血浆游离双链DNA在原发性肝癌中的诊断价值

目的:探讨血浆中游离双链DNA(cell-free double-stranded DNA,cf-dsDNA)在原发性肝癌(primary hepa-tic carcinomas,PHC)诊断中的应用.方法:招募62例PHC患者和41例良性肝病患者以及45例健康对照,填写信息登记表.抽取治疗前患者和健康对照的空腹血样,...     

可用体外翻译获得的可溶天然型EGFP的表达

目的构建能在体外大量表达可溶性天然型增强绿色荧光蛋白（EGFP）的pET28a—EGFP原核表达载体。方法以质粒pEGFP—N1为模板扩增EGFP基因,EcoRI和HindⅢ双酶切EGFP基因序列和pET28a载体。T4DNA连接酶连接,转化大肠埃希菌DH50t,提取载体,酶切和DNA测序鉴定。将pET28a—EGFP转化大肠埃希菌BL21（DE3）,异丙基-B—D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导,观察荧光。体外翻译系统中加入重组pET28a—EGFP载体,孵育后观察荧光。免疫印迹法（Western blott）鉴定EGFP。结果测序证实pET28a—EGFP中的EGFP基因序列与GenBank中序列完全一致,荧光显微镜下观察到大肠埃希菌BL21（DE3）和体外翻译系统中强烈荧光,Westem blot结果显示相对分子质量约为27000的EGFP高效表达。结论成功构建了能在体内和体外稳定表达的可溶性天然型EGFP的pET28a—EGFP载体,为进一步体外筛选抑菌药物提供了可靠的报告载体。     

靶向23SrRNA domainⅡ区的肽-多肽核酸抑制细菌生长的研究

目的研究靶向23SrRNA domainⅡ区的肽-多肽核酸(PNA)(G1138)抑制细菌生长的效果。方法用浊度分析观察肽-PNA(G1138)抑制大肠埃希菌DH5α的生长,用克隆形成单位进一步分析肽-PNA(G1138)抑菌效果。结果肽-PNA(G1138)显示出剂量和序列特异性抑制细菌生长,但肽-PNA(G1138)的最低抑菌浓度(MIC)明显高于四环素,抑制效果低于四环素,他们的MIC分别为10和4μmol/L。结论10μmol/L的肽-PNA(G1138)能够抑制大肠埃希菌DH5α的生长,但与四环素和其他靶向23SrRNA domain V区的PNA比较起来抑菌效果不理想。筛选更有效的转运肽,提高肽-PNA(G1138)的抑菌效果,是以后研究中将要努力解决的问题。     

2型糖尿病患者CA242水平与唾液酸及Lewis血型物质的关系

目的 探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清中CA242水平与唾液酸及Lewis血型物质的关系.方法 用凝集法、ABC-ELISA法、酶法和免疫比浊法分别检测2 000例T2DM患者及500名健康对照者的Lewis血型以及血清中CA242、唾液酸(SA)、糖化血红蛋白(HbAle)水平,并分析它们之间的关系.结果 T2DM患者CA242水平和阳性率分别为(20 470±14 860)U/L、6.0%(121/2 000),明显高于健康对照者的(10 950±8 490)U/L、0.4%(2/500),差异有统计学意义(t′=18.87,χ~2=26.1,P均<0.01).T2DM患者SA水平为(51.5±18.6)μg/L,明显低于健康对照者的(56.3±13.8)μg/L,差异有统计学意义(t′=6.45,P<0.01).CA242阳性T2DM患者的CA242水平与sA呈负相关(r=-0.693,P<0.01),与HbAIc呈正相关(r=0.547,P<0.01).98.3%(119/121)CA242阳性T2DM患者的Lewis血型属于I型链结构.CA242阳性的T2DM患者治疗后,CA242水平显著下降,SA水平明显升高,治疗前后的CA242和SA水平分别为30 570(27 040-42 630)、(22 35013 400)U/I.和(44.5±13.5)、(55.5±17.2)μg/L,差异有统计学意义(U=5.32,t′=5.53,P均相似文献   

HBsAg中和确认试验方法的应用研究

HBV在我国以及整个亚洲地区有很高的感染率,根据WHO的统计,全世界三分之一的人口曾感染过HBV,其中2%～5%为慢性感染[1].HBV血清学标志物检测是目前临床诊断、治疗、分析和判断HBV感染者病程及传染性的重要依据之一,也是临床实验室最主要的检测项目.在HBV感染的检测中,HBsAg是最为重要的血清学标志物,血清中检出HBsAg是乙型肝炎的早期诊断指标之一.国外检测HBsAg试剂盒说明书均提出,测定结果有反应性的标本应做中和试验,排除可能的假阳性结果.     

幽门螺杆菌和高敏C反应蛋白与冠心病关系的Logistic回归分析

目的：探讨上海人群中幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）感染与冠心病的关系。方法: 对入选的冠心病患者和正常对照进行仔细的体格检查和问卷调查。采用Logistic回归研究Hp感染和血清超敏C反应蛋白（hypersensitive C-reactive protein, hs-CRP）水平在冠心病中的优势比。结果: 冠心病患者的Hp感染率和hs CRP水平明显高于对照组（χ²=6.63,t=22.82,P＜0.05）。经年龄和性别校正后的Hp感染率和血清hs-CRP水平在冠心病中优势比分别为1.146（0.722-1.819）,1.073（0.969-1.187）。经全参数校正后的Hp感染率和血清hs-CRP水平在冠心病中优势比分别为1.132（0.682-1.877）,1.026（0.918-1.147）。结论: Hp感染率和血清hs-CRP水平与冠心病关系不明确,Hp感染率和血清hs-CRP水平不可以作为上海人群冠心病的风险因子。     

液体培养中起始接种浓度对幽门螺杆菌产量的影响

目的探讨液体培养中起始接种浓度对幽门螺杆菌（Hp）产量的影响。方法心脑浸液液体培养基中加入不同浓度的Hp,每12小时用比浊法测定细菌浓度。结果不同起始接种浓度的Hp培养物均在24 h达到最大浓度;在104~107cfu/mL范围内,Hp起始接种浓度与终浓度呈正相关（P〈0.01）,〈104cfu/mL起始接种浓度的Hp培养物生长不明显,而108cfu/mL起始接种浓度的培养物终浓度仅发生轻微增加。结论不同起始接种浓度有不同的Hp产量,在一定范围内起始接种浓度与Hp产量有关。     

靶向23S rRNA的多肽核酸体外抑制细菌蛋白翻译

目的 尝试研究反义多肽核酸（peptide nucleic acid，PNA）在体外翻译系统中抑制细菌蛋白的翻译。方法以增强绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）为报告分子，将重组载体pET-28a—EGFP和靶向23S rRNA domainⅡ区的PNA在体外翻译系统中共同孵育后，用荧光显微镜观察荧光强度减弱，放射自显影证明荧光强度减弱是因为EGFP减少。为了分析PNA体外抑制蛋白翻译的浓度，我们用蛋白沉淀方法分析PNA体外抑制[^35S]methionine渗入蛋白比例。最后，用浊度分析观察PNA（G1138）在MH肉汤培养基中的抑菌作用。结果在体外翻译系统中，靶向23S rRNA do-mainⅡ区的PNA（G1138）以剂量和序列依赖方式抑制蛋白合成，抑制浓度（IC50）为0．15μmol／L。在MH培养基中，PNA（G1138）抑菌效果不明显（MIC〉50μmol／L）。结论靶向23S rRNA domainⅡ区的PNA（G1138）在体外翻译系统中能有效抑制细菌蛋白合成。在MH肉汤培养基中，PNA（G1138）抑菌效果不明显。