不同方式接种DNA疫苗免疫效果的比较

DNA疫苗经基因枪和肌肉注射两种接种方式免疫小鼠 ,免疫组化检测gD抗原表达情况。全自动图像分析系统分析表达量 ,ELISA检测抗体滴度 ,病毒攻击考察保护效应 ,比较不同方式接种DNA疫苗的免疫效果。重组质粒pVAX gD经基因枪接种与肌肉接种均能实现gD基因在肌肉细胞的表达 ,激发免疫动物体内的高滴度抗体 ,保护免疫动物免于HSV 2感染。研究表明基因枪接种要求的DNA疫苗剂量小 ,基因枪介导的免疫重复性高、效果好 ,更适合DNA疫苗接种。     

复合珊瑚羟基磷灰石人工骨的研制及其成骨效应

目的 自行研制复合珊瑚羟基磷灰石人工骨并评估其成骨效应。方法 取南海澄黄滨珊瑚碳酸钙在特定条件下经过“热液交换反应”，制成单纯珊瑚羟基磷灰石(coralline Hydroxyapatite，CHA)人工骨，并将其与基因重组骨形态发生蛋白(rhBMP2)和几丁糖复合制成了三种复合珊瑚羟基磷灰石(composite Coralline Hydroxyapatite，CCHA)人工骨，将此三种不同配型的复合人工骨和单纯CHA人工骨分别植入四组24只SD大白鼠肌肉内。手术后2、4、6、8周取材进行组织学观察，计数高倍单位视野内的成骨细胞数量和炎性细胞数量。采用SPSS8.0统计软件处理系统分析。结果 术后各时期取材结果显示：B组(CHA rhBMP2)和D组(CHA rhBM2P 几丁糖)的单位视野内成骨细胞数量明显多于A组(单纯CHA)和C组(CHA 几丁糖)：而C组和D组的单位视野内炎性细胞数量明显少于A组和B组。即D组人工骨的单位视野内的成骨细胞数量多、炎性细胞少。结论 rhBMP2-几丁糖／CHA复合人工骨不但具有显著的成骨诱导作用，还具有炎症反应轻及持续的诱导成骨作用，是一良好的骨移植替代物。     

人血管生成素的基因克隆及真核表达

血管生成素 (angiogenin ,ANG)是存在于正常血浆及实体肿瘤组织中的一种属于核糖核酸酶超家族[1] ,分子量为 14 1kD、pI9 5的蛋白质 ,基因定位于染色体 14q11。ANG是一种能有效促进新生血管形成的刺激因子 ,具有很强的促血管生成作用。因此开展ANG的相关研究在损伤修复及组织工程学中极有意义。本文旨在构建ANG真核表达载体 ,转染人脐静脉内皮细胞 (HUVEC) ,研究其在HUVEC中的表达情况 ,为进一步研究ANG对HUVEC生长状况的影响以及ANG在组织工程学中的应用奠定基础。1　材料与方法1 1　材料　EcoRⅠ、BamHⅠ为Promega产品 ,…     

基因枪介导单纯疱疹病毒DNA疫苗的免疫效果研究

目的：研究单纯疱疹病毒DNA疫苗经基因枪免疫小鼠的效果。方法：基因枪免疫小鼠腹部，免疫组化法检测gD抗原在接种部位的表达；ELISA检测血清中抗gD抗体；病毒攻击检测经基因枪免疫的DNA疫苗对动物的保护效果。结果：基因枪可有效将DNA质粒运送至小鼠真皮内，单纯疱疹病毒Ⅱ型gD2糖蛋白基因在真皮和肌肉组织中高效表达，免疫小鼠体内产生高滴度的中和抗体，能有效抵抗HSV-2病毒的攻击。结论：疱疹病毒gD DNA疫苗通过基因枪接种方式，可在小鼠体内产生特异性保护作用。     

人癌胚抗原重组痘苗病毒转染树突状细胞体外诱导的抗肿瘤免疫

目的：研究人癌胚抗原重组痘苗病毒（rV-CEA)转染外周血树突状细胞（DC）后在外体诱导的抗CEA分泌性肿瘤免疫。方法：分离晚期结肠癌患者的外周血单核细胞，在体外用人重组粒－巨噬细胞集落刺激因子（GM－CSF）及白细胞介素4（IL－4）培养成DC，再用rV-CEA转染DC后激发自体T细胞，观察其体外激发自体T细胞的增殖能力及其诱导的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）对自体CEA分泌性肿瘤细胞的杀伤活性，并与野生型痘苗病毒（W－VV）及无病毒转染的DC所激发的T细胞进行比较。结果：经rV-CEA转染的DC能显著刺激自体T细胞的增殖，其激活的T细胞对CEA分泌性自体肿瘤细胞具有特异性杀伤作用。结论：rV-CEA转染的DC可以诱导体CEA分泌性肿瘤免疫。     

肾外恶性横纹肌样瘤1例

患者女性 ,18岁。因右上腹及右腰部胀痛月余入院。检查 :血压 17/ 10ｋＰａ ,血生化正常 ;查体腹部平坦 ,右上腹有轻压痛 ,无反跳痛 ,余未见异常。Ｂ超检查腹膜后右肾上方、肝脏下方见 7 2ｃｍ× 6 1ｃｍ实性光团回声 ,边界清 ,有包膜 ,内回声不均匀 ,彩超血流内部未显示 ,考虑为腹膜后实性占位性病变。ＣＴ平描示 ,右肾上方 4 5ｃｍ× 5 5ｃｍ椭圆形软组织肿块 ,密度均匀 ,边界较清楚 ,右肾上腺欠显影 ,肝门及肝右叶受压 ;增强示 ,动脉期肿块轻度强化 ,内有紊乱血管影 ,动脉期肿块影强化相对降低 ,密度欠均匀。提示腹膜后右肾上腺区肿瘤…     

人血管生长素的真核表达及亚细胞定位

目的:建立人血管生成素(angiogenin,ANG)的真核表达系统并在细胞内亚定位。方法:采用亚克隆技术构建重组荧光真核细胞表达质粒pEGFP/ANG,然后经脂质体介导转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)并对转染细胞内pEGFP/ANG的表达用荧光显微镜和免疫组化染色进行鉴定。用共聚焦显微镜和免疫电镜观察ANG的亚细胞定位。结果:荧光显微镜观察可见转染的HUVEC内发出强绿色荧光。免疫组化染色检测显示,转染的HUVEC中有棕色颗粒。共聚焦显微镜及免疫电镜检查显示,ANG集聚于细胞核区。结论:以构建的重组体pEGFP/ANG转染HUVEC后,可表达人ANG蛋白;表达的ANG定位于细胞核区。     

低剂量伽玛刀照射对致(癎)大鼠皮质及海马神经元c-fos和nNOS表达的影响

目的 通过观察低剂量伽玛刀照射对致(癎)大鼠大脑皮质及海马神经元c-fos和脑型一氧化氮合酶(nNOS)表达的影响,探讨伽玛刀治疗癫(癎)的作用机制.方法 将44只青霉素致(癎)大鼠模型等分为实验组和实验对照组大鼠各22只,另取4只正常大鼠作为正常对照组.实验组行伽玛刀照射(周边剂量12 Gy)后,应用免疫组化方法,观察大脑皮质及海马神经元c-fos和nNOS表达的变化.结果 无论是皮质还是海马,c-fos和nNOS在实验组与实验对照组动物之间,表达均有明显的差别,实验组表达明显少于实验对照组,而后者呈现双高峰现象.结论 c-fos和nNOS在伽玛刀治疗癫(癎)的机制中发挥了重要作用.     

骨唾液酸蛋白在体外培养人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化中的角色

目的：骨唾液酸蛋白在骨矿化形成方面扮演重要角色，实验观察其是否能诱导体外培养的人骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化。方法：实验于2005—10／2006—12在解放军广州军区广州总医院医学实验科完成。①材料来源：选取在本院体检的健康志愿者2人，对本实验均知情同意。采用Ni-NTA亲和纯化技术，从本室构建的毕赤酵母GS115／pPICZaA-hbsp发酵上清中纯化重组人骨唾液酸蛋白。②实验方法：对健康志愿者进行髂骨穿刺抽取骨髓液，采用贴壁法培养得到骨髓间充质干细胞。设立4组：骨唾液酸蛋白组添加0．1nmol／L骨唾液酸蛋白；成骨诱导液组添加10nmol／L地塞米松、10mmol／L磷酸甘油、50mg／L抗坏血酸；联合组添加上述两组的所有试剂；空白对照组不添加任何处理因素；各组均处理细胞12d。⑧实验评估：光镜及电镜观察培养的细胞形态；以细胞计数法测定生长曲线，应用流式细胞仪分析细胞周期，采用免疫荧光细胞化学法和流式细胞分析检测干细胞标志物STRO-1的表达；生化试剂盒测定碱性磷酸酶活性；von Kossa染色法检测钙沉积。结果：①单个骨髓间充质干细胞为长梭形，经骨唾液酸蛋白处理后细胞大而扁平，原来密集的克隆分散开。②与空白对照组比较，骨唾液酸蛋白组引起细胞生长曲线右移，细胞Go／G，期比例平均增加12．09％（P〈0．01），S期比例减少65．92％（P〈0．01），STRO-1阳性细胞百分率下降26．54％（P〈0．01）。⑧与空白对照组比较，骨唾液酸蛋白组细胞碱性磷酸酶活性增加50．0％，成骨诱导液组增加59．5％，联合组增加71．43％，并且随着处理时间的延长，活性增加越显著。④空白对照组细胞vonKossa染色呈阴性，其余各组均呈阳性。其中联合组的黑色矿化结节体积最大、数目最多；骨唾液酸蛋白组的结节体积较小、数目较少；成骨诱导液组居中。结论：骨唾液酸蛋白对人骨髓间充质干细胞有促进成骨分化和矿化作用，且与成骨诱导液联用效果更佳。