携带人Oct4和EGFP基因慢病毒表达载体构建

目的 构建携带人Oct4和EGFP基因的慢病毒表达载体pFUOGW.方法 Sac Ⅱ线性化pLentiEF1a-Oct4-IRES-EGFP,回收片段并补平Sac Ⅱ切口,接着BamH Ⅰ酶切该片段,回收2.565 kb片段而获连接用Oct4-IRES-EGFP;EcoR Ⅰ线性化pFUGW,回收并补平EcoR Ⅰ切口,然后BamH Ⅰ酶切该片段,回收9.174 kb片段获连接用载体片段,最后使用DNA连接试剂盒(TaKaRa)中的Solution Ⅰ将其与连接用Oct4-IRES-EGFP连接,连接产物转化,次日挑选单菌落,提取质粒并行酶切鉴定.所构建载体命名为pFUOGW.获pFUOGW后,按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒包装和确认慢病毒是否成功生产;携带Oct4和EGFP基因的慢病毒感染293FF细胞和鼻咽癌细胞株C666-1、CNEI和6-10B以建立相应病毒感染体系.结果 酶切鉴定证实成功构建了pFUOGW,按标准程序生产的携带Oct4和EGFP基因的慢病毒上清高效率感染鼻咽癌细胞株C666-1、CNE1和6-10B.结论 成功构建携带人Oct4和EGFP基因的慢病毒表达载体pFUOGW,为相关后续的研究打下良好的基础.     

正交实验法优选番石榴叶挥发油提取工艺

目的:研究番石榴叶挥发油的最佳提取工艺。方法:采用正交实验设计L9(34),以挥发油提取量为指标,确定最佳提取工艺。结果:番石榴叶粗粉加水8倍量,浸泡2h,提取5h,提取量最高。结论:该工艺为番石榴叶挥发油的最佳提取工艺。     

不同放疗方案对颈胸上段食管癌患者临床预后影响研究

目的 探讨选择性淋巴引流区照射(ENI)和累及野照射(IFI)放疗方案对颈胸上段食管癌患者临床预后的影响.方法 选取自2010年1月至2015年1月广东省第二人民医院收治的132例颈胸上段食管癌患者为研究对象.所有患者均接受同步放化疗.根据照射方法不同将患者分为ENI组(n=70)与IFI组(n=62).比较两组患者疾...     

携带人Oct4和EGFP基因慢病毒表达载体构建

目的构建携带人Oct4和EGFP基因的慢病毒表达载体pFUOGW。方法SacⅡ线性化pLenti-EF1a-Oct4-IRES-EGFP,回收片段并补平SacⅡ切口,接着BamHⅠ酶切该片段,回收2.565kb片段而获连接用Oct4-IRES-EGFP;EcoRⅠ线性化pFUGW,回收并补平EcoRⅠ切口,然后BamHⅠ酶切该片段,回收9.174kb片段获连接用载体片段,最后使用DNA连接试剂盒（TaKaRa）中的SolutionⅠ将其与连接用Oct4-IRES-EGFP连接,连接产物转化,次日挑选单菌落,提取质粒并行酶切鉴定。所构建载体命名为pFUOGW。获pFUOGW后,按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒包装和确认慢病毒是否成功生产;携带Oct4和EGFP基因的慢病毒感染293FT细胞和鼻咽癌细胞株C666-1、CNE1和6-10B以建立相应病毒感染体系。结果酶切鉴定证实成功构建了pFUOGW,按标准程序生产的携带Oct4和EGFP基因的慢病毒上清高效率感染鼻咽癌细胞株C666-1、CNE1和6-10B。结论成功构建携带人Oct4和EGFP基因的慢病毒表达载体pFUOGW,为相关后续的研究打下良好的基础。     

西黄丸含药血清对SW480人结肠癌细胞迁移及侵袭的影响

目的:研究西黄丸对人结肠癌细胞SW480迁移及侵袭的影响,并初步探讨其作用机制。方法:以人结肠癌细胞SW480为研究对象,细胞划痕试验检测不同剂量西黄丸含药血清对SW480细胞迁移的影响,并Transwell侵袭实验检测西黄丸含药血清对细胞侵袭能力的改变;用Western blot的方法检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)和p-ERK蛋白表达水平,RTq PCR法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin),多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP-1)、波形蛋白(Vimentin)和转录因子Snail的mRNA水平。结果:与空白组比较,西黄丸含药血清可降低SW480细胞迁移及侵袭的能力,增加E-cadhenrin mRNA表达水平,并抑制PARP-1,Vimentin和Snail mRNA表达水平,明显降低ERK蛋白的磷酸化水平,均具有统计学意义(P0.05)。结论:西黄丸含药血清可抑制SW480细胞的体外侵袭及迁移,并影响上皮-间皮转化(EMT)相关基因E-cadherin,PARP-1,Vimentin和Snail的mRNA表达,其机制可能与ERK/MAPK信号通路有关,本研究为西黄丸抑制结肠癌转移提供了科学证据。     

IL-27在非小细胞肺癌患者外周血中的表达

目的探讨IL-27在非小细胞肺癌(Non-small-cell lung cancer,NSCLC)患者外周血中的表达。方法选取2012年12月²014年3月在我院就诊的NSCLC患者50例。根据NSCLC分期,分为NSCLCⅠ期组、NSCLCⅡ期组、NSCLCⅢ期组、NSCLCⅣ期组;同时选取8名健康志愿者作为对照组。采用酶联免疫吸附法检测各组研究对象外周血细胞因子IL-27、IL-12、IL-10的表达水平。结果各组外周血IL-27、IL-12、IL-10等炎症因子浓度进行比较,均存在统计学差异(p<0.05);其中NSCLCⅢ期和NSCLCⅣ期的IL-27和IL-12浓度分别较其他组明显降低(p<0.05),NSCLCⅢ期和NSCLCⅣ期的IL-10浓度分别较其他组明显升高(p<0.05)。外周血IL-27、IL-12浓度与NSCLC分期呈负相关(p<0.001),外周血IL-10浓度与NSCLC分期呈正相关(p<0.001)。结论 IL-27可能参与了NSCLC相关炎症反应,IL-27可能是NSCLC治疗的潜在药物。     

西黄丸含药血清对人结直肠癌细胞SW480凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:研究西黄丸对人结直肠癌细胞SW480凋亡的影响及其作用机制的初步探讨。方法:以人结直肠癌细胞SW480为研究对象,MTT法检测不同剂量西黄丸含药血清对SW480细胞活性的影响,并用流式细胞术检测西黄丸含药血清引起的细胞凋亡率改变;用Western blot的方法检测Bax和Bcl-2蛋白表达水平,初步探讨其凋亡机制。结果:西黄丸含药血清可浓度依赖性降低SW480的细胞活力并增加细胞凋亡率,Western blot结果显示西黄丸含药血清增加了Bax蛋白表达,抑制Bcl-2蛋白表达。结论:西黄丸含药血清可抑制SW480细胞活力、诱导细胞凋亡并减小Bcl-2、Bax蛋白表达比例,其机制可能与以线粒体为核心的凋亡途径有关。     

大孔吸附树脂纯化番石榴叶总皂苷的工艺研究

目的:研究SA 1型大孔吸附树脂吸附提取番石榴叶总皂苷的工艺条件及参数.方法:以番石榴叶总皂苷为考察指标,研究树脂吸附容量、洗脱溶媒及其用量等工艺条件.结果:通过SA 1型大孔树脂吸附后,先经3倍BV(床体积)水洗,再以800 ml/L乙醇为洗脱溶媒.4倍BV洗脱效果最佳,总皂苷纯度可达55.3%.结论:此法能较好地分离纯化番石榴叶总皂苷,是简便、可行的提取方法.     

番石榴叶中皂苷和挥发油抗轮状病毒作用研究

目的 利用四氮唑（MTT）法检测番石榴叶中皂苷、挥发油的抗轮状病毒作用. 方法 提取番石榴叶中皂苷和挥发油两种有效成分,将其作用于MA104细胞,MTT法检测细胞存活率,求出其半数细胞毒性浓度（TC50）后,给予＜TC50不同浓度的有效成分对轮状病毒感染细胞进行干预,检测其对病毒感染细胞存活的影响,以确定两种有效成分体外抗轮状病毒的作用. 结果 皂苷和挥发油均有预防轮状病毒感染的作用,其用于预防时病毒最高抑制率分别为62.12%和60.04%,治疗指数（TI）分别1.69和1.50. 同时,皂苷和挥发油对MA104细胞感染病毒后具有治疗作用,两者用于治疗轮状病毒感染时最高抑制率分别为78.37%和86.55%,TI分别为3.30和3.59. ,随着药物浓度的增加,治疗和预防时病毒抑制率明显升高,呈量效关系. 结论 番石榴叶中皂苷、挥发油具有良好的体外抗轮状病毒的作用.