自身免疫病患者血清TGF-β1的研究

转化生长因子β(TGF β)为多效能生长因子,在人体己发现有三种异构体形式(TGF-β1,2,3),有刺激和抑制双重功能.可刺激细胞外基质(ECM)的分泌,调节细胞生长分化,趋化巨噬细胞,成纤维细胞,促进血管生成,从而在创伤修复中起重要作用.还有愈来愈多的研究发现TGF-β异常增高可促进ECM的异常增多和沉积,这与多种纤维     

SLE患者血清抗Ro／SSA的检测及其与ANA和RF的关联性

我们用本室自制抗原对流免疫电泳法检测了３５例系统性红斑狼疮患者血清抗Ｒｏ／ＳＳＡ，阳性率为５１％。同时用免疫印迹法试剂盒同时用阳生率为３７％，其敏感性显著低于ＣＩＥ。但有一例患者用ＣＩＥ检测呈阴性，ＩＢ检测表现为单独５２ｋＤ Ｒｏ阳性，由此可见，这两种方法具有一定的互补性。     

Ro抗原的提取及Ro构象对其抗原反应性的影响

本文报道了了一种从人脾组织提取高活性Ｒｏ自身抗原的快速简易方法，并进一步证明Ｒｏ构象对其抗原反应性影响极大。     

人神经干细胞移植治疗重度新生儿一氧化碳中毒一例

目的 探讨人神经干细胞移植治疗新生儿重度一氧化碳中毒（COP）的可行性。方法 1例生后18d的新生儿重度COP急性期患儿，肌张力异常，原始反射减弱，NBNA评分15分。取孕12周胚胎前脑细胞体外培养扩增11d，获取人神经干细胞（NSCs）球，经患儿脑室穿刺注入。结果 移植后28d，患儿肌张力、原始反射明显改善，NBNA评分35分。移植后9个月Peabody量表，0—6岁儿童神经心理检查量表评估，患儿运动、智力、语言发育正常。结论 本例人胚胎来源NSCs移植治疗急性期新生儿重度COP，临床疗效显著。最终的疗效还需更多病例的进一步观察。     

血清抗——SSA与类风湿因子的相关性分析

抗—SSA和类风湿因子(RF)是很常见的两种自身抗体.抗—SSA主要在干燥综合症(SS)和狼疮病(LE)患者体内检出.最近资料报道:该抗体在极少数类风湿关节炎(RA)病人也可检出.RF较抗—SSA更常见,除RA病人高发外,在LE、SS、皮肌炎、混合性     

应用VIDAS免疫分析系统检测血清抗伯氏包柔螺旋体抗体

莱姆病（Ｌｙｍｅｄｉｓｅａｓｅ）是最近十年来才被认识的一种蜱媒传染流行病，Ｌｙｍｅ病的血清学诊断方法有间接荧光免疫法（ＩＦＡ），酶免疫试验（）ＥＩＡ），免疫印迹法（ＷＢ），梅里埃生物公司（Ｂｉｏｍｅｒｉｅｕｘ）推出ＶＩＤＡＳ免疫诊断系统能够自动定性和半定量地检查Ｌｙｍｅ病的抗伯氏包柔螺旋体抗（抗ＢＢ抗体）。本方法结合了酶和荧光免疫两种方法。硷性磷酸酶标记二抗的底物是４ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｌｉｆｅ     

人神经干细胞移植到缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑内的存活及分布

目的:新生儿缺氧缺血性脑病是导致脑性瘫痪的重要原因,至今缺乏有效疗法.将体外培养的人神经干细胞经脑室移植入缺氧缺血性脑损伤新生鼠,观察植入细胞在宿主脑内的存活、迁移及分化.方法:实验于2005-01/09在解放军海军总医院儿科实验室完成.①对象:神经干细胞来源于孕12周流产的人胎儿脑组织,孕妇签署知情同意书,符合医院伦理委员会规定.清洁级SD新生鼠80只,随机数字表法分为细胞移植组、模型对照组,40只/组,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.②实验方法:取人胚胎脑组织,机械分散法分离单个核细胞,接种于添加表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子的N2培养基中,获取生长旺盛的人神经干细胞球,制成单细胞悬液,浓度约为5.0×1011L-1,培养6 d后行PKH标记用于植入后示踪.两组新生鼠均建立缺氧缺血性脑损伤模型,造模后3 d,细胞移植组损伤侧脑室缓慢注入5 μL人神经干细胞悬液,模型对照组于相同部位注入等量生理盐水.③实验评估:取未经PKH标记的细胞球, 通过免疫细胞化学染色鉴定巢蛋白的表达及其向神经元、星形胶质细胞的分化情况.分别于细胞移植后1,2,4周及3个月,常规取脑组织,行免疫组织化学和荧光分析,观察植入后细胞存活及分布情况.结果:在造模及细胞移植过程中,因麻醉、出血细胞移植组新生鼠死亡5只,模型对照组死亡7只,存活率85%～90%.①神经干细胞的鉴定及分化:80%活细胞巢蛋白呈阳性表达,并可分化为神经元、星形胶质细胞.②神经干细胞植入后存活及分布情况:植入后1周,神经丝蛋白阳性细胞多位于损伤侧皮质及海马处,纹状体、脑干、小脑、嗅球也有少量分布.植入后2周,海马和皮质可见神经丝蛋白阳性细胞,胞体伸出的神经微丝更长,细胞数量与1周时基本相似.植入后4周及3个月时PKH阳性细胞数量明显减少.结论:在含有表皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子的N2培养基中形成的人神经干细胞球,具有良好的增殖能力,可分化为神经元,移植至缺血缺氧新生鼠脑中能够向损伤区迁移,分布范围广.     

自体外周血CD34+细胞移植治疗小儿重症自身免疫性疾病的初步观察

目的探讨自体外周血CD34^＋细胞移植治疗小儿重症自身免疫性疾病的疗效问题。方法3例重症自身免疫性疾病患儿接受自体外周血CD34^＋细胞移植。首先采用环磷酰胺（CTX）＋粒细胞集落刺激因子（G—CSF）方案动员外周血干细胞，通过CliniMACS细胞分选仪分选CD34^＋细胞后冻存。然后选用BEAM＋抗胸腺细胞球蛋白（ATG）或CTX＋马法兰（Mel）＋ATG两种方案预处理，0d回输CD34^＋细胞。观察造血重建、免疫恢复以及症状体征变化情况。结果动员获得了足够单个核细胞，纯化后CD34^＋细胞纯度高。粒细胞植入时间分别为9、13、11d，血小板植入时间分别为14、18和13d。3例原发病缓解。随访14～16个月，皮肌炎皮损消失、四肢肌力恢复正常，类风湿关节炎疾病活动评分（DAS28）由7.3分降至2.4分，系统性红斑狼疮DAI评分由16分降至4分。结论自体外周血CD34^＋细胞移植是常规治疗无效的小儿重症自身免疫性疾病的可选择治疗措施之一。     

人神经干细胞异种移植示踪检测分析

目的摸索人胎脑神经干细胞（hNSC）在动物移植研究中理想的示踪检测方法，探讨hNSC移植后的命运，为新生儿缺氧缺血性脑损伤的干细胞治疗提供依据。方法用添加表皮生长因子＋碱性成纤维细胞生长因子＋白血病抑制因子的N2培养基从流产的人胚胎前脑组织培养出神经干细胞球，通过免疫荧光技术检测神经干细胞巢蛋白（Nestin）抗原标志和细胞分化潜能以鉴定其干细胞属性。取体外培养6d的神经干细胞集落，进行PKH26标记后培养和分化示踪。将培养14 d的神经球移植到缺氧缺血性脑病的新生鼠侧脑室，12只鼠分为PKH26标记示踪组（4只）、免疫反应检测组（4只）和对照组（4只），于移植后第4、7、14天杀鼠取脑，全脑切片，行抗人细胞核抗体（抗-hNuc）和抗人神经丝抗体（Anti-hNF）的特异性免疫反应检测及PKH26的荧光观察。结果体外培养获得典型人胎脑神经干细胞球。PKH26能高效标记神经干细胞，标记的阳性率〉95％，标记分子可伴随干细胞增殖、迁移和分化，但不进入细胞突起，仅位于胞体。Anti-hNuc免疫荧光检测和PKH26示踪结果显示：植入脑室的hNSC，4d即可迁移到嗅球、额叶皮层内侧中央前区、海马、枕叶皮层等部位的颗粒层内，小脑蒲氏细胞层有单层标记细胞排列，中脑区域也有广泛的标记细胞分布，损伤灶区有明显多的移植细胞分布。抗-hNF检测结果显示：在大脑皮层的颗粒层有阳性反应细胞，彼此间有连接发生。结论可用PKH26对体外培养获得的hNSC进行标记示踪。Anti-hNuc可用于检测移植细胞在受体鼠脑内的分布，抗-hNF可用于检测移植细胞的成神经元分化及神经元问发生的连接。hNSC经脑室途径移植缺氧缺血性损伤的新生大鼠脑，可快速迁移到全脑多处远距离部位，并构建神经元连接，损伤灶区对移植细胞有牵引作用。     

人胎脑神经干细胞在年幼大鼠脑内的成神经元分化

目的:脑组织中不同部位的的神经元因功能不同具有特定的细胞形态,移植的神经干细胞能不能在相应部位分化成其相应的神经元还不明确.实验拟观察人胎脑神经干细胞植入年幼大鼠脑后的成神经元分化的作用,探讨神经干细胞替代治疗小儿脑病的可行性.方法:实验于2007-04/07在海军总医院细胞实验室内完成.①实验材料:16周孕龄的人胎脑组织由海军医院妇产科提供,实验经孕妇及家属知情同意,并经医院伦理委员会批准.14只出生后10d的同窝年幼SD大鼠,雌雄不分,由北京大学医学部实验动物中心提供,为二级清洁动物,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.②实验方法:自孕16周的人胎脑组织分离培养神经干细胞球,在脑脊液中培养诱导分化实验以证明其分化潜能.将培养14 d的神经干细胞球移植于10 d龄大鼠侧脑室内,于移植后第4,7,14天行人神经丝特异性标志的免疫荧光分析,显示神经元的分布和细胞形态.结果:①培养获得典犁神经干细胞球,呈漂浮生长,在小儿脑脊液中能分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞.②采用抗人神经丝混合单抗检测移植物的成神经元分化,移植后第4天,观察到阳性反应细胞在颗粒层表现为颗粒性细胞,锥体细胞层则出现长突起的锥体细胞,还有连接神经元样中间神经元,小脑内有单层排列的浦肯野细胞.对比各时间点的观察结果,阳性细胞分布位置未变,随着移植后天数的后延,阳性细胞数量呈减少趋势,但锥体细胞的突起明显加长.结论:体外培养获得的人神经干细胞经脑室途径移植于年幼大鼠,在脑内发生迁移,并分化成形态上与其所在位置的宿主细胞一致的神经元.提示宿主脑组织微环境在引导移植物分化成神经元中发挥了重要作用,该结果对细胞替代治疗小儿脑病有重要启示意义.