B、C组大鼠的外周血像平均恢复时间分别为(18.50±1.05)和(15.17±1.47)d(P＜0.05).A组大鼠的血像持续降低至死亡.临床aGVHD评分,B组明显高于C组[(7.33±1.63) vs. (4.67±1.23)分,(P＜0.05)].肝脏和结肠病理分级比较,B组以Ⅳ～Ⅴ级、C组以Ⅱ～Ⅲ级aGVHD病理变化为主,两组差异显著(P＜0.05).结论 大鼠Allo-BMT模型中,经氟达拉滨体外培养的供鼠细胞能显著减轻受鼠的aGVHD.