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目的为建立抗Sm自身抗体检测方法,自行克隆、表达和鉴定细胞核抗原Sm B′。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,从HL-60细胞株中克隆Sm B′全长基因,将PCR产物直接进行TA克隆、鉴定及测序,再定向克隆至pGEx-5T载体中,转入大肠杆菌BL-21,阳性克隆鉴定后在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下表达,产物行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(western blot)鉴定。结果PCR产物约为700 bp,与预期657 bp接近,测序结果与GenBank核酸数据库报道完全一致。pGEX-5T-Sm B′重组阳性克隆酶切鉴定正确,SDS-PAGE和western blot结果显示融合蛋白分子量为51 000,具有与抗Sm B′抗体的反应性。结论成功克隆表达核抗原Sm B′,为建立抗Sm自身抗体检测方法奠定了基础。 相似文献
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目的:评价零切颈椎间融合器在颈前路颈椎融合术中的应用价值。方法:选取2017年6月至2018年7月阳春市中医院收治的30例行颈前路颈椎融合术患者,所有患者均应用零切迹颈椎间融合器,分析治疗总有效率及并发症,对比治疗前后神经功能恢复情况、疼痛程度、椎体高度、Cobb角、椎体曲度。结果:治疗总有效率100%(30/30)。30例患者没有出现任何松动移位、异位骨化、相邻节段退变等并发症;治疗后神经功能评分、椎体高度、Cobb角、椎体曲度明显高于治疗前,差异具有统计学意义(P 0.05);治疗后疼痛程度明显低于治疗前,差异具有统计学意义(P 0.05)。结论:在颈前路颈椎融合术中应用零切迹颈椎间融合器,治疗效果显著,既可改善神经功能恢复情况及椎体情况,还可以减少并发症,安全性较高。 相似文献
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原发性肝细胞癌是世界常见的恶性肿瘤之一,在肿瘤相关的病死率中居于前列。多年来,甲胎蛋白(AFP)结合超声检查用于肝细胞癌(HCC)的初步筛查,但早期诊断的效果不佳。岩藻糖基化蛋白在疾病的发生、发展过程中起重要作用,其中对HCC的诊断、监测及预后评价具有重要的临床价值。因此利用新肿瘤标志物和(或)新技术提高HCC的早期诊断十分必要。 相似文献
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人干燥综合征B抗原在巴斯德毕赤酵母菌中的高效分泌表达研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:通过基因克隆在巴斯德毕赤酵母菌中表达人干燥综合征B(SS—B)抗原。方法:PCR扩增SS—B基因,与酵母菌表达载体pPIC9k重组,构建表达质粒pPIC9k—SS—B。用电穿孔法转化酵母菌SMD1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)和免疫酶斑点法鉴定。结果:PCR产物约为1200bp,与预期1224bp接近;pPIC9k—SS-B重组阳性克隆测序结果与GenBank核酸数据库报道完全一致,双酶切鉴定正确。表达产物SS-B的相对分子质量约48000,高拷贝毕赤酵母菌转化菌显著高于低拷贝的表达水平,表达量占分泌总蛋白的60%以上,产物浓度为800~900mg/L。免疫酶斑点法证实表达产物具有天然SS—B分子的免疫原性。阴性对照菌未见目的表达条带。结论:SS—B存巴斯德毕赤酵母菌中获得高效分泌表达,为下一步研究打下了基础。 相似文献
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目的:探讨有自杀意念的大学新生的自杀态度等影响因素及其与自杀意念的关系。方法:采用自杀态度问卷、自尊量表、简易应对方式问卷、社会支持量表、自评抑郁量表、焦虑自评量表对广西医科大学2009级500名新生进行调查。结果:自杀意念检出率为29.07%,大学新生对自杀的性质、对安乐死的态度持矛盾或中立的态度(〉2.5分-〈3.5分),对自杀者的态度、对自杀者家属的态度持肯定和宽容的态度(≤2.5分)。有自杀意念的大学新生对自杀的性质、对安乐死的态度倾向于认可和宽容,而对自杀者家属的态度则倾向于否认和排斥,个体的自尊水平较高。有自杀意念的大学新生获得的总社会支持、主观社会支持、客观社会支持较少,对社会支持的利用度较低,表现出更多的抑郁焦虑情绪,较多采用消极的应付方式,Logistic回归分析表明抑郁、消极应付方式、社会支持总分3个指标对自杀意念的影响有统计学差异(P=0.001,0.014,-0.020)。结论:抑郁、消极应付方式、社会支持总分是影响大学新生自杀意念的重要因素。 相似文献
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慢性扁桃体炎多由扁桃体炎反复发作,机体抵抗力减弱,或因隐窝引流不畅,聚积于隐窝内的微生物(抗体)长期与扁桃体炎接触所致变态反应性炎症,病人病程长,症状顽固,不易治愈,我科自1997年以来用CO2激光治疗慢性扁桃体炎取得了满意的疗效。现报道如下。 相似文献
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目的:通过基因克隆在巴斯德毕赤酵母中表达人干燥综合征B抗原(SS—B)。方法:PCR扩增SS—B基因,与酵母表达载体pPIC9k重组,构建表达质粒pPIC9k—SS—B。用电穿孔法转化酵母菌SMD1168,在MD平板上筛选重组克隆,用G418快速筛选高拷贝转化子,阳性克隆经甲醇诱导表达后,培养上清用十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE)和免疫酶斑点法(immunodot)鉴定。结果:PCR产物约为1200bp,与预期1224bp接近,pPIC9k—SS—B重组阳性克隆测序结果与GenBank核酸数据库报道完全一致,双酶切鉴定正确。表达产物SS—B的分子量约48000,高拷贝毕赤酵母转化菌的表达水平明显高于低拷贝的。表达量占分泌总蛋白60%以上。产物浓度为800—900mg/L。免疫酶斑点法证实表达产物具有天然SS—B分子的免疫原性。阴性对照菌未见目的表达条带。结论:SS—B在巴斯德毕赤酵母中获得高效分泌表达,为下一步研究打下了基础。 相似文献
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目的应用AU2700生化分析仪对酶法测定血清糖化清蛋白(GA)试剂盒进行性能评价。方法依据CLSI-EP有关文件对Lucica GA-L测定试剂盒的精密度、准确度、线性范围及参考范围进行性能评价;比较两种试剂盒(酶法)检测结果的相关性。结果该试剂精密度高(CV3%);稀释线性良好;GA的平均回收率为97.7%,清蛋白(ALB)的平均回收率为96.43%;两种试剂盒检测结果具有良好的相关性(r2=0.976,P0.01)。结论 Lucica GA-L测定试剂盒在该实验室AU2700全自动生化仪上分析性能良好与厂家声明一致,可较好的应用于临床。 相似文献
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[目的]比较胰岛素泵与胰岛素笔在2型糖尿病病人强化治疗中血糖控制的疗效以及护理。[方法]对85例2型糖尿病病人行胰岛素强化治疗,其中37例采用胰岛素泵行持续皮下胰岛素输注(CSII),铝例采用胰岛素笔行多次皮下注射(MSII)。对CSII组病人行置泵前后健康教育以及置泵期护理。[结果]CSII组达到血糖控制标准需要时问、胰岛素用量以及发生低血糖频率均低于MSII组,两组比较具有统计学意义。[结论]采用胰岛素泵行CSII可以作为2型糖尿病病人强化治疗首选治疗方棠,精心护理有利于治疗的顺利实施。 相似文献