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兔抗鼠TGF-β1抗体对日本血吸虫尾蚴cDNA文库的免疫学筛选 总被引:1,自引:0,他引:1
目的为获得日本血吸虫(Schistosoma japonieum,Sj)转化生长因子β1(TGF-β1)基因的部分或全长cDNA序列,同时验证用针对某一蛋白的抗体筛选表达文库是否可以得到相应虽白对应的基因序列。方法采用兔抗鼠TGF-β1血清,对Sj尾蚴cDNA表达文库进行免疫学筛选。对阳性克隆进行PCR扩增后,将大于500bp的克隆进行复筛,对复筛阳性的克隆进行测序和生物信息学鉴定。结果对大约106个噬菌斑进行了初筛,共获得7个阳性克隆;经过PCR扩增后。其中有4个克隆大于500bp。复筛获得3个持续阳性克隆;对测序后的阳性克隆进行生物信息学鉴定,得到的3个克隆均与日本血吸虫辅酶Q10氧化还原酶(SjCHGC)基因具有高的同源性(Blastn分值都大于200)。结论SjCHGC蛋白与兔抗鼠TGF—β1抗体的反应为交叉反应,用抗某一蛋白的抗体筛选表达文库得到相应蛋白的基因序列的方法不一定可行。 相似文献
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赵宁民段虹飞马爱玲樊鹏利李巧艳马永成秦玉花赵红卫 《中华实用诊断与治疗杂志》2016,(10):1028-1031
目的 建立测定人血浆中西酞普兰浓度的超高效液相串联质谱法,观察西酞普兰在血浆中的稳定性。方法 流动相为体积分数0.05%甲酸溶液-乙腈(30∶70),流速为0.1mL/min,进样量为5L,柱温为35℃,样品室温度为4℃。采用Agela公司Venusil MP C18色谱柱(2.1mm×50mm,3μm)分离,通过电喷雾离子化四极杆串联质谱,以多反应监测方式进行检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z 325.22→109.25(西酞普兰)和m/z 265.23→167.37(内标盐酸苯海拉明)。结果 西酞普兰的线性范围为0.55~137.04μg/L,日内、日间精密度相对标准差均〈10%;血浆中西酞普兰低、中、高浓度水平的提取回收率分别为(89.6±2.1)%、(72.4±0.6)%、(86.3±2.5)%,内标为(77.2±0.7)%,相对回收率分别为(92.6±7.0)%、(100.7±7.3)%、(106.4±4.4)%;西酞普兰血样长期冷冻稳定性、标准品溶液及内标贮备液长期稳定性、多次冻融稳定性、室温稳定性均较佳。结论 本研究建立的分析方法快速、准确、灵敏、简便,适用于西酞普兰血浆药物浓度测定。 相似文献
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目的了解2007-2008年广州市监测点医院门诊5岁以下儿童病毒性腹泻散发病例中诺如病毒感染状况及基因型别。方法收集广州市2007-2008年监测点医院门诊临床诊断为病毒性腹泻的患儿临床资料及粪便标本954份,采用ELISA方法检测诺如病毒、轮状病毒,将诺如病毒抗原阳性的标本用RT-PCR方法进行诺如病毒核酸扩增,将阳性产物回收、纯化并测序,结合GenBank中的相关序列进行型别流行特点分析。结果 954份标本中,ELISA方法检测各种病毒的抗原阳性率为诺如病毒18.8%(179/954),其中07年12.2%(32/262),08年21.2%(147/692),轮状病毒30.8%。诺如病毒腹泻病例发病高峰在8~11月份,2岁以下病例数占全部病例的91.6%,病例集中在6~23月龄。RT-PCR方法检测诺如病毒核酸阳性率为80.4%(144/179),144份诺如病毒核酸阳性标本经测序及与GenBank中的相关序列比对证实有1份是GⅡ2型,其余全部为GⅡ4型。结论诺如病毒是广州市门诊5岁以下儿童病毒性腹泻的常见病原之一,仅次于轮状病毒,常见于2岁以下婴幼儿,2007-2008年流行优势株基因型为GⅡ4型。 相似文献
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目的:建立高效液相色谱法检测干血滤纸片中卡马西平血药浓度的方法。方法:将30 μL含卡马西平的全血滴在滤纸上,室温下晾干至少3 h,待干透后从滤纸上打孔取下6 mm直径的血斑,放入1.5 mL普通离心管中,加入含有内标的甲醇溶液200 μL,超声水浴10 min,涡旋1 min,15 000 r·min-1离心5 min,取上清进样。色谱柱为AgilentTC-C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-水(55:45),内标为苯妥英,流速为1.0 mL·min-1,检测波长为235 nm。结果:卡马西平血药浓度在1.0~32.0 μg·mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 0),方法回收率为101.3%~110.5%,提取回收率为59.8%~62.1%。结论:本方法操作简单、准确、可靠,适用于测定干血滤纸片中卡马西平的血药浓度。 相似文献
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目的了解广州市5岁以下婴幼儿诺如病毒感染状况及对诺如病毒阳性株进行基因型分析。方法收集广州市2008年5家病毒性腹泻监测点医院的门诊临床诊断为病毒性腹泻的5岁以下患儿临床资料及粪便标本692份,采用ELISA方法检测轮状病毒、腺病毒、星状病毒和诺如病毒抗原,将诺如病毒抗原阳性的标本用RT-PCR方法进行诺如病毒核酸扩增,阳性产物回收、纯化并测序,结合GenBank中的相关序列进行型别流行特点分析。结果 692份标本中,ELISA方法检测4种病毒的阳性率分别为轮状病毒31.9%(221/692)、诺如病毒21.2%(147/692)、腺病毒6.1%(42/692)、星状病毒1.2%(8/692),混合感染占6.8%(47/692)。诺如病毒腹泻病例发病高峰在9—11月份,占51.7%(76/147),2岁以下病例数占91.8%(135/147)。临床症状以腹泻、呕吐、发热、腹痛为主。147份诺如病毒ELISA阳性标本中RT-PCR方法检测诺如病毒核酸阳性率为84.4%(124/147),经测序及与GenBank中的相关序列比对,证实124份均属诺如病毒GⅡ遗传组,其中1份是GⅡ2型,其余均为GⅡ4型,GⅡ4型中又有不同分支。结论诺如病毒是广州市5岁以下儿童病毒性腹泻的常见病原之一,仅次于轮状病毒,常见于2岁以下婴幼儿,流行优势株基因型为GⅡ4型。 相似文献
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目的探讨临床上炎症因子及降钙素原在慢阻肺急性加重期患者病情及预后评估中的应用价值。方法选取2016年5月~2017年11月我院及广东医科大学附属医院收治的慢性阻塞性肺疾病患者100例,回顾分析其临床资料,按照是患者否存活分为死亡组19例和存活组81例。对所有患者的炎症因子及降钙素原(PCT)进行检测,并观察炎症因子、PCT与BODE指数的相关性。结果两组患者治疗第1天hs-CRP、TNF-α、IL-18、PCT对比差异无统计学意义(P0.05);存活组hs-CRP、TNF-α、IL-18、PCT在治疗第7天、治疗第30天的水平都显著低于死亡组,差异有统计学意义(P0.05)。两组患者的hs-CRP、TNF-α、IL-18、PCT与BODE指数均存在显著的正相关性(P0.05)。结论 hs-CRP、TNF-α、IL-18、PCT的水平均可有效反映慢阻肺患者病情,检测方式简便,与BODE指数评价方法具有良好的一致性。 相似文献