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人骨形态发生蛋白3抑制骨肉瘤细胞系MG63和U20S的体外生长 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 研究人骨形态发生蛋白3(hBMP3)对骨肉瘤细胞系MG63和U2OS的生物学作用。方法 hBMP3的重组腺病毒和表达hBMP3的条件培养液(rhBMP3-CM)干预MG63和U2OS,台盼蓝拒染法、TUNEL法、吖啶橙/溴乙啶荧光双染法、Transwell小室和碱性磷酸酶活性测定法分别检测细胞增殖、凋亡、迁移以及成骨分化能力的变化;空白组不做任何处理,实验对照组用AdGFP组和rGFP-CM处理。 结果 实验对照组和空白组间差别无显著性。与各自的对照组相比,在观察时间内,两种处理均致实验组细胞:(1)存活率降低;(2)凋亡率增加;(3)穿膜细胞数减少;(4)碱性磷酸酶活性增加。 结论 hBMP3对骨肉瘤细胞系具有抑制作用,并促其向成骨方向分化。 相似文献
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目的:研究人骨形态发生蛋白(human bone morphogenetic proteins, hBMP)对大鼠骨肉瘤细胞株UMR106的作用。方法:用hBMP2,3,6,12重组腺病毒(AdBMP2,3,6,12)干预大鼠骨肉瘤细胞株UMR106,利用台盼蓝拒染法、TUNEL法、吖啶橙/溴乙啶(AO/EB)荧光双染法、Transwell小室和碱性磷酸酶活性测定法分别检测细胞增殖、凋亡、迁移以及成骨分化能力的变化。结果:与空白对照组和实验对照组比较,AdBMPs的干预致骨肉瘤细胞株细胞存活率降低,并呈一定的时间依赖性;凋亡率均随时间延长而增加,并且TUNEL和 AO/EB两种检测方法的结果一致;3个检测时间点的细胞穿膜数均明显减低;碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性在干预第3天开始逐渐增加,至第9天仍可观测到,以上差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:以腺病毒介导基因转入的作用方式,hBMP2,3,6,12可以抑制大鼠骨肉瘤细胞株UMR106的增殖和迁移,并诱导其凋亡和向成骨细胞分化。 相似文献
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目的:制备人S100A2-GST融合蛋白(HumanS100A2-GST fusion protein,hSIOOA2-GST),为进一步研究人hS100A2蛋白的功能及其与其它因子或系统的相互作用奠定基咄。方法:从pHAHA-hS100A2中双酶切获取hS100A2基因,亚克隆至原恢≠若盘载体pGST-molue,构建pGST-molue-hS100A2,转化BL21后酶切鉴定,IPTG诱导重组菌表达融合蛋白hS100A2-GST,再经过Glutathion-Sepharose4B球珠分离纯化、SDS-PAGE及Western Blot鉴定,Bradford法蛋白定量。结果:XhoI和EcoRI双酶切该重组质粒后获得2个片段,分别约300bp和5kh,提示pGST-moluc-hS100A2构建正确;重组菌株经过IPTG诱导后,表达分子量约为36kD的蛋白,产率达5mg/L菌液;Glutathion~Sepharose4B球珠纯化后,该融和蛋白纯度达92%;WesternBlot显示该蛋白可以被S100A2的抗体特异识别,证实其为hS100A2-GST融合蛋白。结论:成功构建了hS100A2-GST原核表达质粒pGST-moluc-hS100A2;该质粒可在大肠杆菌中诱导表达hS100A2-GST融合蛋白,产率高;应用Glutathion-Sepharose4B球珠可获得纯度达92%的该蛋白。为后续有关hS100A2的研究打下了基础。 相似文献
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人S100A6对人骨肉瘤细胞系β-catenin的作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 研究人S100A6对人骨肉瘤细胞系MG63和U2OS中β-catenin的作用。方法 分别用携带人S100A6及其siRNA基因的重组腺病毒AdS100A6和AdSiS100A6感染MG63和U2OS,分别使细胞中S100A6表达上调和下调;RT-PCR、蛋白印迹和免疫细胞化学法分别检测细胞中β-catenin mRNA和蛋白表达。结果 上调骨肉瘤细胞系MG63和U2OS中S100A6后, β-catenin mRNA和蛋白表达均增加(P<0.05),蛋白的增加以胞核更明显。下调S100A6则使细胞中β-catenin mRNA及蛋白表达减少(P<0.05),蛋白的减少也以胞核更甚。结论 增加Wnt信号途径活性可能是S100A6参与肿瘤发生发展的机制之一。 相似文献
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传统观点认为,成年哺乳动物的心肌细胞高度分化,没有再生能力,只能通过肥大等重构方式代偿.1994年,Soonpaa等[1]发现将小鼠胚胎干细胞移植到成年小鼠发生梗死的心肌部位,能够限制疤痕发展以及预防梗死后心衰的发生;继而有人发现心肌梗死后,在梗死灶边缘及正常心肌组织中有少量心肌细胞发生有丝分裂,说明病理状态下心肌细胞有自我更新的能力[2];提示成年心脏中大部分心肌细胞不可再分裂,但是仍然包含了部分可以再生的细胞,并不是终分化器官,而有内在的再生潜能.近年来,将不同来源包括心肌细胞来源的干/祖细胞体外培养诱导分化为心肌细胞,应用于心肌梗死或者心肌肥大症等,已经成为研究的热点.本文将就心肌干细胞(Cardiacstem cells,CSC)的调控、分化及其在心脏疾病治疗方面的进展进行简要综述. 相似文献
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目的 通过逆转录病毒介导两种类型人干细胞因子在NIH3T3细胞中稳定表达,并研究它们对白血病细胞的作用.方法 用DNA重组技术构建并鉴定可溶型及膜结合型干细胞因子的重组逆转录病毒表达载体MSCV-PGK-GFP-sSCF、MSCV-PGK-GFP-mSCF,与空载体对照MSCV-PGK-GFP分别转染Phoenix细胞包装病毒,并感染NIH3T3细胞,流式分选术获得3种阳性细胞,CCK8法分别检测与其共培养的K562细胞的增殖情况.结果 成功构建了sSCF、mSCF逆转录病毒表达载体;经Phoenix包装的重组及对照逆转录病毒成功感染NIH3T3细胞,获得了稳定表达细胞株NIH3T3-S、NIH3T3-M和对照细胞株NIH3T3-V.共培养中NIH3T3-S、NIH3T3-M均可促进K562细胞的增殖,且在低血清条件下,NIH3T3-M的作用高于NIH3T3-S.结论 可溶性及膜结合SCF分别通过旁分泌和并置性作用促进白血病细胞的增殖. 相似文献
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外源性S100A6对人骨肉瘤细胞株U20S的增殖、凋亡及β-catenin表达的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:探讨外源性S100A6对骨肉瘤细胞株U2OS的生物学作用及其可能机制.方法:MTT法检测S100A6对U2OS细胞增殖的影响及浓度依赖性,台盼蓝拒染法计数活细胞检测S100A6对U2OS增殖作用的时间依赖性,Hoechst 染色检测细胞凋亡,Western blot法及免疫细胞化学法检测细胞内β-catenin的表达变化.结果:S100A6作用3 d时,浓度为30、100、300和1 000μg/ml的重组S100A6(GST-S100A6)组的OD值分别比相应浓度的GST对照组的OD值减少20.5%、23.7%、32.2%和 36.8%,P<0.05;蛋白浓度为100 μ/ml时,GST-S100A6组的细胞数在前2 d与GST组相似,第3、4、5 d的细胞数分别降低到GST组的59%、46%、48%,P<0,05;GST-S100A6干预3 d后细胞凋亡率增高3.16倍,P<0.01;免疫细胞化学法测得经GST-S100A6处理3 d后β-catenin的平均光密度值比GST组增加22.9%,P<0.01;经携带S100A6基因的重组腺病毒(Ad-S100A6) 处理3 d后,Western blot法检测细胞中β-catenin的校正灰度值为1.4204±0.1999,比对照组(Ad-GFP组,0.9996±0.1000)显著增高,P<0.01.结论:外源性SIOOA6能够抑制U2OS细胞的增殖、促进其凋亡和增加U20S细胞中β-catenin水平. 相似文献
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目的探讨抑癌基因FBXW7在Notch1诱导的小鼠白血病发展中的表达变化规律。方法采用Notch1过表达小鼠急性T淋巴细胞白血病移植模型,在发病不同阶段分离骨髓单个核细胞,并在发病晚期用流式细胞术分选CD45.2^GFP+白血病细胞。实时定量PCR方法检测FBXW7的表达变化。结果对照组和白血病组小鼠骨髓细胞均表达FBXW7。Notchl过表达导致的小鼠白血病发展过程中,FBXW7在对照小鼠中表达水平逐渐升高;而在白血病小鼠中,随着白血病发展,表达水平逐渐下降,第12天降至对照组的1/60分选后的CD45.2+GFP+白血病细胞低表达FBXW7。结论FBXW7在小鼠白血病模型中低表达,提示FBXW7介导的泛素化降解途径异常可能与Notchl诱导小鼠白血病发生、发展相关。 相似文献
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