APA-3T3细胞微囊的深低温保存

目的:通过优选冻存液的成份和浓度,建立低温保存APA微囊化小鼠成纤维细胞(3T3细胞)的方法。方法:用海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微囊(APA)包裹3T3细胞制成APA-3T3细胞微囊。以高糖DMEM培养液为基础冻存液,分别加入不同浓度的二甲基亚砜(DMSO)或牛血清白蛋白(BSA)。分别将不同的冻存液加入APA-3T3中。按程序控制降温梯度,置于液氮中保存。快速复温后,光镜下观察APA-3T3的形态、细胞活率及膜通透性。结果:①10%DMSO组的微囊内细胞活率降低最少,细胞活率达(75.68±1.54)%,P<0.01。微囊完好率达到(94.48±0.90)%,P<0.01。②与其它组相比,4%BSA组的微囊内细胞活率降低程度最小,活率达(73±1.26)%,P<0.01。微囊完好率最高,为(85.1±0.82)%,P<0.01。③加入不同成份和浓度的冻存液对微囊的通透性没有明显影响。结论:在冻存液中加入10%DMSO和4%BSA,可在低温保存的过程中较好地保护细胞的存活及微囊的完整性。     

冲击波对糖尿病慢性创面微环境下HaCat细胞增殖及迁移的影响

背景体外冲击波疗法可促进糖尿病慢性创面愈合,其机制有待深入研究。目的 观察不同剂量冲击波干预对糖尿病慢性创面微环境中HaCat细胞增殖和迁移能力的影响,尝试从细胞水平揭示体外冲击波疗法促进糖尿病慢性创面愈合的作用机制。方法 以人表皮角质形成细胞(HaCat细胞)为研究对象,分为对照组、糖尿病慢性创面模型(chronic diabetic wound,CDW)组以及不同剂量冲击波(shock wave, SW)干预组(SW1组：0.05 mJ/mm2,500脉冲;SW2组：0.10 mJ/mm2,500脉冲;SW3组：0.10 mJ/mm2,1 000脉冲),通过高糖低氧孵育条件建立糖尿病慢性创面细胞模型,采用倒置显微镜观察细胞形态学改变,CCK-8法检测细胞增殖能力,细胞划痕试验检测细胞迁移能力,观察不同能流密度和脉冲输出的冲击波对糖尿病慢性创面微环境中HaCat细胞增殖和迁移能力的影响。结果 与对照组比较,冲击波干预后HaCat细胞形态未见明显改变。CCK-8实验显示,HaCat细胞增殖活性呈现“先增加、后下降”的趋势,其OD450值：Day6>Day4>Day8>...     

携带LMO3基因逆转录病毒载体的构建及其在NIH/3T3细胞中的表达

目的构建单纯LIM蛋白3(LMO3)的逆转录表达载体,并观察其在NIH/3T3细胞中的表达情况。方法重组载体pLXSN-LMO3经酶切及测序鉴定后,脂质体法转染到pA317包装细胞,G418筛选稳定的病毒产生细胞株。重组逆转录病毒体外感染NIH/3T3,并对其进行病毒滴度检测,NIH/3T3细胞分为3组:以pLXSN-LMO3转染为实验组,以pLXSN转染为阴性对照组,正常细胞为空白对照组。采用免疫荧光组化染色和蛋白印迹(Western blot)法鉴定NIH/3T3细胞中LMO3的表达。结果重组逆转录病毒载体pLXSN-LMO3经酶切及测序鉴定构建正确,其病毒滴度平均可达4.04×106cfu/ml,各组NIH/3T3细胞免疫荧光组化染色及Western blot检测均有LMO3蛋白表达,其中实验组高表达LMO3,与阴性对照组、空白对照组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了携带LMO3基因逆转录病毒载体,并能在NIH/3T3细胞中高表达LMO3蛋白,为下一步开展基因治疗奠定了基础。     

支持性心理治疗对鼻咽癌患者抑郁情绪的干预研究

目的探讨支持性心理治疗对鼻咽癌患者的抑郁情绪的干预效果及其对生活质量和对同步放化疗依从性的影响。方法将96例鼻咽癌患者随机分为支持性心理治疗组和对照组,评定并比较两组SDS,SF-36生活质量得分,完成同步放化疗的比率。结果支持性心理治疗组SDS评分显著低于对照组（P〈0.01）。生活质量除生理机能外,其他指标支持性心理治疗组均优于对照组（P〈0.05或P〈0.01）。支持性心理治疗组显示良好的对同步放化疗治疗的依从性。结论支持性心理治疗能显著降低鼻咽癌患者抑郁情绪的严重程度,并可提高其生活质量,帮助患者完成同步放化疗治疗。     

2020中国公立医院生存与发展调研(二)——公立医院发展方向和新挑战

十四五期间,公立医院高质量发展成了医院发展的主要方向,坚持公益性、分级诊疗、智慧医院建设、公立医院绩效考核等都将影响和考验公立医院的发展和走向。在信息科技革命和医疗模式变革的大势下,未来的方向将如何走势,本章主要关注和聚焦于医改新政的变化,对公立医院存在的机遇和挑战进行研究。     

阿托伐他汀钙对EA.hy926细胞全基因表达谱的影响及生物信息学分析

目的探讨阿托伐他汀钙对体外培养人脐静脉内皮细胞EA.hy926细胞基因表达谱的影响及作用的分子机制。方法取EA.hy926细胞分实验组和对照组,实验组采用10μmol/L阿托伐他汀钙体外干预人脐静脉内皮细胞EA.hy926 24h,用Affymetrix HG-U133plus 2.0全基因组表达芯片检测阿托伐他汀钙对EA.hy926细胞基因表达谱的影响。并运用基因富集分析(GSEA)软件、DAVID基因功能聚类分析软件及Cmap数据库对芯片数据进行分析,对相关靶基因进行实时定量PCR验证。结果与对照组比较,实验组基因芯片分析筛选出差异表达倍数>2倍的基因649个,其中上调基因295个,下调基因354个。经DAVID及GSEA基因富集分析显示,阿托伐他汀钙广泛下调了细胞周期调控相关基因,上调了Kruppel样转录因子等血管保护基因,Cmap数据库分析显示,阿托伐他汀钙与组蛋白去乙酰化酶抑制剂及白藜芦醇呈正相关的联强度高。结论阿托伐他汀钙从多角度发挥抗动脉粥样硬化作用,作用机制可能与组蛋白去乙酰化酶抑制剂及白藜芦醇相似。     

海藻酸钙-聚赖氨酸-海藻酸钙微囊化牛肾上腺嗜铬细胞植入镇痛治疗中人体的免疫反应

目的:了解海藻酸钙-聚赖氨酸-海藻酸钙(APA)微囊化牛肾上腺嗜铬细胞(APA-BCC)植入蛛网膜下腔后患者的免疫反应。方法:实验于2002-07/2003-02在解放军总医院老年医学研究所细胞生物学研究室完成。采用腰椎穿刺术,将APA-BCC注入20例中、重度癌痛患者L3～4或L4～5蛛网膜下腔内。检测患者移植前后的血象、免疫球蛋白、T细胞亚群及脑脊液。结果:移植后外周血中淋巴细胞比例较移植前无明显变化(P>0.05)。移植后7d复查16例患者的脑脊液,其中8例(50%)脑脊液中白细胞升高,范围在(15～700)×106L-1犤(198±248)×106L-1犦。但外周血免疫球蛋白、T细胞亚群较移植前无明显变化。结论:APA-BCCs微胶囊植入癌痛患者蛛网膜下腔,未引起宿主明显的免疫反应,表明APA微囊具有良好的免疫隔离作用。     

肝细胞生长因子对人脐带间充质干细胞增殖、黏附及迁移影响的体外研究

目的：探讨肝细胞生长因子( HGF)对人脐带间充质干细胞( hUCMSCs)增殖、黏附及迁移能力的影响。方法按照不同腺病毒感染 hUCMSCs 分为实验组( Ad-GFP-HGF )和对照组( Ad-GFP )。以最佳感染复数转染hUCMSCs,观察细胞形态变化以及GFP蛋白的表达。比较各组细胞增殖能力、黏附能力及迁移能力。 Western Bolt检测各组细胞HGF的表达水平。结果对照组和实验组均出现了GFP的表达,实验组hUCMSCs的增殖、黏附及迁移能力均较对照组增强(P<0．05)。实验组细胞HGF的表达水平显著高于对照组(P<0．05)。结论 HGF的高表达能明显促进hUCMSCs的增殖、黏附和迁移。     

免疫抑制剂对人胰岛细胞的毒性作用

目的 探讨临床常用免疫抑制剂对人胰岛细胞的直接毒性作用.方法 应用体外分离纯化后培养的人胰岛细胞,以刺激系数和丫啶橙/碘丙啶染色为效应指标,检验低、中、高不同浓度免疫抑制剂对人胰岛细胞的直接毒性作用.结果 体外培养3天后,低浓度免疫抑制剂未表现出胰岛毒性作用;中浓度免疫抑制剂对胰岛的毒性不同,以他克莫司为重;高浓度免疫抑制剂有较强的胰岛毒性.结论 免疫抑制剂对人胰岛细胞直接毒性作用与浓度相关,选择低胰岛毒性免疫抑制方案有助于提高胰岛移植成功率.     

杭州市富阳区住院腹泻患者艰难梭菌感染及菌株分子特征分析

目的了解浙江省杭州市富阳地区住院腹泻患者艰难梭菌感染情况,研究感染患者临床危险因素及分离菌株的分子特征。方法收集2017年5月至2018年2月就诊于第一人民医院的228例腹泻患者的粪便标本,通过厌氧培养进行艰难梭菌菌株分离和鉴定,进行多位点序列基因分型,以琼脂稀释法测定菌株耐药性,对患者临床资料进行统计分析。结果228份标本共检测出产毒型艰难梭菌41株,其中31株为医院获得性腹泻;阳性患者平均年龄67.8岁,主要来自消化内科（34.1%）和肾内科（19.5%）。 ST2、ST3和ST54为主要基因型。 所有菌株对万古霉素、甲硝唑、四环素、哌拉西林敏感。 临床资料统计分析显示,＞60周岁、患基础性疾病和有抗生素用药史的阳性患者数量远高于阴性患者比例（χ2＝4.229、9.022、5.767,P＝0.023、0.001、0.009）。结论杭州市富阳区住院腹泻患者艰难梭菌感染患者主要来源于院内感染。 患有基础性疾病、8周内有抗生素用药史的老年患者为感染的危险因素;在院内感染防控中需进一步加强监测。