柱前衍生HPLC-UV同时测定人工牛黄中胆酸及猪去氧胆酸的含量

目的建立柱前衍生HPLC-UV同时测定人工牛黄中胆酸及猪去氧胆酸的含量。方法以2-萘基溴甲基酮为衍生试剂,三乙胺为催化剂,60℃水浴条件下对胆酸及猪去氧胆酸进行衍生,考察衍生试剂用量、催化剂用量及反应时间等对衍生产物的影响,确定衍生反应的条件,然后考察建立HPLC-UV分离检测方法对人工牛黄中胆酸及猪去氧胆酸含量进行测定。结果当衍生试剂的摩尔量与胆酸及猪去氧胆酸的摩尔总量的比大于30∶1,催化剂的摩尔量与两者的摩尔总量的比在5∶1~60∶1范围内,在60℃水浴条件下反应50 min时,胆酸及猪去氧胆酸的衍生物反应完全。方法学验证:胆酸在0.4~5.0μg范围内线性关系良好(r=0.999 5);猪去氧胆酸在0.12~1.5μg范围内线性关系良好(r=0.999 8)。胆酸的平均回收率(n=6)为100%,RSD为2.40%;猪去氧胆酸的平均回收率(n=6)为101%,RSD为1.33%。此批次人工牛黄样品中胆酸的含量为5.55%,猪去氧胆酸的含量为2.55%。结论本方法灵敏度高、准确可靠、稳定性和重复性好,可用于测定人工牛黄中胆酸及猪去氧胆酸的含量。     

宽体金线蛭与菲牛蛭抗凝血酶活性及抗凝机制比较研究

摘 要 目的：比较宽体金线蛭和菲牛蛭抗凝血酶活性及对凝血途径的影响,为进一步揭示水蛭抗凝作用机制提供参考。方法: 采用凝血酶滴定法、发色底物法 萃取 HPLC联合法测定水蛭对凝血酶的作用;同时采用凝固法测定其活化部分凝血活酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）和凝血酶时间（TT）,比较宽体金线蛭与菲牛蛭对不同凝血途径的影响。结果: 凝血酶滴定法的结果表明,不同水蛭的抗凝活性顺序依次为：菲牛蛭活体冻干品>菲牛蛭清水吊干品>>宽体金线蛭清水吊干品;发色底物法 萃取 HPLC法测定不同水蛭对凝血酶抑制作用的结果表明：不同水蛭水提取物对凝血酶的作用均表现出低浓度促进,高浓度抑制,且菲牛蛭具有强烈凝血酶抑制活性,而宽体金线蛭在加入更高剂量时才表现出抑制作用,且抑制作用较弱,菲牛蛭的抗凝血酶活性远远高于宽体金线蛭;不同水蛭样品均使APTT、PT、TT延长,但是菲牛蛭活体冻干品主要延长TT,清水吊干品主要延长APTT,而宽体金线蛭使APTT、TT延长更加显著。结论:宽体金线蛭和菲牛蛭对凝血酶及凝血途径的作用很大区别。     

阿托品光学异构体的毛细管电泳法拆分研究

摘 要 目的：考察阿托品光学异构体的毛细管电泳拆分方法。方法: 采用毛细管电泳法,弹性石英毛细管柱（60 cm×75 μm,有效长度40 cm）,磷酸盐缓冲液浓度：30 mmol·L^-1,重力进样高度差10 cm,进样时间：5 s,检测波长：225 nm。分别对手性拆分剂种类及浓度、缓冲溶液的pH、运行电压、有机溶剂等进行考察,优选出最佳拆分条件。 结果: 阿托品光学异构体最佳拆分条件为：缓冲液pH为7.0,磺酸化-β-环糊精聚合物（S-β-CDP）浓度为10 mg·mL^-1,电压为12 kV。结论:本方法简便、快速,能实现对阿托品光学异构体的拆分。     

水提取法和仿生提取法研究水蛭不同炮制品的体外抗凝活性

为确定水蛭传统炮制的科学性,分别采用水提取法和仿生提取法提取水蛭清水吊干品、滑石粉烫制品、酒浸闷烘品中的抗凝活性成分,以活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、抗凝血酶活性作为活性指标进行抗凝测定,并采用考马斯亮蓝法,测定各炮制品提取物中的蛋白含量以初步解释抗凝活性变化原因。对比发现,采用水提取法时,APTT,PT,TT,抗凝血酶活性4种指标结果均显示,滑石粉烫制或酒浸闷烘后水蛭的抗凝活性降低,活性顺序为清水吊干品酒浸闷烘品滑石粉烫制品,此结果与水蛭不同炮制品水提物蛋白含量顺序一致;而采用仿生提取法时,除滑石粉烫制后APTT缩短外,其他结果均显示炮制使水蛭抗凝活性升高,且活性顺序为酒浸闷烘品滑石粉烫制品清水吊干品。仿生提取法与水提取法相比更符合水蛭口服后在人体内的吸收过程,结果更具科学性。所以,传统的炮制方法不仅可以矫味矫臭,还可增强水蛭的抗凝活性作用。