肺腺癌中α5-nAChR和VEGF的表达相关性及其对血管形成的影响

目的 探讨α5-nAChR与VEGF在肺腺癌中表达的相关性及α5-nAChR对血管形成的影响.方法 检索Oncomine、GE-PIA、Kaplan-Meier Plotter数据库分析肺腺癌中编码α5-nAChR的CHRNA5基因和VEGF基因表达相关性及预后情况.干扰A549细胞CHRNA5表达后,制备肿瘤条件培养...     

Cag A阳性幽门螺杆菌对胃癌细胞lncRNA DLEU2表达及上皮间质转化的影响

目的 探讨细胞毒素相关蛋白A(Cag A)阳性幽门螺杆菌（Hp）对胃癌细胞长链非编码RNA淋巴细胞白血病缺失基因2(DLEU2)表达及上皮间质转化的影响。方法 体外培养胃癌细胞系HGC-27、AGS、MGC-803、MKN-28以及正常胃黏膜上皮细胞系GES1,采用RT-qPCR法检测DLEU2表达,并选择DLEU2表达最高的胃癌细胞进行后续实验。将Hp NCTC标准菌株26695或11637分别与正常胃黏膜上皮细胞和胃癌细胞共培养0、3、9、12 h,采用RT-qPCR法检测DLEU2表达。采用Western blotting法检测与NCTC 26695或11637共培养3、9、12 h正常胃黏膜上皮细胞和胃癌细胞Cag A表达以及共培养3、9、12 h神经钙黏着蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）表达。同时,分析与NCTC 26695或NCTC 11637共培养的胃癌细胞DLEU2、Cag A表达与N-cadherin、Vimentin表达的关系。结果 HGC-27、AGS、MGC-803、MKN-28细胞DLEU2相对表达量均高于GES1细胞（P均<0...     

成人Still病的辅助检查

目前,成人Still病的辅助检查缺乏特异性指标,主要表现为机体系统性炎症反应和应急反应的相关指标变化. 1血液骨髓学检查 血常规多表现为轻中度贫血和白细胞增高,病情活动期常有血小板增高;中性粒细胞增高较白细胞增高更为特异,中性白细胞碱性磷酸酶(NAP)积分增高.     

DNA甲基化转移酶在胃癌中的表达及其临床意义

目的 探讨胃癌中DNA甲基化转移酶(DNMT1、DNMT3A、DNMT3B)表达的临床意义与预后的相关性.方法 运用TCGA和GEO数据库分析DNA甲基化转移酶在胃癌和正常组织中的表达差异;运用生存期分析软件Kaplan-Meier plotter分析DNA甲基化转移酶对胃癌患者预后的影响;下载TCGA和GEO数据库中...     

AFP基因特异性miRNA表达质粒的构建及鉴定

目的 构建针对人甲胎蛋白(AFP)基因的miRNA表达质粒,为进一步研究AFP基因功能奠定基础.方法 沿mRNA序列寻找连续两个AA及后面的19个核苷酸,通过同源性比较,选择与其他任何基因无同源性的序列即作为潜在的miRNA靶位点,针对AFP基因的编码序列体外合成两段互补的寡核苷酸,与线性化的pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR RNAi EXPRESSION VECTOR载体连接后转化大肠杆菌,扩增、纯化获得所需质粒,以琼脂糖凝胶电泳、PCR及基因测序鉴定其相对分子质量及插入片段的序列.结果 纯化质粒的相对分子质量为5.8 kb,PCR鉴定结果符合目的 条带(260 bp左右)大小,插人的寡核苷酸序列与设计的序列完全相符.结论 成功构建了针对人AFP基因的miRRA表达质粒.     

分化型胚胎软骨发育基因1特异性小干扰RNA表达质粒的构建和鉴定

背景：分化型胚胎软骨基因1可调控肿瘤生长、凋亡、衰老相关因子,与肿瘤的发生发展有着重要的联系。目的：构建针对人分化型胚胎软骨基因1的小干扰RNA表达载体。方法：从NCBI中查找人分化型胚胎软骨基因1基因全长mRNA序列,利用Katahdin提供的在线小干扰RNA模板序列设计软件,设计针对分化型胚胎软骨基因1的2条shRNA的DNA模板单链,合成靶向分化型胚胎软骨基因1基因转录可形成茎环结构的寡聚核苷酸,退火后与酶切后的pGreenPuroTM shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒连接,在JM-109菌株中扩增,并进行质粒DNA琼脂糖凝胶电泳分析、紫外分光光度计检测、菌落PCR以及测序鉴定。结果与结论：将含有分化型胚胎软骨基因1目标序列25bp的双链DNA插入片段,连接到pGreenPuroTM shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒形成重组质粒。质粒DNA琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计分析结果确认所提质粒纯度较高,可用于后续实验。菌落PCR结果表明产物大小约为170bp,与预期相符。测序结果表明pGreenPuroTM shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒已经插入人分化型胚胎软骨基因1的干扰合成片段,无碱基突变。成功构建了靶向分化型胚胎软骨基因1-小干扰RNA表达载体。     

分化型胚胎软骨发育基因1特异性小干扰RNA表达质粒的构建和鉴定

背景：分化型胚胎软骨基因1可调控肿瘤生长、凋亡、衰老相关因子,与肿瘤的发生发展有着重要的联系。 目的：构建针对人分化型胚胎软骨基因1的小干扰RNA表达载体。 方法：从NCBI中查找人分化型胚胎软骨基因1基因全长mRNA序列,利用Katahdin提供的在线小干扰 RNA模板序列设计软件,设计针对分化型胚胎软骨基因1的2条shRNA 的 DNA 模板单链,合成靶向分化型胚胎软骨基因1基因转录可形成茎环结构的寡聚核苷酸,退火后与酶切后的pGreenPuro™ shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒连接,在JM-109菌株中扩增,并进行质粒DNA琼脂糖凝胶电泳分析、紫外分光光度计检测、菌落PCR以及测序鉴定。 结果与结论：将含有分化型胚胎软骨基因1目标序列25 bp 的双链 DNA插入片段,连接到pGreenPuro™ shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒形成重组质粒。质粒DNA琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计分析结果确认所提质粒纯度较高,可用于后续实验。菌落PCR结果表明产物大小约为170 bp,与预期相符。测序结果表明pGreenPuro™ shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒已经插入人分化型胚胎软骨基因1的干扰合成片段,无碱基突变。成功构建了靶向分化型胚胎软骨基因1-小干扰 RNA表达载体。     

siRNA靶向抑制CPB2基因对乳腺癌细胞TAFI表达及生长和转移的影响

目的探讨靶向羧肽酶B2(CPB2)基因的小干扰RNA(siRNA)对乳腺癌MDA-MB-231细胞凝血酶激活的纤溶抑制物(TAFI)表达以及对乳腺癌细胞的生长和转移的影响。方法将细胞分为siRNA-1组、siRNA-2组、siRNA-3组、阴性对照组和空白对照组5组,设计并化学合成编码TAFI基因(CPB2)的特异性siRNA,用脂质体2000转染至MDA-MB-231细胞中,采用Western blot、RT-PCR分别检测各组TAFI蛋白及mRNA的表达,Transwell侵袭实验检测癌细胞转移侵袭能力,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞存活和生长情况。结果 siRNA抑制CPB2表达后,TAFI蛋白及其mRNA表达水平显著下降,siRNA-1组、siRNA-2组、siRNA-3组与阴性对照组比较细胞侵袭力和细胞生长都明显受到抑制(P<0.05)。结论靶向CPB2的siRNA可有效下调乳腺癌细胞MDA-MB-231中TAFI蛋白及其mRNA表达水平,降低肿瘤细胞的侵袭力,抑制细胞的生长和转移。     

基于生物信息学分析泛癌中PDPN的表达与预后及与免疫细胞浸润的关系

目的:探讨平足蛋白(Podoplanin,PDPN)在泛癌中的表达量与预后及PDPN与免疫浸润之间的关系,为癌症的免疫治疗提供一个新的方向.方法:通过UACLAN、Oncomine和TIMER2.0数据库分析PDPN在泛癌及对应的正常组织中的表达量;通过PrognoScan和Kaplan-Meier Plotter数据...