嗜肺军团菌Ⅳ型菌毛蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化

目的扩增编码Ⅳ型菌毛蛋白的嗜肺军团菌pilE基因,构建重组质粒pET32a(+)-pilE并在原核系统中表达,纯化Ⅳ型菌毛蛋白PILE,为进一步探讨Ⅳ型菌毛蛋白的作用及其作为军团病的诊断抗原提供实验基础。方法采用聚合酶链式反应(PCR)从嗜肺军团菌扩增得到pilE基因,构建重组质粒pET32a(+)-pilE,转化大肠杆菌BL21(DE3)并用聚合酶链式反应、限制性酶切分析、序列分析鉴定后,IPTG诱导表达PILE蛋白,用硫酸十二烷酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、Western印迹鉴定。使用HisTrapTMHP亲和层析柱纯化Ⅳ型菌毛蛋白PILE。结果扩增出430bp的pilE基因;构建了重组质粒pET32a(+)-pilE;表达并纯化出35700Mr的目标蛋白。结论成功构建了嗜肺军团菌pilE基因的原核重组质粒,并在原核系统中得到了高效表达。成功纯化Ⅳ型菌毛蛋白PILE。     

遂宁市8例本土新型冠状病毒肺炎确诊病例病毒全基因组特征分析

目的 对引起遂宁市本土新型冠状病毒肺炎（COVID-19,简称新冠肺炎）疫情的新型冠状病毒（SARS-CoV-2）进行全基因组测序溯源、分子特征和变异情况分析。方法 对2022年3月31日—4月9日采集的遂宁市新冠肺炎本土疫情8例确诊病例的呼吸道样本提取病毒RNA,采用Illumina测序平台进行病毒全基因组测序,运用CLC Genomics Workbench(Version 20.0)软件进行序列拼接。从NCBI数据库中下载新冠病毒参考序列进行全基因组遗传进化和抗原变异情况分析。应用Nextclade和Pangolin在线病毒分析平台,判定病毒家系及型别,分析病毒的变异位点。应用进化分析软件构建病毒进化树分析病毒的来源和相关性。结果 病例1～8的SARS-CoV-2全基因组序列同武汉参考株（NC＿045512）序列相比,分别有69、68、68、69、70、70、70和70个变异位点,8条SARS-CoV-2全基因组序列均属于BA.2(Omicron)支系,是VOC/Omicron变异株（B.1.1.529进化分支）。病例1与外省部分本土病例SARS-CoV-2序列共享全部68个变异...     

人肠三叶肽在大肠杆菌中的表达

目的 构建三叶肽(TFF)原核重组质粒pET32a-TFF3,实现TFF3融合蛋白在大肠杆菌中的高效表达并鉴定表达产物.方法 用Trlzol试剂提取人结肠组织mRNA,逆转录后经PCR扩增得到不含信号肽的TFF3编码序列,插入原核表达载体pET32a,构建pET32a-TFF3重组质粒,转化大肠杆菌BL-21(DE3),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,用SDS-PAGE和Western blot检测表达蛋白.结果 酶切和测序证实pET32a-TFF3重组质粒构建成功.SDS-PAGE分析表明在IPTG浓度为1 mmol/L时,诱导6 h后蛋白表达量最大.Western blot分析表明,TFF3融合蛋白相对分子质量约为24×10~3,其能与兔源TFF3抗体特异性结合.结论 成功构建了pET32a-TFF3重组质粒,实现了该基因在大肠杆菌中的高效表达,为后续深入研究TFF3奠定了基础.     

PTEN、P53及错配修复蛋白表达与子宫内膜癌病理特征的关系及与预后的相关性

摘 要：［目的］ 探讨PTEN、P53、DNA错配修复（mismatch repair,MMR）蛋白表达与子宫内膜癌病理特征的关系及与预后的相关性。［方法］ 回顾性分析2018年1月至2022年6月在余姚市人民医院初次行全面分期手术治疗的118例子宫内膜癌患者的临床资料,根据免疫组化结果,将患者分为PTEN突变组、P53 突变组、错配修复缺陷（deficient mismatch repair,dMMR）组,比较各组患者的病理特征及预后差异。采用 Kaplan-Meier 法绘制无病生存（disease-free survival,DFS）曲线。临床一般资料及高危病理因素对子宫内膜癌患者DFS的影响采用单因素Log-rank法分析,将单因素分析中P<0.05的因素纳入Cox比例风险回归多因素分析。［结果］ 118例患者中,PTEN突变85例（72.03%）,P53突变30例（25.42%）,dMMR 30例（25.42%）,3组间肌层浸润、脉管浸润、淋巴结转移、特殊病理类型等病理因素差异均有统计学意义（P均<0.05）。PTEN突变组与未突变组DFS分别为 72.02 个月、48.85个月（P<0.001）,P53未突变组与突变组DFS分别为71.54个月、43.21个月（P<0.001）,dMMR组与非dMMR组DFS差异无统计学意义（P=0.450)。PTEN突变、P53突变及dMMR 3组间DFS差异有统计意义（P<0.001)。单因素分析显示,术前CA125值及临床高危病理因素（高级别G3、肌层浸润>1/2、肿瘤直径>2 cm、脉管浸润、淋巴结转移、特殊病理类型）对子宫内膜癌患者的DFS 均有影响（P<0.05）。多因素Cox比例风险模型显示,术前CA125值升高、脉管浸润、特殊病理类型均是子宫内膜癌患者DFS 的独立危险因素。［结论］ 不同临床病理特征子宫内膜癌患者的PTEN、P53、MMR表达存在差异,PTEN、P53、MMR表达可用于评估患者预后。     

内蒙古赤峰市阿鲁科尔沁旗地区2009～2011年农村地下水监测分析

目的了解和掌握内蒙古赤峰市阿鲁科尔沁旗地区农村生活饮用水卫生现状,为政府有关部门决策提供科学依据。方法对2009～2011年在全区范围内开展调查,根据各县区不同的供水方式(集中式、分散式),不同饮用水源,人口所占比例共设置141个监测点,每年的枯水期(3～5月)和丰水期(7～9月)对监测点地下水质进行采样分析,检测指标为水质感官指标、一般化学指标、毒理学指标和细菌学指标,设计统一调查表对农村供水类型、取水方式和水源类型及其覆盖人口进行调查。结果农村饮用水水源类型以地下水为主,占92.5%,集中式供水覆盖人口占30.8%;2009～2011年抽测合格率82.5%。其中,微生物指标合格率82.5%,感官性状和一般化学及毒理学指标合格率100%(297/297)。不合格指标:总大肠菌群、细菌总数、粪大肠菌群。农村生活饮用水中总大肠菌群合格率水平在38.89%～56.67%之间。结论阿鲁科尔沁旗地区农村生活饮用水水质受动物粪便和生活污水污染严重,加强对饮用水水源卫生防护和水质消毒是关键措施。     

嗜肺军团菌Ⅳ型菌毛蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化

目的扩增编码Ⅳ型菌毛蛋白的嗜肺军团菌pilE基因,构建重组质粒pET32a（＋）-pilE并在原核系统中表达．纯化Ⅳ型菌毛蛋白PILE．为进一步探讨Ⅳ型菌毛蛋白的作用及其作为军团病的诊断抗原提供实验基础。方法采用聚合酶链式反应（PCR）从嗜肺军团菌扩增得到pilE基因,构建重组质粒pET32a（＋）-pilE,转化大肠杆菌BL21（DE3）并用聚合酶链式反应、限制性酶切分析、序列分析鉴定后,IPTG诱导表达PIIJE蛋白,用硫酸十二烷酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）、Western印迹鉴定。使用HisTrap^TM HP亲和层析柱纯化Ⅳ型菌毛蛋白PILE。结果扩增出430bp的pilE基因;构建了重组质粒pET32a（＋）-pilE;表达并纯化出35700Mr的目标蛋白。结论成功构建了嗜肺军团菌pilE基因的原核重组质粒,并在原核系统中得到了高效表达。成功纯化Ⅳ型菌毛蛋白PILE。     

多重PCR技术和呼吸道病原体微流体芯片在诊断儿童急性呼吸道病毒感染中的应用

目的 了解多重PCR技术(RespiFinder?SMART 22检测试剂盒)和呼吸道病原体微流体芯片技术(TaqMan array cards, TAC)在诊断儿童急性呼吸道感染(acute respiratory infection, ARI)中的应用价值。方法 从2018年8月份至2019年8月份采集的成都市儿童专科医院275例有ARI症状的患儿咽拭子样本中随机选择120份样本,分别使用RespiFinder?SMART 22和TAC进行呼吸道病毒核酸检测,比较2种检测方法的优缺点。结果 120份儿童ARI标本经RespiFinder?SMART 22和TAC检测,阳性率分别为88.33%和93.33%,混合感染率分别为26.67%和35%。在120份样本中,2种方法检测结果一致率为88.33%,其中阳性一致性106例,阴性一致性7例。结果不一致的有7例。结论 多重PCR技术和TAC技术在此次实验检测中检出阳性样本一致性较高,两者对于呼吸道病毒检测均具有良好的临床应用价值。     

内蒙古赤峰市阿鲁科尔沁旗地区2009～2011年农村地下水监测分析

目的 了解和掌握内蒙古赤峰市阿鲁科尔沁旗地区农村生活饮用水卫生现状,为政府有关部门决策提供科学依据.方法 对2009～2011年在全区范围内开展调查,根据各县区不同的供水方式(集中式、分散式),不同饮用水源,人口所占比例共设置141个监测点,每年的枯水期(3～5月)和丰水期(7～9月)对监测点地下水质进行采样分析,检测指标为水质感官指标、一般化学指标、毒理学指标和细菌学指标,设计统一调查表对农村供水类型、取水方式和水源类型及其覆盖人口进行调查.结果 农村饮用水水源类型以地下水为主,占92.5％,集中式供水覆盖人口占308％=2009 ～2011年抽测合格率82.5％.其中,微生物指标合格率82.5％,感官性状和一般化学及毒理学指标合格率100％ (297/297).不合格指标:总大肠菌群、细菌总数、粪大肠菌群.农村生活饮用水中总大肠菌群合格率水平在38.89％ ～56.67％之间.结论 阿鲁科尔沁旗地区农村生活饮用水水质受动物粪便和生活污水污染严重,加强对饮用水水源卫生防护和水质消毒是关键措施.