SHP2表达变化对四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝组织中Akt表达的影响

目的 探讨含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)过表达及低表达对四氯化碳（CCl4）诱导的肝纤维化大鼠肝组织中蛋白激酶B(Akt)的影响。方法选取160只健康雄性SD大鼠,随机分为对照组、模型组、AdGFP组、Ad-SHP2组和Ad-shRNA/SHP2组,每组32只。采用腹腔注射CCl4法构建大鼠肝纤维化模型,经大鼠尾静脉分别将表达绿色荧光蛋白（GFP）的空病毒Ad-GFP、表达野生型SHP2及GFP的腺病毒Ad-SHP2、表达GFP并携带靶向SHP2的短发夹RNA(shRNA)的腺病毒Ad-shRNA/SHP2注入大鼠体内。各组分别于造模第2、4、6、8周随机选取8只大鼠,留取肝组织标本。采用实时荧光定量PCR法检测各组大鼠肝组织中SHP2、Akt的mRNA表达水平,采用蛋白质印迹法检测各组大鼠肝组织中SHP2、Akt及磷酸化Akt(p-Akt)的蛋白表达水平,采用H-E染色法观察各组大鼠肝组织的病理变化,采用Masson三色染色法观察各组大鼠肝组织的胶原沉积情况。结果 靶向SHP2的shRNA及外源性野生型SHP2基因成功导入肝纤维化大鼠体内,并使大鼠肝组织中SHP2呈低...     

肝纤维化病理过程中肝组织蛋白酪氨酸磷酸酶SHP1的动态表达

目的:探讨肝纤维化病理过程中肝组织蛋白酪氨酸磷酸酶SHP1的动态表达.方法:50只SD大鼠随机分为对照组(n=10)和模型组(n=40),大鼠肝纤维化模型采用腹腔注射四氯化碳法构建,Masson三色及HE染色测定大鼠肝脏组织的病理学改变,Western blot、免疫组织化学染色和Real-time PCR测定大鼠肝组...     

含SH2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2表达变化对肝纤维化大鼠肝组织中细胞外信号调节激酶1/2活性的影响

目的:探讨含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)表达变化对肝纤维化大鼠肝组织中细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)活性的影响。方法:健康雄性SD大鼠160只被随机分为五组(对照组、模型组、Ad-GFP组、Ad-SHP2组及Ad-shRNA/SHP组),每组32只。除对照组(腹腔注射0.9%氯化钠溶液)外,其余四组构建四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型,并将表达绿色荧光蛋白(GFP)的空病毒Ad-GFP、表达野生型SHP2及GFP的腺病毒Ad-SHP2、表达GFP及靶向SHP2的短发夹RNA(shRNA)的腺病毒Ad-shRNA/SHP自大鼠尾静脉分别注射入Ad-GFP组、Ad-SHP2组及Ad-shRNA/SHP2组大鼠,各组分别于造模第2、4、6、8周选取8只大鼠留取肝组织标本。采用HE染色观察大鼠肝组织病理学变化;采用Masson三色染色检测大鼠肝组织胶原沉积;采用实时荧光定量PCR检测大鼠肝组织SHP2、ERK1 mRNA表达;采用免疫组织化学染色检测SHP2蛋白表达;采用Western blot检测ERK1和p-ERK1蛋白表达。结果:大鼠肝纤维化模型成功构建,在各造模...     

腺病毒介导的shRNA下调SHP2表达对人肝星状细胞LX-2凋亡的影响

目的探讨腺病毒介导的短发夹RNA (shRNA)下调含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)对体外培养的人肝星状细胞LX-2凋亡的影响。方法将携带靶向SHP2的shRNA并表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组腺病毒Ad-shRNA/SHP2及仅表达GFP的对照空病毒Ad-GFP分别转染体外培养的LX-2细胞;实时荧光定量PCR检测LX-2细胞的SHP2 mRNA表达;用Western blot检测LX-2细胞的SHP2、Bax及Bcl-2蛋白表达;TUNEL及膜联蛋白-V/碘化丙啶双标记流式细胞术检测LX-2细胞凋亡。实验分组:(1)对照组:以DMEM代替腺病毒转染LX-2细胞;(2)Ad-GFP组:转染空病毒Ad-GFP;(3)Ad-shRNA/SHP2组:转染重组腺病毒Ad-shRNA/SHP2。多组间均数比较用单因素方差分析, 组间比较采用LSD检验。结果靶向SHP2的shRNA显著下调LX-2细胞的SHP2蛋白及mRNA表达(P < 0.05);TUNEL及膜联蛋白-V/碘化丙啶双标记流式细胞术检测结果显示, 与对照组LX-2细胞凋亡率(3.077%±0.731%, 9...     

SHP2过表达抑制人肝星状细胞LX-2凋亡

目的 探讨含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)过表达对人肝星状细胞LX-2凋亡的影响。方法 将表达绿色荧光蛋白（GFP）的空病毒Ad-GFP、表达野生型SHP2及GFP的腺病毒Ad-SHP2转染LX-2细胞。实验分为3组：(1)Control组,以DMEM代替腺病毒转染LX-2细胞;(2)Ad-GFP组,转染空病毒Ad-GFP;(3)Ad-SHP2组,转染重组腺病毒Ad-SHP2。Western blotting检测3组LX-2细胞的SHP2、Bax、Bcl-2蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测3组LX-2细胞的SHP2 mRNA表达;TUNEL及膜联蛋白-V/碘化丙啶双标记流式细胞术检测3组LX-2细胞凋亡情况。结果 Ad-SHP2组LX-2细胞的SHP2蛋白及mRNA相对表达量高于Control组及Ad-GFP组（P <0.05）;Ad-GFP组与Control组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。TUNEL及膜联蛋白-V/碘化丙啶双标记流式细胞术检测结果显示,与Control组LX-2细胞凋亡率（3.08±0.73）%、（9.44±...     

四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化肝组织中SHP2表达与在体肝星状细胞活化及增殖的关系

目的 探讨四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化肝组织及在体肝星状细胞(HSC)的含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)表达变化与在体HSC活化及增殖的关系。方法 随机将50只健康雄性SD大鼠分为对照组(10只)、模型组(40只),采用腹腔注射四氯化碳法构建大鼠肝纤维化模型,Masson三色及HE染色检测大鼠肝组织的病理组织学变化,免疫组织化学染色检测大鼠肝组织的α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及SHP2表达,SHP2与α-SMA免疫荧光双标记检测大鼠肝组织中活化HSC的SHP2表达。结果 与对照组大鼠肝组织的α-SMA阳性表达积分光密度值(IOD)(0.09±0.01)相比,造模不同时间(2周、4周、6周、8周)大鼠纤维化肝组织的α-SMA阳性表达IOD (0.13±0.01、0.18±0.01、0.24±0.02、0.28±0.02)显著增加(P<0.05),并随着造模时间延长逐渐升高(P<0.05),即在体HSC的活化及增殖逐渐加快(α-SMA是HSC的活化标志)。造模不同时间(2周、4周、6周、8周)大鼠纤维化肝组织的SHP2阳性表达IOD (0.23±0.01、0.2...