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小鼠甲胎蛋白与结核杆菌热休克蛋白70基因融合载体的构建及体外表达 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 构建小鼠甲胎蛋白(α-Fetoprotein,AFP)与结核杆菌热休克蛋白70(Mycobacterium tuberculosis heat shock protein 70,Mt.HSP70)基因融合载体.并研究其在真核细胞中的表达情况。方法 以pcDNA3.1为基本单位构建AFP及HSP70的融合表达载体,融合基因以G-S-G-G-S连接子连接;用脂质体将系列载体导入COS-7细胞.48h后以免疫化学方法检测其表达。结果 构建的AFP和HSP70的单独及融合表达载体导入COS-7细胞48h后经RT-PCR检测可扩增出相应片段,细胞免疫化学染色为阳性。结论 AFP和HSP70的单独及融合表达载体构建成功,并能在真核细胞中表达。 相似文献
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目的 探讨3种不同类型的HBsAg真核表达质粒在EBV永生化B淋巴母细胞中的表达。方法 用3种不同类型的质粒载体分别构建乙型肝炎表面抗原(HBsAg)真核表达质粒(pCI-S,pMEP4-S,pLXSN-S);然后用阳离子脂质体介导的转染法分别转染正常人EBV永生化的B淋巴母细胞,经G418或HygromycinB筛选出抗性细胞克隆,用RT-PCR检测抗性细胞总RNA中目的基因在转录水平的表达;用ELISA检测抗性细胞培养上清和细胞裂解液中HB-sAg的含量。结果 3种不同类型HBsAg重组表达质粒转染的EBV永生化B淋巴母细胞,在转录水平上,可检出HB-sAgmRNA的表达;在蛋白水平上,细胞增养上清和细胞裂解液均可检出HBsAg;而以EB病毒表达质粒pMEP4-S表达最高,真核表达质粒pCI-S和逆转录病毒表达质粒pLXSN-S表达HBsAg的量无明显差异。结论 3种不同类型的HBsAg真核表达质粒均可在EBV永生化B淋巴母细胞中稳定表达,EB病毒表达质粒pMEP4-S表达的HBsAg明显高于真核表达质粒pCI-S和逆转录病毒表达质粒pLXSN-S。 相似文献
3.
目的:构建乙肝HBsAg和结核杆菌HSP70融合表达质粒。方法:用PCR方法从结核杆菌H37Rv基因组中扩增出结核杆菌HSP70基因序列,应用T-A克隆技术,克隆到质粒pGEM-T vector,经DNA测序证实基因碱基无误后,亚克隆到真核表达质粒pcDNA3.1( ),构建成pcDNA3.1-HSP70重组质粒,然后,再用PCR方法,从质粒pEcob6中扩增出HBsAg基因,并克隆到质粒pcDNA3.1-HSP70,将HBsAg基因的C端与HSP70基因N端连接,构建HBsAg和HSP70融合表达质粒pcDNA3。1-SHSP70,结果:经酶切鉴定和DNA测序证实重组质粒构建正确,结论:乙肝HBsAg和结核杆菌HSP70融合表达载体构建成功。 相似文献
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目的了解某院不明原因发热(FUO)患者病因,及其明确诊断的方法,为临床诊断和治疗FUO提供参考。方法应用血清学、细菌学、分子生物学、骨髓穿刺、组织活检,以及诊断性治疗等方法,对该院2008年1月—2014年7月收治的FUO住院患者进行临床诊断,回顾性分析224例FUO患者病因和最终诊断。结果最终明确病因者189例,占84.38%;未明确者35例,占15.62%。其中感染性疾病、结缔组织病、恶性肿瘤、其他类疾病分别占50.45%、18.75%、9.82%、5.36%。在感染性疾病中,细菌为主要病原体,其次为病毒;结缔组织病以系统性红斑狼疮和结节性多动脉炎为主;恶性肿瘤以血液系统肿瘤为主,而淋巴瘤最常见。189例确诊患者采用病原学检查者占30.16%,病理学检查者占24.34%,其他方法(综合分析)占20.11%。结论感染性疾病、结缔组织病、肿瘤为FUO的主要病因。 相似文献
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目的 探讨重症急性呼吸综合征(SARS)病毒对心脏的影响。方法 观察SARS病人(66例)与普通病毒病人(70例)心率、心肌酶、心电图、心脏B超和预后情况并作比较;同时观察SARS重症病人(30例)与轻中度SARS病人(36例)心脏损害的程度。结果 SARS病人较普通病毒病人较易出现心脏损害,但预后比较差异无显著性;而重症SARS病人较轻中度SARS病人易出现心律失常,但心肌酶及ST-T异常与预后比较差异无显著性。结论 SARS病毒较普通病毒易导致心肌损害,重症SARS病人心律失常较轻症者严重;早期、适当加强心肌营养治疗对治疗SARS并发心脏损害有积极的临床意义。 相似文献
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循证医学是运用最新、最有力的科研信息,指导临床医生采用最适宜的诊断方法、最精确的预后估计和最安全有效的治疗方法来医治病人。循证医学是一种新的医学模式,也是一种新的医学教育模式。本文探讨如何在大学本科的传染病学实习中,引入循证医学的理念、原则和方法,形成以问题为中心,变学生被动学习为主动学习的教学模式;帮助医学生学会掌握自我更新医学知识和临床技能的方法和技巧,成为一名终身的自我教育者。 相似文献
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目的 分析有关临床资料,探索自诉不明原因感染患者的临床特征,为其诊治提供参考依据.方法 收集在医院门诊及住院的自述不明原因感染患者256例,对其流行病学、临床症状及体征、辅助检查、实验室病原体检测以及心理测试量表等各项资料进行综合分析,并探讨与人疱疹病毒的相关性.结果 256例患者,男性占86.72%,女性占13.28%;67.9%患者有高危性行为史、临床主诉多、并反复出现,仅37.1%患者有阳性体征,重要脏器功能无异常;仅4.3%的患者出现CD4+减少;全部患者HIV检测阴性;73.0%患者在多种标本中检出入疱疹病毒阳性;12例接受心理测试发现异常有9例.结论 患者无重要器官病变,可排除HIV感染,是否与人疱疹病毒感染相关,有待进一步研究. 相似文献
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肺癌是常见的恶性肿瘤之一,目前认为,肺癌的病因除了致癌因素、遗传因素外,机体免疫监视功能的降低也起重要的作用,现认为在排除肿瘤细胞中起主要作用的是细胞免疫。其中NK和LAK细胞是重要的免疫细胞之一。本文研究肺癌病人NK活性和LAK活性,以及一些细胞因子对NK活性的影响,为了解肺癌的发展、转归及免疫治疗提供实验数据。1材料1.1实验对象:肺癌病人为我院外科待手术者(男18例,女7例),年龄45~75岁,术后经病理确诊,其中鳞癌15例,腺癌州例;采血前未经任何化疗、放疗,未用免疫抑制及免疫增强剂。对照组;健康体检出国… 相似文献
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目的探讨3种不同类型的HBsAg真核表达质粒在EBV永生化B淋巴母细胞中的表达. 方法用3种不同类型的质粒载体分别构建乙型肝炎表面抗原(HBsAg)真核表达质粒(pCI-S、pMEP4-S、 pLXSN-S);然后用阳离子脂质体介导的转染法分别转染正常人EBV永生化的B淋巴母细胞,经G418或Hygromycin B筛选出抗性细胞克隆,用RT-PCR检测抗性细胞总RNA中目的基因在转录水平的表达;用ELISA检测抗性细胞培养上清和细胞裂解液中HBsAg的含量. 结果 3种不同类型HBsAg重组表达质粒转染的EBV永生化B淋巴母细胞,在转录水平上,可检出HBsAg mRNA的表达;在蛋白水平上,细胞培养上清和细胞裂解液均可检出HBsAg;而以EB病毒表达质粒pMEP4-S表达最高,真核表达质粒pCI-S和逆转录病毒表达质粒pLXSN-S表达HBsAg的量无明显差异. 结论 3种不同类型的HBsAg真核表达质粒均可在EBV永生化B淋巴母细胞中稳定表达,EB病毒表达质粒pMEP4-S表达的HBsAg明显高于真核表达质粒pCI-S和逆转录病毒表达质粒pLXSN-S. 相似文献
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目的 构建乙型肝炎表面抗原(HBsAg)逆转录病毒表达质粒并探讨其在真核细胞中的表达。方法 用限制性内切酶从重组质粒pBKS—S中切出HBsAg基因,并亚克隆到逆转录病毒表达质粒pLXSN,构建成重组质粒pLXSN—S;经限制性内切酶消化和DNA序列测定鉴定无误后,用阳离子脂质体转染法将重组质粒pLXSN—S分别转染HepG2、K562和EB病毒转化B淋巴母细胞(EBVC);用ELISA法检测HBsAg在细胞培养上清中的表达。结果 经酶切和DNA序列测定鉴定证实重组质粒构建正确;质粒pLXSN—S转染细胞培养上清均可检测到HBsAg。结论 逆转录病毒表达质粒pLXSN—S构建成功并可在真核细胞中稳定表达。 相似文献