液相色谱串联质谱法测定兔眼玻璃体内二十碳五烯酸的浓度

目的:建立适用于兔眼玻璃体内二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)浓度测定的LC-MS/MS方法,为研究EPA在玻璃体内的药动学提供技术支持。方法:应用Q Trap 4500液质联用仪,采用电喷雾电离源,在负离子方式选择反应监测(MRM)模式下测定兔眼玻璃体内注射EPA后不同时间的药物浓度。50μL玻璃体样品经乙腈沉淀蛋白并浓缩处理后用于定量分析。色谱分离采用XDB C₁₈柱(50 mm×4.6 mm,1.8μm),流动相为甲醇-水-甲酸(90∶10∶0.1,V/V/V),流速:1.00mL·min-1;进样量:2μL。监测的离子反应分别为m/z301.0→m/z257.3(EPA)和m/z526.0→m/z401.0(内标,格列喹酮)。每个样品的分析时间为3 min。结果:玻璃体内EPA在0.02~5.00mg·L^-1范围内线性关系良好,最低定量限为0.02mg·L^-1;提取回收率大于90%;日内和日间精密度(RSD)均小于11.6%;基质效应可忽略;EPA玻璃体样品室温放置6 h、-20℃放置3 d、-70℃一次冻融稳定,处理后样品室温放置20 h稳定。兔眼内注射EPA后的主要药动学参数如下:Cmax为1.05 mg·L^-1,tmax为0.5 h,t_1/2为4.72 h,AUC(0-t)为3.614 mg·L^-1·h,AUC(0-∞)为4.296 mg·L^-1·h。结论:所建立的EPA浓度测定的LC-MS/MS方法灵敏、准确、简便、稳定,适用于EPA在兔眼内的药动学研究。