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目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)抗原IsdB活性片段(IsdB2)免疫保护作用。方法利用生物信息学技术预测分析出IsdB活性片段(IsdB2),PCR扩增编码IsdB2的基因片段,亚克隆至GST标签融合表达的原核表达载体pGEX-6P-2中,将载体转化入大肠杆菌XL-1 blue,通过IPTG诱导表达IsdB2/GST融合蛋白,利用GST亲和层析初步纯化获取IsdB2蛋白。用IsdB2蛋白抗原辅以氢氧化铝佐剂对小鼠进行免疫实验,统计小鼠存活率对IsdB2抗原的免疫性进行初步研究。结果重组质粒经过BamHⅠ和NotⅠ双酶切鉴定、核酸序列测定和IPTG诱导表达IsdB2/GST及酶切获取IsdB2蛋白的SDS-PAGE分析表明,IsdB2蛋白相对分子质量大小约72 000,GST标签相对分子质量大小约26 000,与预期相符合。用IsdB2蛋白对小鼠进行3次疫苗免疫实验,IsdB2对小鼠的保护率分别为84.6%、50%和60%。结论成功构建重组表达载体pGEX-6P-2-IsdB2,利用大肠杆菌表达系统、GST亲和层析和酶切方法获得IsdB2蛋白抗原,通过3次动物疫苗免疫实验结果表明IsdB2具有免疫保护性,为研制新型有效的MRSA疫苗奠定实验基础。 相似文献
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Twist与肿瘤的关系研究进展 总被引:2,自引:0,他引:2
肿瘤是目前危害人类健康最严重的疾病,同时也是生命科学研究的热点。近年来的研究发现,Twist作为一种肿瘤基因,通过在许多肿瘤细胞中的过度表达,在抗细胞凋亡、肿瘤的多药耐药性、上皮-间质转变(EMT)、血管的发生和肿瘤的侵袭方面起到了非常重要的作用。此外,大量的研究证实,Twist在肿瘤的不同分期中表达有着明显差异。这些研究成果对肿瘤的诊断和治疗等具有重要的意义,本文就Twist与肿瘤的相关性作一综述。 相似文献
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目的评价耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)候选疫苗抗原FnBPA活性片段的免疫原性以及其在抵抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染中的免疫保护作用。方法构建pGEX-6p-2-FnBPA表达载体,经可溶表达及亲和纯化后的重组蛋白免疫Balb/c小鼠。末次免疫后的第7天,分离免疫小鼠的血清ELISA检测IgG及其亚型抗体水平,同时测定体外抗体介导的调理吞噬作用。末次免疫后的第14天,经尾静脉感染ATCC国际标准株MRSA-252,统计分析感染后各组的小鼠的生存率以及检测脾脏,肾脏的细菌定植量。结果成功构建、表达及纯化了FnBPA活性片段,重组蛋白纯度可达90%;免疫后诱导小鼠机体产生了高效价的IgG抗体,并在体外能发挥抗体介导的调理吞噬作用;在感染保护评价实验中,与对照组相比,实验组的生存率显著提高(P<0.01),并显著降低了脾脏与肾脏的细菌定植量(P<0.05)。结论耐甲氧西林金黄色葡萄球菌重组亚单位疫苗FnBPA具有良好的免疫原性和免疫保护作用,可以作为MRSA疫苗研究的重要候选抗原。 相似文献
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目的 探讨Twist蛋白在肾肿瘤组织中的表达及与几种多药耐药蛋白表达之间的关系.方法 应用免疫组化SABC技术检测人肾癌组织不同区域的Twist蛋白、多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated protein,MRP)、P糖蛋白(P-gp)、肺耐药蛋白(lung resistance-related protein,LRP)、拓扑异构酶Ⅱ(topoisomerase Ⅱ,TOPOⅡ)的表达.结果 在肿瘤边界区,Twist蛋白、MRP、P-gp、LRP、TOPOⅡ均为阳性表达;而在肿瘤中心区,Twist蛋白和P-gp的表达为阴性,MRP、LRP、TOPOⅡ蛋白仍为阳性表达,但MRP和TOPOⅡ在肿瘤中心区表达强于肿瘤周边区(P〈0.01),而LRP在肿瘤中心区的表达弱于肿瘤周边区(P〈0.01).结论 Twist基因的表达与肾肿瘤转移、浸润以及耐药性有关. 相似文献
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目的 采用液相色谱-质谱联用技术绘制重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的质量肽图并鉴定二硫键位点。方法 重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子原液经变性、还原、烷基化、脱盐、胰蛋白酶和V8酶分别酶解后进行质量肽图分析;原液经变性、烷基化、脱盐、V8酶和V8酶结合胰蛋白酶分别酶解后进行二硫键定位鉴定。结果 胰蛋白酶酶切的质量肽图共发现14个匹配肽段,V8酶酶切的质量肽图共发现18个匹配肽段,肽段覆盖率均为100%。经V8酶酶切仅鉴定到1种二硫键匹配方式即Cys55-Cys97,经V8酶结合胰蛋白酶酶切鉴定到2种二硫键匹配方式即Cys55-Cys97和Cys89-Cys122。结论 应用液相色谱-质谱联用技术进行质量肽图分析和二硫键定位可作为重组蛋白药物质量控制方法。 相似文献
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目的:探讨转移能力不同的两种人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-435S中Twist基因表达差异,及其与紫杉醇药物敏感性差异的相关性。方法用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,检测两种细胞中Twist基因的表达情况,MTT法检测两种细胞对紫杉醇的敏感性。结果(1)RT-PCR结果显示:两种细胞中均有Twist基因表达,在MDA-MB-435S细胞中的表达高于MCF-7(P〈0.05);(2)紫杉醇对MDA-MB-435S细胞的抑制作用弱于对MCF-7细胞的抑制作用(P〈0.05)。结论 Twist基因在转移能力强的MDA-MB-435S细胞中表达高于转移能力中等的MCF-7细胞,同时高转移的MDA-MB-435S细胞对紫杉醇的敏感性弱于中等转移性的MCF-7细胞,且更易出现耐药。 相似文献
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