一个家族性良性天疱疮致病基因的新突变位点

目的 对一个中国人家族性良性天疱疮（HHD）家系进行ATP2C1基因突变检测。方法 调查一个HHD家系3代9人,其中2例具有HHD的临床表现。收集该家系所有成员的外周血,提取基因组DNA,采用PCR扩增ATP2C1基因的27个外显子,用直接测序法进行DNA测序分析。同时设立100例无亲缘关系的正常人作为对照。 结果 在该家系的2例患者中均检测到1个尚未报道过的ATP2C1基因错义突变位点（M 661 R）。在该家系健康个体及无亲缘关系的正常对照均未发现相同突变。结论 在该HHD家系中发现ATP2C1基因一个新的特异性突变位点（M 661 R）。     

CMV启动子调控的VEGF-shRNA表达载体的构建及有效干扰序列的筛选

目的:构建针对人VEGF基因的小干扰RNA(siRNA)的表达载体,实现CMV启动子调控,转染肿瘤细胞后观察其对VEGF基因的干扰作用,并筛选出有效的VEGF-shRNA.方法:设计三对VEGF靶向的发夹状shRNA,依据设计合成两条互补的寡核苷酸链,退火后连接入质粒pDC311-SV40-RC中,转化扩增后进行序列测定.用脂质体包裹转染人骨肉瘤细胞U-2 OS,分别培养3d和7d后收集细胞培养上清液,ELISA检测上清中VEGF蛋白的表达.结果:将针对VEGF基因的siRNA的双链寡核苷酸片段成功克隆到pDC311-SV40-RC载体,经过阳性菌落PCR鉴定与测序,结果正确;转染U-2 OS细胞后,ELISA方法检测蛋白表达水平证实干扰序列3能有效降低VEGF的表达.结论:成功构建了CMV启动子调控的针对VEGF基因的siRNA载体,转染肿瘤细胞后可抑制VEGF的表达,并筛选出有效的干扰序列.     

胶体金法对淋病快速诊断的价值探讨

应用艾康生物技术(杭州)有限公司研发的淋病快速诊断试剂(胶体金法),对2001年1月～4月在我院STD门诊就诊的300例患者的分泌物进行了淋病检测,并同时进行淋球菌培养,以此来验证淋病快速诊断试剂(胶体金法)的特异性和敏感性.此外还对部分患者进行解脲支原体、人型支原体、沙眼衣原体的检测,以便观察其它病原体的存在对淋病快速诊断试剂的检测有无干扰作用.     

梅毒血清固定患者66例临床分析

目的 探讨梅毒血清固定的临床特点、产生原因和相应对策.方法 选取66 例梅毒血清固定患者,分析其临床资料,同时应用流式细胞仪对其中32 例患者(观察组)及同期30例正常对照者(对照组)外周血T 细胞亚群及NK 细胞进行检测.结果 66 例中Ⅰ期梅毒发生血清固定4 例(6%),Ⅱ期梅毒发生血清固定9例(13.6%),潜伏梅毒发生血清固定53 例(80.32%).血清固定RPR 阳性滴度为1∶1～1∶32.其中1 例确诊为Ⅱ期眼梅毒,4 例脑脊液同时有RPR、TPHA阳性,确诊为无症状神经梅毒.梅毒确诊后初治:9 例(13.6%)选用口服红霉素、四环素或阿奇霉素替代疗法,6例(9%)存在不规则用药情况.与对照组比较,观察组外周血T细胞亚群CD3+、CD4+细胞无明显变化(P ＞0.05),CD8+细胞显著升高(P＜0.01),NK 细胞及CD4+/CD8+明显降低(P＜0.01).结论 梅毒感染早期未及时规范治疗、用药不规范或以替代药物治疗、无症状神经梅毒和潜在感染灶存在可能是导致梅毒血清固定的重要原因.梅毒血清固定患者细胞免疫功能紊乱,免疫抑制与梅毒血清固定的发生密切相关.     

泌尿生殖道支原体感染及药敏分析

非淋菌性尿道（宫颈）炎（NGU）为我国重点防治的8种性传播疾病之一。支原体和沙眼衣原体为NGU的主要病原体。新近美国疾控中心的资料显示有30％一40％的NGU是由解脲支原体（uu）和人型支原体（Mh）引起。近年来，我国NGU发病人数不断增加，为了了解浙江地区泌尿生殖道支原体感染状况及药物的敏感性。本文对2005年我院性病专科及泌尿科、妇科门诊疑似尿道炎（宫颈炎）患者作支原体培养及药敏试验。现将结果报告如下。     

乙酰肝素酶-siRNA表达载体的构建及其抑制黑素瘤细胞株体外侵袭能力的观察

目的 构建针对人乙酰肝素酶（HPSE）基因的小干扰RNA（siRNA）及其表达载体，观察其对A375细胞HPSE基因的干扰作用及其对肿瘤细胞体外侵袭的抑制作用。方法 设计并构建了重组质粒pRNATU6.1/HPSE-siRNA，转染A375细胞，用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法分别测定HPSE基因RNA和蛋白水平的表达变化，Matrigel侵袭实验观察A375细胞体外侵袭能力的改变。结果 将针对HPSE基因的siRNA的双链寡核苷酸片段正确克隆到pRNATU6.1载体；转染A375细胞，与对照组比较，HPSE-siRNA组HPSE基因和蛋白的表达均明显降低。转染后肿瘤细胞的体外侵袭能力与对照组相比受到明显抑制。结论 成功构建了针对HPSE基因的siRNA载体，HPSE-siRNA转染A375细胞可以显著降低细胞HPSE基因和蛋白的表达。     

苦参碱对人恶性黑素瘤细胞株侵袭能力及乙酰肝素酶mRNA表达的抑制作用

目的：探讨苦参碱对人恶性黑素瘤细胞株A375的侵袭能力及其乙酰肝素酶mRNA表达的影响作用。方法：A375细胞体外培养，以0．125mg／ml、0．25mg／ml和0．5mg／ml不同浓度苦参碱进行预处理48h后，采用半定量RT—PCR检测各组培养细胞HPSEmRNA表达的变化，细胞黏附实验检测细胞黏附能力的改变，Matrigel侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化。结果：和对照组比较，各浓度苦参碱处理组A375培养细胞HPSEmRNA的表达和细胞黏附侵袭能力均受到明显的抑制（P〈0．01），其抑制效应与药物的浓度呈正相关（组问比较P〈0．01）。结沦：苦参碱可能通过下调A375细胞HPSEmRNA的表达而显著抑制细胞的黏附侵袭能力，其抑制作用呈剂量依赖性。     

苦参碱对人恶性黑色素瘤A375细胞株增殖和凋亡的影响

目的 研究苦参碱对人恶性黑色素瘤A375细胞株增殖和凋亡的影响.方法 用MTT法观察不同浓度苦参碱对培养的人恶性黑色素瘤A375细胞增殖的抑制作用,采用Annexin-V-FIFT/PI双染色法检测其凋亡细胞,并用倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态学的改变.结果苦参碱明显抑制A375细胞增殖,其抑制率与药物浓度和作用时间呈正相关.凋亡细胞的比例与药物浓度呈剂量依赖性.光镜和电镜观察证实随着苦参碱浓度的增加,A375凋亡细胞增多.结论 苦参碱对人恶性黑色素瘤细胞的增殖具有明显的抑制作用,并能诱导其发生凋亡.     

microRNA-31在尖锐湿疣患者皮损中的表达及其临床意义

目的探讨microRNA-31（miR-31）在尖锐湿疣（CA）患者皮损中的表达及其临床意义。方法收集CA患者60例（CA组）及20例行包皮环切的健康者（对照组）,两组包皮组织均送检临床免疫室,行人乳头瘤病毒（HPV）杂交分型鉴定,均签署知情同意书。采集CA组性别、年龄、病毒分型、病程、发作次数、发作部位及基础疾病等相关临床资料。采用实时荧光定量PCR法检测CA皮损和正常包皮miR-31的表达,并和临床性征进行相关性分析。结果和对照组比较,CA患者皮损中的miR-31表达显著增高（P〈O．05）,其表达高低与患者病程及复发次数关系密切,而和性别、年龄、病毒分型及伴发疾病等因素无关。结论miR-31在CA的发生发展中发挥重要作用。