鞘氨醇对人结肠癌细胞的抑制作用

目的 研究鞘氨醇对人结肠癌细胞的影响。方法 采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)、细胞核分裂指数和3H-TdR掺入试验方法，所设剂量鞘氨醇分别为0，0．82，1．63，3．125，6．25，12．5μmol／L，以二甲基亚砜(DMSO)为溶剂对照。结果 鞘氨醇对HT-29细胞的生长有明显抑制作用。在MTT试验中，不同浓度鞘氨醇对HT-29细胞的7d抑制率分别为18％，45％，72％，87％和89％；在核分裂指数试验中，随着鞘氨醇剂量的增高，其核分裂指数明显降低；在^3H-TdR掺入试验中。可见随着鞘氨醇剂量的增高，^3H-TdR掺入到HT-29细胞中明显的减少，与阴性对照组相比有显著性差异。结论 鞘氨醇对HT-29细胞的生长增殖有明显抑制作用，这可能是鞘磷脂抑制结肠癌的机制之一。     

食物中毒中副溶血性弧菌和沙门菌双重荧光PCR检测方法的建立

目的建立双重荧光PCR用于检测食物中毒中副溶血性弧菌和沙门菌。方法设计特异性引物和探针用于扩增副溶血性弧菌tlh基因和沙门菌invA基因(invA),采用倍比稀释法检测方法的DNA灵敏度和菌液灵敏度,采用9株其他肠道致病菌验证方法的特异性。结果两种病原菌DNA检测灵敏度分别为65 fg/PCR和56 fg/PCR体系,菌液检测灵敏度分别为11 cfu/ml和9 cfu/ml,特异度100%。用建立的方法对4起食物中毒进行检测,共检出副溶血性弧菌15株和沙门菌8株。结论该方法高效并具有很高的灵敏性和特异性,在副溶血性弧菌和沙门菌引起的食物中毒的快速检测中具有广阔的应用前景。     

牡蛎和粪便中GⅠ、GⅡ型诺如病毒实时聚合酶链反应检测方法的建

目的 建立适用于牡蛎和粪便中快速、特异、灵敏的GⅠ、GⅡ型诺如病毒(NV)定量分型诊断方法．方法 通过对GⅠ、GⅡ型NV基因组保守序列的比对分析，设计高度特异的引物和探针，建立以TaMan探针为基础的实时聚合酶链反应方法(TaMan Real-time RT-PCR)．结果 该方法对NV核酸检测高度特异，且GⅠ和GⅡ型之间无交叉反应，最低检出限达102 copies/μl．对90份新鲜牡蛎样品和37份腹泻粪便标本分别用常规RT-PCR和笔者建立的TaMan Real-time RT-PCR进行NV检测，发现牡蛎样品中后者的检出率明显高于前者，而粪便标本中两者无明显差别．同时对阳性标本的测序分析证实结果准确可靠．结论 研究中建立的TaMan Real-time RT-PCR方法可用于海产品标本及粪便中NV定量及分型检测，可作为应对NV胃肠炎暴发的有效诊断方法．     

腹泻患者粪便标本中A组轮状病毒感染特征分析

目的:分析病毒性腹泻患者中人轮状病毒(Human Rotavirus,HRV)的感染情况及毒株流行特点。方法:收集杭州市239份疑似病毒性腹泻患者粪便标本分别应用酶联免疫吸附法及RT-PCR法进行HRV抗原及核酸检测。。其中HRV阳性核酸应用巢式RT-PCR进行轮状病毒分型检测。结果:239份粪便标本中HRV抗原阳性为44份(18.4%),HRV核酸阳性为55份(23.0%),其中G血清分型:G3型15份(27.3%),G1型9份(16.4%),G2型为7份(12.7%),G9型为1份(1.8%),G2+G3混合感染1份(1.8%),未分型22份(40%)。结论:A组轮状病毒是婴幼儿病毒性腹泻的重要病原体,同时也可引起成人腹泻散发流行,成人A组轮状病毒流行季节和流行株与婴幼儿一致,G3为主要流行株,且同时存在多种血清型流行,未分型标本的比例较大有待深入研究。     

2016—2019年杭州市余杭区973例严重急性呼吸道感染病例呼吸道合胞病毒检测结果

收集2016年1月至2019年12月杭州市余杭区第一人民医院的严重急性呼吸道感染病例鼻咽分泌物标本,采用荧光定量PCR方法进行RSV病毒核酸检测;检测后分析不同年龄组、不同月份RSV阳性检出情况。结果显示,共收集并检测973份鼻咽拭子标本中,63份标本RSV核酸检测阳性,阳性检出率为6.47%;核酸检出率男性大于女性,...     

2006-2007年杭州市余杭区诺如病毒性腹泻分子流行病学研究

目的研究杭州市余杭区群发性腹泻中诺如病毒的分子流行病学特点。方法采集2006-2007年6起余杭区群发性腹泻疫情患者的粪便和肛拭子标本,采用荧光定量PCR技术进行诺如病毒检测,然后对病毒的N/S区域进行序列测定。结果6起群发性腹泻疫情都是由诺如病毒引起的,基因分析显示这些病毒都属基因Ⅱ型4组。结论诺如病毒是余杭区群发性非细菌性胃肠炎的重要病原体之一,在现阶段存在优势毒株是GII.4型,正在发生变异。     

牡蛎和粪便中GⅠ、GⅡ型诺如病毒实时聚合酶链反应检测方法的建立

目的 建立适用于牡蛎和粪便中快速、特异、灵敏的GⅠ、GⅡ型诺如病毒(NV)定量分型诊断方法.方法 通过对GⅠ、GⅡ型NV基因组保守序列的比对分析,设计高度特异的引物和探针,建立以TaqMan探针为基础的实时聚合酶链反应方法(TaqMan Real-time RT-PCR).结果 该方法对NV核酸检测高度特异,且GⅠ和GⅡ型之间无交叉反应,最低检出限达102 copies/μl.对90份新鲜牡蛎样品和37份腹泻粪便标本分别用常规RT-PCR和笔者建立的TaqMan Real-time RT-PCR进行NV检测,发现牡蛎样品中后者的检出率明显高于前者,而粪便标本中两者无明显差别.同时对阳性标本的测序分析证实结果准确可靠.结论 研究中建立的TaqMan Real-time RT-PCR方法可用于海产品标本及粪便中NV定量及分型检测,可作为应对NV胃肠炎暴发的有效诊断方法.     

2006年杭州余杭区甲1亚型流感疫情的应急检测及基因特性分析

目的:对6起流感样疫情进行应急检测并对分离到的流行株的基因特征进行分析。方法:应用荧光RT-PCR的方法对6起流感样疫情进行检测并进行病毒分离,挑选H1N1亚型流感病毒的代表株进行血凝素基因(HA1)片断的核苷酸序列测定,分析基因和氨基酸变异情况。结果:应用荧光PCR检出甲1型流感阳性样本12例;与当前疫苗株A/Newcaledonia/20/1999相比,新分离到的流感株氨基酸序列有较大的差异,两者为不同性状的毒株。结论:H1N1亚型流感病毒重新引起流行并成为优势株,与其抗原性的变异及人群中针对这一病毒的免疫力下降有关。     

Real-Time PCR探针法检测食物中毒中沙门菌方法建立及应用

目的:建立食物中毒中沙门菌Real-Time PCR检测方法并将其应用。方法:选取沙门菌侵袭蛋白A基因(in-vA)进行引物和探针设计,并对反应条件不断优化,进行灵敏度和特异度测试,建立检测沙门菌的Real-Time PCR方法。结果:DNA灵敏度检测沙门菌达到56 fg/PCR体系,菌液灵敏度检测沙门菌达到9 CFU/ml,特异度100%。用建立的方法对四起食物中毒、2000份健康从业人员体检肛拭样品、80份食品监测样品进行了检测,共检出沙门菌15株。结论:该方法具有高灵敏性和高特异性的特点,可以应用在沙门菌引起的食物中毒的快速检测中。