旋毛虫Ts87重组蛋白诱导的小鼠黏膜免疫保护性研究

本实验探讨旋毛虫Ts87重组蛋白灌胃免疫小鼠诱导的黏膜免疫保护性作用。实验分对照组、佐剂组(霍乱毒素B亚单位组,CTB)和免疫组(CTB Ts87重组蛋白),灌胃免疫,间隔1周共免疫3次。末次免疫后第7天用400条旋毛虫感染期幼虫攻击,比较3组小鼠肠道成虫数、雌虫生殖力和肌幼虫数。且于末次免疫后第7天刮取肠黏液、取血检测特异性sIgA、IgG抗体水平。结果显示免疫组小鼠成虫减虫率、新生蚴减虫率、肌幼虫减虫率分别是81·34%、67·02%、84·49%;小鼠肠黏液sIgA水平及血清IgG水平显著高于对照组和佐剂组。结果表明Ts87重组蛋白黏膜免疫能够诱导小鼠产生抗旋毛虫的保护性免疫。灌胃免疫能显著提高肠黏液特异性sIgA水平,对促进肠道成虫的排出有明显作用。     

杭州市成人健康期望寿命及相关因素分析

近年来,WHO进行了大量的研究以寻求一个评价居民健康的综合衡量尺度(SMPH)[1].<2000年世界卫生报告>中推荐伤残调整期望寿命(DALE)作为最适合的人群健康的综合测量指标.<2001年世界卫生报告>中将DALE更名为健康期望寿命(HALE).     

杭州市售婴幼儿食品营养标签调查

目的         了解浙江省杭州市售婴幼儿食品营养标签标示现状并分析存在的问题。         方法        采用自行设计的食品标签评价表,抄录杭州市世纪联华超市庆春路店内全部婴幼儿食品营养标签并判断标签标示内容的规范性。         结果         共调查婴幼儿食品253种,标示营养成分表、营养声称、营养成分功能声称的分别有250(98.8%)、241(95.3%)、113种(44.7%);标示率较高的营养成分是能量、碳水化合物、蛋白质、脂肪、维生素B1、维生素A、铁、锌,标示率分别为100.0%(250/250)、95.2%(238/250)、89.2%(223/250)、96.8%(242/250)、84.8%(212/250)、83.6%(209/250)、88.8%(222/250)、85.2%(213/250);共出现739条营养声称,出现频数较多的是益生元/菌13.3%(98/739)、花生四烯酸11.5%(85/739)、胆碱9.3%(69/739)等;共出现339条营养成分功能声称,出现频数较多的是益生元/菌20.6%(82/399)、蛋白质11.5%(46/399)、钙11.01%(44/399)等。         结论         婴幼儿食品营养标签标示率较高,但规范性较差,应加强营养标签规范工作,完善标签法规,便于消费者正确选择营养健康的婴幼儿食品。

     

旋毛虫成虫期特异性基因的筛选与序列分析

目的　获得旋毛虫成虫期特异性基因序列。方法　应用旋毛虫成虫期特异性探针对成虫cDNA文库进行杂交筛选、克隆测序及核苷酸序列数据库 (GenBank)查寻比较 ,采用DNAstar软件进行基因序列分析。结果　利用消减杂交 (subtractedhybridization)获得的旋毛虫成虫期特异性探针筛选成虫cDNA文库 ,获得一个长 16 2 9bp的基因。其开放阅读框架由 146 4个核苷酸组成 ,编码 487个氨基酸。序列分析表明 ,该序列是一个尚未见报道的旋毛虫基因序列 ,在 2 0 7～ 2 70位氨基酸间存在两个锌指结构 ,在 5 2～ 6 4,10 8～ 116 ,137～ 16 3,2 2 6～ 2 6 0位氨基酸处存在预测的抗原表位。结论　获得旋毛虫成虫期特异性基因 ,其编码的蛋白具有一定的抗原表位     

旋毛虫抗原基因Ts87在真核细胞中的表达

目的　在体外真核细胞 COS7中表达重组质粒 pc DNA3.1/ Ts87,为旋毛虫病 DNA疫苗的研究奠定基础。　方法　将重组质粒 pc DNA3.1/ Ts87经脂质体 L ipofectamine介导 ,体外转染真核细胞 COS7,通过细胞免疫组化 ,细胞裂解物的 SDS- PAGE电泳和 Western- blot分析检测表达产物。　结果　重组质粒能够在 COS7中表达出约 38ku的目的蛋白 ,并能够被旋毛虫阳性血清特异识别。　结论　构建的重组质粒可在体外真核细胞 COS7中成功表达。     

旋毛虫成虫抗原基因的原核表达及表达产物的特性分析

目的　获得旋毛虫成虫抗原基因的原核表达产物并对其进行纯化及免疫特性分析。　方法　旋毛虫成虫Ts87基因片段亚克隆入PET-28a(+)表达载体,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达。亲和层析和电洗脱法纯化表达产物,SDS-PAGE、ELISA和Westernblotting对表达产物进行分析鉴定,并将纯化的表达产物人工免疫兔。结果　SDS-PAGE结果显示,表达产物为分子量约为40kDa的重组蛋白。纯化后免疫兔获得高滴度的抗血清。该基因重组蛋白可被感染旋毛虫的猪、兔血清及人工免疫兔血清所识别,与感染囊尾蚴、棘球蚴的患者血清或感染日本血吸虫的兔血清不发生交叉免疫反应。　结论　获得一个新的旋毛虫成虫Ts87基因重组蛋白,该蛋白具有特异的抗原性。     

抗旋毛虫副肌球蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的利用杂交瘤技术制备分泌抗重组旋毛虫副肌球蛋白N端抗原（rTsP3）的单克隆抗体（McAb）并进行鉴定。方法以rTsP3免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合,筛选分泌高滴度McAb杂交瘤细胞株,制备腹水并进行纯化,采用间接ELISA法测定培养细胞上清液及腹水中的McAb滴度、相对亲和力及抗体亚类,Western blot法鉴定抗体对抗原识别的特异性。结果获得了2株稳定分泌抗旋毛虫rTsP3的McAb杂交瘤细胞株,分泌的McAb分别为IgG2b亚类κ型和IgG1亚类κ型,亲和力常数分别为8.98×108mol/L和9.7×10^8mol/L,Western blot显示2株单抗均能识别旋毛虫成虫匀浆蛋白、rTsP3及重组副肌球蛋白（rTsPmy）。结论成功制备了抗旋毛虫rTsP3单克隆抗体,该单抗能识别旋毛虫副肌球蛋白抗原。     

旋毛虫成虫部分cDNA表达质粒文库的构建

目的为寻找更多有效的旋毛虫病疫苗候选抗原分子,构建旋毛虫成虫部分cDNA质粒文库。方法以旋毛虫成虫cDNA文库为模板,进行PCR扩增。扩增产物500~2 000 bp之间的DNA片段用BamHⅠ、HindⅢ酶切,将酶切产物克隆入真核表达载体pcDNA3.1,对部分转化子进行酶切鉴定。结果构建了插入片段在500~1 500 bp之间的旋毛虫成虫部分cDNA质粒文库,90%以上的转化子都含有插入的DNA片段。结论成功构建一个旋毛虫成虫部分cDNA质粒文库。     

46例乳腺巨大恶性肿瘤切除术后经皮瓣修复缺损者的预后分析

目的分析经自体皮瓣修复乳腺巨大恶性肿瘤术后缺损者的预后及相关因素。 方法回顾性分析2012年4月至2018年5月中山大学孙逸仙纪念医院收治的46例乳腺巨大恶性肿瘤患者的临床资料。患者接受局部切除术后行自体皮瓣修复缺损。根据不同病理类型、是否伴有远处转移、切缘能否达到阴性以及治疗反应性进行亚组分析,采用Log-rank检验分析不同亚组的疾病无进展生存(PFS)和OS情况;采用单因素和多因素Cox比例风险回归模型分析PFS和OS的影响因素。 结果46例患者中,乳腺间叶恶性肿瘤患者7例,其余39例为乳腺癌患者(luminal B型18例,HER-2阳性乳腺癌11例,三阴性乳腺癌10例)。单因素分析发现：(1)乳腺间叶恶性肿瘤患者中位PFS和OS分别为28.5个月(18.1～38.7个月)和28.5个月(18.1～38.9个月), luminal B型乳腺癌患者中位PFS和OS分别为17.2个月(14.1～20.3个月)和25.1个月(13.7～36.6个月),HER-2阳性乳腺癌患者中位PFS和OS分别为15.6个月(12.9～51.2个月)和35.8个月(19.8～71.8个月),三阴性乳腺癌患者中位PFS和OS分别为8.6个月(4.6～12.5个月)和18.5个月(5.8～43.5个月)。4种恶性肿瘤相比,患者中位PFS和OS的差异均有统计学意义(PFS：χ²＝16.645,P＝0.001;OS：χ²＝8.617,P＝0.035)。(2)仅有T₄局部病灶者(25例)与T₄病灶伴远处转移者(21例)相比,中位PFS和OS的差异均无统计学意义[PFS：17.2个月(7.3～27.0个月)比9.8个月(8.6～11.1个月),χ²＝ 1.369,P＝0.242;OS：28.5个月(14.1～42.9个月)比20.2个月(14.4～25.9个月), χ²＝1.779,P＝0.182]。(3)皮肤切缘阴性者(35例)中位PFS和OS分别为22.1个月(10.8～33.4个月)和22.2个月(11.3～33.2个月),明显优于皮肤切缘阳性者(11例)的5.1个月(3.0～7.2个月)和10.2个月(5.4～15.0个月)(PFS：χ²＝17.794,P<0.001;OS：χ²＝6.192,P＝0.013)。(4)系统治疗反应好的乳腺癌患者,其中位PFS和OS明显优于治疗反应差的患者[PFS：23.1个月(5.9～40.4个月)比8.7个月(7.8～9.8个月),χ²＝ 9.868,P＝0.001; OS：46.7个月(25.5～68.0个月)比14.3个月(9.9～18.9个月),χ²＝8.994,P＝0.002]。将以上因素纳入多因素Cox比例风险回归模型分析后发现,这些因素都不是影响患者PFS和OS的独立预后因素。 结论乳房巨大恶性肿瘤患者的预后与肿瘤病理类型、切缘是否阴性、全身系统治疗的反应性等多个因素相关,并非由单一因素所决定。     

提高留学生人体寄生虫学教学质量的探索

留学生教育已经成为高等医学院校教育事业中的一项重要工作.人体寄生虫学是医学留学生教学的必修科目.主要从改革教学内容、方法、重视实验教学、编写英文教材、提高师资水平等几方面阐述了首都医科大学人体寄生虫学教研室在留学生英文教学过程中的实践经验.