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靶向XT-1基因shRNA真核表达质粒载体的构建及筛选 总被引:1,自引:1,他引:1
目的构建靶向木糖转移酶-1(XT-1)的短发卡状小干扰RNA(shRNA)质粒表达载体;为寻找脊髓损伤治疗的新靶点提供工具。方法设计4个小分子短发卡状RNA(siRNA)序列,体外合成DNA模板引物,与Pgenesil-1质粒构建成编码shRNAR的表达载体,进行酶切和测序,再转染体外培养的星形胶质细胞,筛选靶序列。结果构建的质粒表达载体完全符合设计要求,转染成功的细胞在荧光显微镜下显示绿色荧光,G418可以筛选出阳性克隆。结论成功构建了编码XT-1-shRNA的质粒表达载体;该载体为寻找脊髓损伤治疗的新靶点奠定了基础。 相似文献
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目的:观察肿瘤坏死因子α对体外培养的视神经星形胶质细胞的促增殖作用,为进一步分析星形胶质细胞的功能奠定实验基础。方法:实验于2005-06/10在贵阳中医学院第二附属医院眼科和贵阳医学院解剖学教研室完成。将出生24h以内的新生小鼠断颈处死后,采用机械法分离视神经管内段的视神经,进行视神经星形胶质细胞的原代和传代培养及纯化,倒置相差显微镜观察培养细胞的生长过程和形态学变化。取第3,5,6代以后的细胞接种于24孔培养板中,贴壁后取出分别进行免疫荧光化学染色和免疫细胞化学染色,检测细胞胶质纤维酸性蛋白及S-100阳性产物情况。在第6代培养细胞中添加肿瘤坏死因子α,四唑盐比色法观察肿瘤坏死因子α对胶质细胞增殖的影响。结果:①原代及传代培养的细胞形态光学倒置相差显微镜观察结果:经机械分离培养的原代细胞24h开始贴壁,贴壁细胞形态以梭形、不规则形为主。经消化传代去除悬浮的死亡细胞,培养至第4代以后细胞形态基本一致,细胞体积大,呈星形、梭形及不规则形,突起少,核相对较大,贴壁细胞呈片状生长。②培养的视神经星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白及S-100阳性产物免疫组织化学检测结果:免疫荧光染色及免疫细胞化学染色显示,胶质纤维酸性蛋白及S-100呈阳性,髓磷脂碱性蛋白免疫细胞化学染色阳性率小于1%,未加一抗的呈阴性。第6代以后细胞阳性率达97%以上。③细胞增殖活性四唑盐比色法检测结果:随着肿瘤坏死因子α的浓度加大,胶质细胞表现出增殖亢进现象,以30μg/L表现最为显著,亢进效果明显强于未添加肿瘤坏死因子α的培养细胞(0.197±0.002,0.276±0.005,P<0.001)。结论:机械分离纯化新生小鼠视神经星形胶质细胞纯度高,肿瘤坏死因子α能够促进星形胶质细胞增殖,且呈现出明显的剂量依赖性效应,可在短期内获取大量的细胞,是进一步分析神经胶质细胞结构和功能的可靠材料。 相似文献
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肘管综合征的解剖学研究 总被引:4,自引:0,他引:4
研究了 2 0具 (40侧 )成人尸体上肢的肘管结构 ,观测了弓状韧带的位置、长度、宽度和厚度以及尺神经在该韧带深面的情况 ,并在 6 0块游离肱骨上观测了尺神经沟的形态、深度和宽度 ;对肘管与周围结构关系作了相应的观察 ,对临床上常见的肘管综合征的发病原因作了形态学的研究。 相似文献
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解剖学教学中实施双语教学的体会 总被引:1,自引:0,他引:1
进入21世纪,高等教育人才培养的目标和模式正在发生根本性的变革,素质教育是当前高校教育的目标,双语教学正是适应新形势的要求,把高校素质教育推向前进的又一个新起点。本世纪初在全国普通高等院校逐渐开始实施双语教学以来,取得了一定的成绩,但是对于如何正确有效地在教学活动中实施双语教学,仍是目前高校教育工作十分关注的问题。解剖学是医学院校中一门必不可少的基础课程,如何在解剖学教学中实施有效的双语教学手段,真正达到素质教育的目的,值得广大解剖学教育工作深思。 相似文献
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背景:国内对视网膜干细胞的体外分离培养及鉴定仍处于初步探索阶段。
目的:体外分离、培养及鉴定新生大鼠视网膜干细胞,探讨其多向分化潜能。
方法:用神经干细胞无血清培养方法分离和培养新生24 h的SD大鼠睫状体细胞,第6代视网膜干细胞经胎牛血清诱导分化,应用免疫细胞化学方法检测视网膜干细胞的分化特性。
结果与结论:体外培养的细胞球具有连续克隆能力,Nestin抗原阳性,BrdU 标记结果显示悬浮细胞团主要由分裂增殖的细胞组成,并表达胚胎发育早期视网膜内原始细胞的特异性抗原Chx-10;诱导分化后的细胞表达星形胶质细胞特异性标志物GFAP、神经元特异性标志物NSE、感光细胞标志物Opsin、双极细胞特异性抗原PKC和节细胞特异性抗原β-tubulin,实验初步证实培养的视网膜干细胞具有神经干细胞特性,能自我更新和增殖分化成为感光细胞类型的细胞。
关键词:视网膜干细胞;细胞培养;无血清;细胞分化;大鼠
doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.06.015 相似文献
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