宫颈肿瘤组织高危型HPV新分型方法的建立

【立论依据】 高危型HPV在感染过程中产生的病毒源性癌蛋白E6、E7在宿主细胞中呈过度表达,是致宫颈癌的关键因素。已经证实,病毒基因组整合到宿主染色体是HPV致癌的重要因素。HPV DNA的整合不但改变整合位点及临近宿主基因的表达,而且可使HPV衣壳蛋白基因(L1和L2)片段缺失,这严重限制了目前临床上使用的基于L1基因序列的HPV检测及分型。本研究拟选择宫颈癌组织高表达的E6、E7基因序列,设计特异性探针及引物,优化PCR条件,建立高危型HPV检测到的多重PCR技术,可快速对宫颈癌组织中高危型HPV进行检测和分型。 【设计思路】 设计HPV不同型别E6/E7特异性探针及引物,优化PCR条件,扩增宫颈肿瘤组织标本中高危型HPV E6/E7基因,结合测序,建立高危型HPV检测到的多重PCR技术,对宫颈癌组织高危型HPV进行检测和分型,并与目前临床上广泛使用的检测方法比较,验证该方法的敏感性和特异性。 【实验内容】 收集低度上皮内瘤变(LSIL)、高度上皮内瘤变(HSIL)和宫颈癌组织样本等不同类型的宫颈肿瘤组织标本,抽提DNA;根据高危型HPV早期基因 E6/E7基因序列,在同源性分析的基础上,设计HPV不同型别的E6/E7特异性探针及引物, PCR扩增宫颈肿瘤组织标本DNA,通过基因测序验证PCR扩增的特异性;进一步优化PCR条件,建立高危型HPV检测到的多重PCR技术,检测宫颈肿瘤组织标本中HPV感染及型别,并与目前临床上使用的检测试剂盒比较,分析检测的灵敏性和特异性。 【材料】 LSIL组织样本、HSIL组织样本和宫颈癌组织样本各30例; HPV16+Siha细胞、HPV18+Hela细胞;不同型别HPV的E6/E7特异性探针及引物;高保真PCR酶及反应体系;琼脂糖凝胶电泳及毛细管电泳检测系统等。 【可行性】 本项目立论依据充分,标本来源丰富,前期预实验已运用此方法对高危型HPV16/18完成初步分型。 【创新性】 迄今尚无相关研究报道。本检测方法的建立为我国高危型HPV流行检测及宫颈癌疫苗的推广奠定基础。     

趋化因子CXC14在结肠癌组织中的表达及其细胞效应分析

【目的】 分析CXC趋化因子配体14(chemokine CXC ligand 14,CXCL14)在结肠癌组织中的表达及其临床意义,并探讨其过表达对结肠癌细胞增殖、细胞周期的影响。 【方法】 采用实时荧光定量PCR、免疫组化检测40例结肠癌及癌旁正常组织中(距肿瘤边缘2 cm处)CXCL14的mRNA和蛋白表达。Kaplan-Meier生存曲线和Cox回归模型评估CXCL14在结肠癌组织中表达的临床意义。为分析CXCL14对结肠癌细胞的直接影响,本研究进一步构建过表达CXCL14的慢病毒,转染HT29结肠癌细胞,通过蛋白质印迹法检测转染后HT29结肠癌细胞中CXCL14的蛋白表达,利用CCK-8试剂盒、流式细胞技术检测过表达CXCL14对结肠癌细胞增殖能力的影响及细胞周期分布的改变。 【结果】 CXCL14 mRNA和蛋白水平在结肠癌组织中的表达水平较正常组织明显降低(P<0.05)。临床相关性分析表明,CXCL14表达下调与淋巴结转移及肿瘤的临床病理分期有关(P<0.05),与年龄、性别、浸润程度、肿瘤标志物等未见显著相关性(P>0.05);其中有淋巴结转移的结肠癌肿瘤组织CXCL14的相对表达量明显低于无淋巴结转移肿瘤组织(P<0.05),病理分期属Ⅲ、Ⅳ期的结肠癌肿瘤组织CXCL14的相对表达量也明显低于病理分期属Ⅰ、Ⅱ期标本(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示, CXCL14蛋白低表达的患者5年生存率显著性降低(P<0.01 )。成功构建过表达CXCL14的慢病毒,CXCL14慢病毒转染的HT29结肠癌细胞能明显上调CXCL14表达;CCK-8细胞增殖试验显示,CXCL14慢病毒转染HT29结肠癌细胞上调CXCL14表达后,细胞活力明显受到抑制 (P<0.01);细胞周期分析显示,CXCL14过表达结肠癌细胞在G0/GI期的细胞百分数显著高于对照组(P<0.05),而S期的细胞百分数显著低于对照组(P<0.05)。 【结论】 CXCL14可作为一个潜在的抑癌基因参与结肠癌的发生、发展过程,并为结肠癌的防治及预后评价提供一种新的候选靶点及临床辅助指标。     

抑癌基因FHIT在肿瘤发生发展中的研究进展

<正>染色体普通脆性位点(common fragile sites,CFS)是基因组的不稳定区域,对基因毒性和复制应激高度敏感,因此是肿瘤中最常被删除的位点之一^[1]。20多年前Ohta等^[2]发现第一个跨越染色体脆性位点FRA3B的基因,位于染色体3p14.2,其中还包含家族性肾透明细胞癌的易位断裂位点t(3;8);该基因编码的氨基酸序列含有His-X-His-X-His-XX序列(其中X是疏水残基),是组氨酸三联体(histidine triad,HIT)酶家族成员之一。     

个性化可调式口腔矫治器治疗轻中度阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征的疗效评估#br#

目的　研究新型个性化可调式口腔矫治器治疗轻中度阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（OSAHS）的疗效及安全性。方法　采用多中心自身对照方法,38例轻中度OSAHS患者佩戴口腔矫治器治疗1个月,记录佩戴前、后呼吸暂停低通气指数（AHI）、最低动脉血氧饱和度（lowest SaO2,LSaO2）、鼾声指数、Epworth嗜睡量表（Epworth sleepiness score,ESS）评分、鼾声视觉模拟量表（visualanalogue scale,VAS）评分及口腔矫治器使用情况。结果  37例OSAHS患者完成临床试验,有效率为67.6%（25/37）,AHI、鼾声指数、ESS评分、鼾声VAS评分下降,LSaO2上升,具有统计学意义（P <0.05）。患者主要不良反应为佩戴时轻微疼痛（1/37）,佩戴时对言语功能轻微影响（4/37）,佩戴时对吞咽功能轻微影响、流口水（3/37）。结论　新型个性化可调式口腔矫治器治疗轻中度OSAHS具有较好的疗效及安全性,不良反应少,依从性高。     

城市母亲科学喂养知识及婴儿膳食情况调查

为了解城市母亲科学喂养和知识水平及对断奶前后婴幼儿膳食营养素摄入的影响，对107位母亲进行科学喂养知识及婴儿膳食营养调查。结果表明：母亲的科学喂养知识显影响婴儿的营养素摄入；除铁外，婴儿 的营养素摄入量均达到RDA的60．0％以上，蛋白质供能比例过高，而碳水化合物供能比例过低。说明加强科学喂养知识的普及宣传十分必要。     

吃金枪鱼抑癫痫

癫痫，是一种最常见的神经系统疾病。对患癫痫的人来说，最近有条好消息可能使他们振奋：吃多脂鱼，如罐装金枪鱼，可有助于控制该病的发作。     

转移因子合维生素A防治小儿反复呼吸道感染疗效观察

使用转移因子和维生素A治疗32例反复呼吸道感染患儿，结果总有效率100％，显效率87％。说明维生素A和转移因子合用能增强免疫功能，有效地防治小儿呼吸道感染。     

转移因子合维生素A防治小儿反复呼吸道杂疗效观察

使用转移因子和维生Ａ治疗３２例反复呼吸道感染儿,结果总有效率１００％,显效率８７％,主明维生素Ａ和转移因子合用能增强免疫儿地防治小儿呼吸道感染。