人类免疫缺陷病毒-1包膜糖蛋白进化对抗原表位及病毒亲嗜性的影响

Objective To investigate the evolution of HIV-1 envelope (env) gene from the individuals infected by the virus from one donor, the entry mediated by the envelope glycoprotein and the variation in the main neutralizing epitopes of envelope. Methods The genetic distances of the HIV-1 envelope genes derived from previous studies were analyzed. A series of envelope-pseudotyped viruses were constructed by co-transfecting HEK293T cells with a HIV-1 plasmid bearing the firefly luciferase reporter gene and an envelope expression plasmid. The entry ability of the envelope-pseudotyped viruses into U87. CD4. CCR5 or U87. CD4. CXCR4 cell lines was examined. The ami-no acid sequences representing the epitopes to the broad-neutralizing antibodies within the envelope glycoproteins were also investigated. Results It was found that the genetic distance of the 24 env genes with complete open reading frame was (7.91 ±0.78)% towards HIV-1 CNHN24, and (6.90 ±0.79)% towards RL42. Among the variable regions, the genetic distance of V1/V2 showed the biggest distance, and that of V3 showed the smallest distance. There were CCR5-tropic, CXCR4-tropic and CCR5/CXCR4-dual-tropic Env-pseudoviruses. Furthermore, in these envelopes, the epitopes to IgG1 b12 2F5 and 4E10 antibody were conserved, while the epitope to 447-52D was variable. Conclusion There is definite env gene variation among the viruses derived from the same donor. The variation influences the entry ability and tropism of emelope pseudoviruses. The epitopes to the main broad-neutralizing antibodies are conserved.     

HIV-1 黑龙江省分离株CHNHLJ03009包膜克隆及分析

目的 分析黑龙江省Ⅰ型人免疫缺陷病毒（human irnmunodeficiency virus type 1，HIV-1）原代分离株包膜糖蛋白的变异性及表型特征。方法从一名HIV阳性但未发病的感染者外周血单个核细胞提取DNA，采用保守引物进行HIV包膜直接克隆，进行序列分析及系统树分析。构建了一株带该包膜蛋白的伪病毒并利用表达CXCR4和CCR5的靶细胞进行了感染实验，观察该病毒包膜利用辅助受体的表型特征。结果共获得2个有功能全长env克隆，分别命名为CHNHIJ03009c34（GenBank序列号为AY905493）和CHNHIA03009c33。用全长env氨基酸序列与国内外分离株进行同源性比较分析发现，与分离株CHNHLJ03009c34的包膜同源性最高的病毒为云南的HIV-1 B’亚型分离株RIA2，同源性为91．52％。系统发育分析结果表明，该株为泰国B’亚型，与云南分离株RIA2的遗传距离最近。对包膜蛋白结构分析结果显示，分离株CHNHLJ03009c34包膜在抗原性和亲水性上与RIA2没有明显差别。感染性检测结果显示该病毒只能感染U87．CD4．CCR5细胞，不能感染U87．CD4．CX-CR4细胞。结论本研究从黑龙江省一名HIV-1阳性者克隆到HIV-1CHNHLJ03009病毒的包膜基因，该病毒属于B’亚型（泰国亚型），为R5亲嗜性毒株。该包膜基因克隆为首次报道的黑龙江分离株。     

丙型肝炎病毒主要流行亚型包膜糖蛋白变异性分析

目的分析不同亚型丙型肝炎病毒（HCV）包膜糖蛋白E1和E2的变异性。方法从HCV基因数据库中获得不同亚型HCV包膜序列,并利用生物信息学方法进行核苷酸序列变异性、包膜糖蛋白亲水性性及糖基化位点分析。结果与其他亚型相比,1b亚型HCV包膜糖蛋白E1和E2区核苷酸的变异性最高,且E1区的变异性高于E2区;在E1区55,72位和102—112位氨基酸处1b亚型亲水性较大;1b亚型的包膜糖蛋白E1区N一糖基化位点数最多,且在60位氨基酸处单独有一糖基化位点。结论与E2区相比,E1区的高突变可能与1b型HCV致病性较强关系密切,且1b亚型E1蛋白的大量糖基化也可能存病毒的致病及角癌挑浼中有一审作用。     

Ⅰ型人类免疫缺陷病毒包膜糖蛋白修饰体表达载体的构建及鉴定

目的构建V3环完全或部分缺失的I型人类免疫缺陷病毒(hauman immunodeficiency virus type I,HIV-1)ADA株包膜糖蛋白表达体系。方法分别设计包膜糖蛋白两端及V3环删除区域两端的引物,采用重叠延伸剪接法进行HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3环修饰体的构建。得到的PCR产物经EcoR I和Xho I双酶切,将酶切产物与pSM载体连接,转化大肠埃希菌后筛选阳性克隆,经PCR及基因序列测定进行鉴定。结果获得HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3环修饰体PCR产物,构建了其表达载体pSM-ADA△V3和pSM- ADAmV3,经转化和筛选获得了重组质粒,经PCR及基因测序鉴定显示重组质粒序列正确,为预期目的片段。结论成功构建了V3环修饰的HIV-1 ADA株包膜糖蛋白的表达载体。此结果为进一步构建伪病毒,观察V3环完全或部分缺失对病毒侵入靶细胞过程的影响,为开发阻止HIV-1进入靶细胞的药物或疫苗打下基础。     

PBL与CBL教学法在留学生实验诊断教学的应用探讨

目的探讨PBL与CBL教学法在留学生实验诊断教学的应用效果。方法将PBL联合案例教学法(CBL)应用于临床医学本科留学生实验诊断教学,与大班传统讲授教学方法(对照组)相比较,通过问卷调查和成绩分析学习效果。结果试验组在激发学习兴趣和培养临床思维能力方面均高于对照组,理论知识的成绩和实习的成绩也是试验组优于对照组,P<0.05。结论PBL与CBL教学联合应用于实验诊断教学中能够有效提高教学质量,并受到学生的认可和喜爱。     

慢性丙型肝炎患者血清自身抗体检测及其临床意义研究现状

经常发现慢性丙型肝炎病毒(HCV)携带者血清非器官特异性自身抗体(non-organ-specific autoantibodies,NOSA)和抗甲状腺自身抗体(anti-thyroid autoantibodies ATAB)阳性,伴有以自身免疫耐受性丧失为特征的一组自身免疫性疾病,本文将重点介绍这方面的研究进展。     

细胞因子与类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞

类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)是一种伴有多个关节肿、痛、畸形的免疫性疾病, 严重情况下会引起关节功能的严重障碍, 现已证实成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes, FLS)与RA有极强的关联性, RA-FLS在RA发病机制中起关键作用。RA-FLS可自行产生多种炎性细胞因子, 也可被某些细胞因子或物质刺激而产生多种炎性细胞因子, 这些炎性细胞因子可增加RA-FLS的侵袭性和增殖能力, 并减少RA-FLS的凋亡, 从而进一步加重关节炎。文章重点探讨了几种可对RA-FLS产生影响的细胞因子, 以期为治疗RA提供新的思路。     

脊椎裂、脊膜膨出并腰肋畸形1例报告

脊椎裂、脊膜膨出并不少见,但合并腰后肋畸形者甚为少见,我院发现1例,现报告如下.患儿,男,3岁,因腰部肿块而就诊.生后发现腰部正中一肿块,当时并未引起重视,而后随年龄增长而增大.压之较软,近半年来增大明显并走路不稳和小便失禁而来院检查.     

慢性丙型肝炎患者血清自身抗体检测及其临床意义研究现状*

经常发现慢性丙型肝炎病毒（HCV）携带者血清非器官特异性自身抗体（non-organ-specific autoantibodies,NOSA）和抗甲状腺自身抗体（anti-thyroid autoantibodies ATAB）阳性,伴有以自身免疫耐受性丧失为特征的一组自身免疫性疾病,本文将重点介绍这方面的研究进展。     

黑龙江省未经治疗的艾滋病患者蛋白酶和反转录酶基因型耐药性检测与分析

目的 对黑龙江省流行的HIV-1毒株的蛋白酶基因及反转录酶基因进行基因型耐药分析,为开展大规模临床抗病毒治疗提供本底数据.方法 采用套式-PCR法扩增黑龙江省内49例HIV-1感染者及AIDS患者外周血单个核细胞中前病毒cDNA的部分蛋白酶和反转录酶基因,分析基因序列,与国际耐药数据库比对,分析耐药变异.结果 49例患者HIV毒株亚型分析为B'亚型.在扩增出蛋白酶基因的47份标本中,未发现对蛋白酶抑制剂的原发突变,但发现大量对蛋白酶抑制剂的次要突变,V771占91.5%、L63P占76.6%、I93L占74.5%、E35D占61.7%、R57K占19.1%、R41K占10.6%、A71V占8.5%、M36I占8.5%、L10I占6.4%、D60E占6.4%、L89M占4.2%和G16E占2.1%.在扩增出反转录酶基因的44份标本中,1份有反转录酶抑制剂的原发突变M184I,占2.3%,均有反转录酶抑制剂的次要突变,I135L/T/R/V占81.8%、V106I占22.7%、V179D/E占11.4%、R211K占9.1%、L214F占4.5%、V189I占4.5%和V108I占2.3%.结论 目前在黑龙江省未接受抗反转录病毒治疗的患者中未发现对蛋白酶抑制剂耐药的原发突变,耐药突变处于低水平,但应及时进行耐药突变检测,防止多重耐药和交叉耐药的出现和流行.