荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐药性的价值

搜集全部2017年9月至2019年8月西安市胸科医院确诊的结核病住院患者546例作为研究对象,评价荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)探针熔解曲线法(简称“熔解曲线法”)检测结核分枝杆菌(MTB)耐药性的临床应用价值。收集患者痰标本,每份标本量均不少于2ml。经菌种鉴定,最终纳入531例(株)为研究对象。每例患者采用同一标本进行BACTEC MGIT 960液体培养药物敏感性试验(简称“MGIT 960药敏试验”)和熔解曲线法耐药基因检测,对MGIT 960药敏试验和熔解曲线法检测利福平、异烟肼耐药性结果不一致者采用基因芯片法耐药基因检测对熔解曲线法结果进行验证。以MGIT 960药敏试验检测结果为参考标准,熔解曲线法检测肺结核患者痰标本MTB对链霉素耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为86.67% (39/45)、99.38% (483/486)、98.31% (522/531)和0.887;检测肺结核患者痰标本MTB对异烟肼耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为69.23% (54/78)、98.68% (447/453)、94.35% (501/531)和0.751;检测肺结核患者痰标本MTB对利福平耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为87.50% (42/48)、96.89% (468/483)、96.05% (510/531)和0.778;检测肺结核患者痰标本MTB对乙胺丁醇耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为50.00% (9/18)、98.83% (507/513)、97.18% (516/531)和0.531。在熔解曲线法检测结果为耐药而MGIT 960药敏试验为敏感的30例患者中,熔解曲线法检测结果显示:对异烟肼耐药的6例均为katG 315位密码子突变;对利福平耐药的15例中,ropB 507-512、ropB 521-528、 ropB 529-533位密码子突变分别为3例、3例、9例;对链霉素耐药的3例均为rrs 513-517位点突变;对乙胺丁醇耐药的6例均为embB 306位密码子突变。基因芯片法耐药基因检测结果显示:对异烟肼耐药的6例中katG 315 (AGC→ACC)突变和katG 315 (AGC→AAC)突变各3例;对利福平耐药的15例中,ropB基因511位CTG→CCG突变、526位CAC→TAC突变和531位TCG→TGG突变各3例、3例、9例,与熔解曲线法检测结果一致。可见,荧光PCR探针熔解曲线法对链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇耐药性突变位点检测具有较好的检测效能,可用于临床上对一线抗结核药品耐药情况的快速筛查。     

DNA实时荧光恒温扩增法在结核病临床检测中的应用价值

目的分析DNA实时荧光恒温扩增法(简称"恒温扩增法")在结核病临床检测中的应用价值。方法收集2019年1—6月西安市胸科医院收治的疑似肺结核患者2421例,其中共有356例患者留取的痰液标本同时进行了BACTEC MGIT 960液体培养、利福平耐药实时荧光定量核酸检测(GeneXpert MTB/RIF法)、传统DNA实时荧光定量核酸检测(FQ-PCR法)、结核分枝杆菌RNA实时荧光恒温扩增(SAT-RNA法)、恒温扩增法检测。以MGIT 960技术检测结果为金标准,计算其他4种检测技术的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率、Kappa值。对恒温扩增法阳性的121份核酸样本使用熔解曲线法检测利福平ropB基因,研究恒温扩增法提取核酸应用于耐药基因检测的价值。结果以MGIT 960技术检测结果为金标准,恒温扩增法的敏感度(78.83%,108/137)低于GeneXpert MTB/RIF法(95.62%,131/137),高于FQ-PCR法(74.45%,102/137)和SAT-RNA法(59.12%,81/137),差异均有统计学意义(χ²值分别为...     

HPLC法测定桔贝合剂中黄芩苷的含量

目的:建立以高效液相色谱法测定桔贝合剂中黄芩苷含量的方法。方法:色谱柱为Spherisorb C18(200mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-水-磷酸(47:53:0.2),检测波长为280nm,流速为1mL.min-1,柱温为室温。结果:黄芩苷进样量在0.1024～0.9216μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系;平均加样回收率为99.98%,RSD=0.95%(n=6)。结论:本方法精密度高、分离度好,可用于桔贝合剂的质量控制。     

复方夏枯草的化学成分研究

目的：研究复方夏枯草的化学成分.方法：利用各种色谱技术进行分离纯化,根据化合物的理化性质和波谱数据进行结构鉴定.结果：从氯仿部位中分离出4个单体化合物,分别为钩藤碱、莨菪碱、二氢白屈菜红碱、25（29）-亚甲基-26-甲基-26-乙基胆甾醇.结论：其中化合物Ⅲ（二氢白屈菜红碱）和化合物Ⅳ（25（29）-亚甲基-26-甲基-26-乙基胆甾醇为首次在该方中发现的化合物.     

分枝杆菌培养中同步筛检依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)的临床应用价值

目的 分析探讨培养分枝杆菌时同步筛检依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)临床意义及价值. 方法 2011年3月—2015年3月所采集530例临床标本进行培养使用利福平浓度100μg/mL罗氏(L-J)培养基建立依R菌筛查系统,将待分离培养分枝杆菌平行接种于罗氏对照空白培养基(L-J)与L-J R100培养基中分别培养,依照培养基选用种类分别分成L-J R100、L-J、BD960 3组, 并对结果 进行分析统计. 结果 L-J R100培养基检出76例阳性结核分枝杆菌,且皆为依R菌,菌株粗大,生长良好,L-J R100阳性菌株所占比例为14.34%,L-J阳性菌株所占比例23.21%, BD960阳性菌株所占比例为52.83%. 结论 培养分枝杆菌时同步筛查依R菌能得到绝对依赖菌株,可提高分枝杆菌阳性检出率,可最快速度判断阳性菌株耐药性及是否对利福平具依赖性,该方法 可靠易行,具有临床推广价值.     

γ-干扰素释放试验在结核病专科门诊诊断儿童活动性结核病的效能

目的 评价γ-干扰素释放试验(interferon-gamma release assay, IGRA)在结核病专科门诊诊断儿童活动性结核病的效能。方法 回顾性分析2019年1月至2021年12月就诊于西安市胸科医院结核病门诊的268例疑似结核病患儿为研究对象,采用area under the ROC curve (AUC)评估在不同年龄阶段,有无卡痕,有无结核病密切接触史患儿中IGRA诊断活动性结核病的效能。结果 在结核病专科门诊,IGRA诊断儿童活动性结核的敏感度、特异度、阴性预测值、阳性预测值、AUC分别为80.6%、63.6%、48.6%、88.5%、0.74。IGRA诊断儿童结核病AUC(95%CI值),在年龄≤5岁患儿中为0.71(0.62～0.80),低于6～14岁组的0.75(0.70～0.81),两组差异无统计学意义(Z=-0.848,P=0.40);在可见卡痕患儿中为0.72 (0.67～0.78),与未见卡痕组的0.72(0.61～0.83)无统计学差异(Z=0.067,P=0.946);在有密接史组为0.83(0.75～0.91),高于无密接史组的0.72(0....     

脑脊液腺苷脱氨酶水平检测在结核性脑膜炎早期诊断中的价值

目的:探讨脑脊液(CSF)中腺苷脱氨酶(ADA)水平检测在结核性脑膜炎(TBM)早期诊断中的价值。方法:收集以头痛、发热、精神状态改变和脑膜刺激征为特征的疑似TBM患者65例为研究对象。根据确诊结果将所有患者分为TBM组(45例)和非TBM组(20例)。所有患者在住院后2周内进行腰椎穿刺术,留取CSF,检测并比较两组患者CSF中ADA水平。采用受试者工作特征(ROC)曲线评估ADA对TBM的早期诊断价值。结果:TBM组CSF中ADA水平在3～26 U/L,中位数(四分位数间距)为8(6,10)U/L。非TBM组CSF中ADA水平在0～5 U/L,中位数(四分位数间距)为1(0,2.75)U/L。TBM组患者CSF中ADA水平高于非TBM组(Z=-6.176,P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,当CSF中ADA水平为4.5 U/L时,其诊断TBM的曲线下面积(AUC)为0.98,敏感度为93.33%,特异度为90.00%。结论:TBM患者CSF中ADA水平升高,在TBM早期诊断中具有较高的敏感性和特异性。     

常用实验室技术诊断结核性脑膜炎效能的比较研究

目的 对常用实验室技术诊断结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)的效能进行比较研究,以提高临床早期诊断TBM的水平。方法 采用BACTEC MGIT 960液体培养(简称“MGIT 960法”)、改良抗酸染色(简称“MZN法”)、GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert法”)、荧光探针法聚合酶链式反应(简称“PCR-荧光探针法”)和结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)等5种实验室检测技术对西安市胸科医院2017年1月至2018年4月期间收治的244例成年疑似结核性脑膜炎患者脑脊液进行检测。包括71例TBM组患者(确诊组36例,很有可能组23例,可能组12例)及33例非TBM组患者。评价上述5种实验室技术诊断TBM的效能,并探讨细菌学方法组(MGIT 960和MZN法)、分子生物学方法组(GeneXpert和PCR-荧光探针法)、免疫学方法组(T-SPOT.TB),以及上述5种技术联合诊断组(简称“联合诊断组”)在TBM早期诊断中的价值,并比较5种实验室技术之间、4种方法组之间诊断TBM敏感度的差异。结果 以临床诊断为标准,5种检测技术诊断TBM的特异度和阳性预测值均为100.0%;MGIT 960法、MZN法、GeneXpert 法、PCR-荧光探针法和T-SPOT.TB检测技术诊断TBM的敏感度分别为19.7%(14/71)、26.8%(19/71)、42.3%(30/71)、35.2%(25/71)、29.6%(21/71);GeneXpert法和PCR-荧光探针法的敏感度均高于MGIT 960法,差异均有统计学意义(χ ²=8.43,P=0.004;χ ²=4.28,P=0.039)。细菌学方法组、分子生物学方法组、免疫学方法组及联合诊断组的敏感度分别为31.0%(22/71)、50.7%(36/71)、29.6%(21/71)、73.2%(52/71);分子生物学方法组和联合诊断组的敏感度高于细菌学方法组,差异均有统计学意义(χ ²=5.71,P=0.017;χ ²=73.20,P=0.000)。 结论 在TBM的早期诊断中,GeneXpert法与PCR-荧光探针法的敏感度高于MGIT 960法;各实验方法联合检测有助于提高诊断TBM的敏感度,并且与细菌学方法组相比,分子生物学方法组以及联合诊断组的敏感度更高。     

93例结核性脑膜炎患者脑脊液分离株耐药性检测结果分析

目的 分析结核性脑膜炎(tuberculous meningitis,TBM)患者脑脊液(cerebrospinal fluid,CSF)分离株耐药性检测结果,为临床治疗结核性脑膜炎药品的选择提供参考。方法 收集西安市胸科医院2013年12月至2019年12月CSF培养阳性且菌种鉴定为结核分枝杆菌的93例患者的样本,并进行药物敏感性试验(简称“药敏试验”)。分析对异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、链霉素(Sm)、阿米卡星(Am)、卷曲霉素(Cm)、左氧氟沙星(Lfx)、莫西沙星(Mfx)、丙硫异烟胺(Pto)、对氨基水杨酸钠(PAS)的耐药情况。计数资料采用χ²检验、Fishier精确检验,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果 (1)93株分离株中有56株(60.2%)对抗结核药品均敏感,37株(39.8%)对至少一种抗结核药品耐药,19株(20.4%)同时对INH和RFP耐药,即耐多药;(2)总耐药率从高到低分别为INH(31.2%,29/93)>Sm(25.8%,24/93)>RFP(21.5%,20/93)>Lfx(7.5%,7/93)>EMB(5.4%,5/93)=PAS(5.4%,5/93)>Mfx(3.2%,3/93)=Am(3.2%,3/93)=Cm(3.2%,3/93)>Pto(0.0%,0/93);(3)比较初、复治患者对各药品的耐药率,INH耐药率在初复治组[分别为29.3%(22/75)和38.9%(7/18)]差异无统计学意义(χ²=0.618,P=0.432);EMB耐药率在初复治组[分别为4.0%(3/75)和11.1%(2/18)]差异无统计学意义(Fishier精确检验,P=0.247);Am耐药率在初复治组[分别为2.7%(2/75)和5.6%(1/18)]差异无统计学意义(Fishier精确检验,P=0.480);Cm耐药率在初复治组[分别为4.0%(3/75)和0.0%(0/18)]差异无统计学意义(Fishier精确检验,P=1.000);Mfx耐药率在初复治组[分别为1.3%(1/75)和11.1%(2/18)]差异无统计学意义(采用Fishier精确检验,P=0.095);RFP耐药率在初治组[17.3%(13/75)]低于复治组[38.9%(7/18)](χ²=3.996,P=0.046);Sm耐药率在初治组[20.0%(15/75)]低于复治组[50.0%(9/18)](χ²=6.823,P=0.009);Lfx耐药率在初治组[2.7%(2/75)]低于复治组[27.8%(5/18)](Fishier精确检验,P=0.003)。结论 TBM患者CSF结核分枝杆菌临床分离株对一线抗结核药品INH、Sm、RFP的耐药现象较为严重,二线抗结核药品中对Lfx耐药情况最为严重,对Am、Cm、Pto敏感性较好。在TBM治疗中应考虑到初、复治患者耐药情况的不同,合理制定化疗方案,以改善患者预后。     

涂阳肺结核患者γ-干扰素释放试验假阴性的影响因素分析

目的分析γ-干扰素释放试验(IGRA)检测痰涂阳肺结核患者出现假阴性结果的影响因素。方法搜集2019年6-12月就诊于西安市胸科医院的196例痰涂阳肺结核患者作为研究对象,其中,男145例(74.0%),女51例(26.0%);年龄中位数(四分位数)[M(Q₁,Q₃)]为38(26,53)岁。按IGRA检测结果分为IGRA检测阳性组(106例)和假阴性组(90例)。收集研究对象一般资料、临床症状、实验室检验资料,以及胸部CT表现,采用多因素logistic回归分析IGRA检测痰涂阳肺结核患者出现假阴性结果的影响因素。结果 196例研究对象中,IGRA检测阳性106例,阳性率为54.1%。IGRA阳性组白细胞计数的M(Q₁,Q₃)为6.3(5.0,7.5)×10⁹个/L,低于IGRA假阴性组的7.4(5.8,9.2)×10⁹个/L,差异有统计学意义(Z=-3.464,P=0.001);血红细胞沉降率的M(Q₁,Q₃...