siRNA抑制survivin的表达诱导人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的研究

目的筛选能有效抑制survivin基因表达的小干扰RNA(siRNA),探讨survivin基因抑制对人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡的影响。方法设计3段survivin siRNA靶位点,用PCR扩增siRNA表达框,与survivin-绿色荧光蛋白融合基因表达质粒共转染293T细胞,再构建有效siRNA的表达载体,转染卵巢癌SKOV-3细胞,分析sur-vivin基因的表达及细胞凋亡情况。结果筛选出了1段能高效抑制survivin表达的siRNA,能显著下调SKOV-3细胞内的survivin表达,并导致SKOV-3细胞凋亡。结论利用RNA干扰能有效抑制survivin基因表达并诱导人卵巢癌SKOV-3细胞凋亡,为进一步的靶向survivin分子的体内抗肿瘤研究奠定了基础。     

地震前后汶川映秀镇居民卫生防疫意识调查

目的:研究地震前和地震后15 d、30 d汶川映秀镇居民卫生防疫意识的变化,为开展震后群众防疫工作提供科学依据.方法:自行设计卫生防疫意识调查表,对灾民进行问卷调查,应用χ2检验决定差异显著性. 结果:完成有效问卷121份.统计表明震后映秀灾民接受卫生宣教的人数显著增加(P=0.000).理想的饮用水源由震前的山泉水和自来水转变为瓶装水和山泉水.认为粪便应该灭蝇处理的人比例显著上升(P=0.001).认为生活垃圾应该掩埋或焚烧的比例以及便后应洗手的比例都显著上升.当可能出现疫情时,选择提醒他人注意或积极上报的意识较震前显著上升(P=0.001).多数居民选择使用药物喷洒进行蚊蝇防制.对自身疾病关注度加大,等待医疗队送医送药或自己随意服药的意识加强. 结论:映秀镇居民在震后经过卫生宣教后卫生防疫意识较震前提高,但对医疗和消毒服务有过度依赖.     

候选HCVE1蛋白疫苗在健康志愿者中的耐受性和免疫原性

比利时Ghent大学和医院的Leroux-Roels等在Vero细胞中表达了1b丙型肝炎病毒（HCV）的E1蛋白，即羧基端截短的重组E1蛋白（192～326位氨基酸）。它装配形成20nm的病毒样颗粒后，在免疫小鼠中显示了良好的免疫原性。他们以之为候选疫苗，在20名男性志愿者中进行Ⅰ期临床试验。     

个体化延续护理在急诊高血压病患者健康教育中的应用

目的观察个体化延续护理在急诊高血压病患者健康教育中的应用效果。方法将患者随机分为两组,对照组实施常规护理,观察组将个体化延续护理应用到患者的健康教育中。结果观察组护理后SBP(110.25±7.25)mmHg、DBP(82.36±3.84)mmHg、饮食知识(95.81±2.49)分、运动(94.72±1.73)分、用药(90.66±2.18)分、监测(93.49±2.05)分、1年内再次就诊率为2.33%。对照组护理后SBP(131.48±2.50)mmHg、DBP(94.37±3.49)mmHg、饮食知识(80.19±3.16)分、运动(82.33±2.24)分、用药(84.17±3.04)分、监测(83.50±1.40)分、1年内再次就诊率为23.26%。两组对比,差异显著(P0.05)。结论将个体化延续护理应用到急诊高血压病患者的健康教育中,能够有效降低血压指标,提高患者的各项知识掌握水平,预防再次入院。     

中医证侯量表的研制进展

随着近年来中医证侯规范化的不断进展,中医证侯量表作为对中医临床诊治的一个量化评价的重要手段,将会在今后中医改革扮演越来越重要的角色。本文旨在阐述中医量表研制的具体方法,为中医证侯量表的设计者提供方法学,并提出对中医量表制定的一些建议。     

rpoB作为蜡样芽胞杆菌群快速检测的标志基因的实验研究

目的探讨常规PCR和实时荧光定量PCR(Q-PCR)方法检测蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的特异性和敏感性。方法提取蜡样芽胞杆菌群和其他各种对照细菌的基因组DNA,合成蜡样芽胞杆菌群rpoB基因扩增引物,采用常规PCR和SYBRgreen实时定量PCR两种方法扩增rpoB基因片段,并将PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行DNA测序。结果常规PCR和Q-PCR均能扩增出蜡样芽胞杆菌群rpoB基因的174bpDNA片段,而各种对照菌株均未见扩增。序列比对发现蜡样芽胞杆菌群细菌在该片段中存在5处核苷酸的不同,差异率为2.88%。以炭疽芽胞杆菌基因组DNA系列稀释作为扩增模板显示常规PCR最小检出量为3.42pg,Q-PCR的敏感性达到171fg,3次重复实验显示Q-PCR检测rpoB基因的灵敏度为(3.32×101±7.45×100)拷贝。结论以rpoB基因为检测靶基因的Q-PCR方法具有高度的特异性和良好的敏感性,能实现对蜡样芽胞杆菌群快速而准确的检测。     

庚型肝炎病毒NS5非结构蛋白在昆虫细胞中的表达

目的;研制特异的抗ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ抗体诊断试剂。方法：ＰＣＲ扩增ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ ＮＳ５基因片段并定向克隆至转座载体ｐＦａｓｔＢａｃ ＨＴａ,转化ＤＨ１０Ｂａｃ感受态细胞,３７℃振荡培养４ｈ使发生转座,于三抗选择平皿筛选重组ｂａｃｍｉｄ。脂质体介导转染ｓｆ９细胞,将转染上清再次感染ｓｆ细胞,以批量表达ＮＳ５重组蛋白。利用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ方法分析,检测重组蛋白。结果：序     

中华按蚊热激蛋白40(HSP40)cDNA序列的全长扩增

目的 为获取中华按蚊感染约氏疟原虫后24 h的高表达基因热激蛋白40(HSP40)cDNA的全长序列. 方法 运用抑制性消减杂交技术(suppression substractive hybridization,SSH)构建中华按蚊感染约氏疟原虫后24 h的差异表达基因文库,从高表达文库中获得长度为363 bp的HSP40基因的cDNA片段,运用RACE技术对其cDNA序列进行全长扩增. 结果 获得中华按蚊HSP40 cDNA的全长序列,总长度为1 159 bp,开放阅读框为1 014 bp,编码337个氨基酸. 结论 获得了中华按蚊HSP40 cDNA的全长序列.     

T_(1762)A_(1762)变异对乙型肝炎病毒C启动子活性影响

国的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）Ｃ基因调节序列存在较多变异,为探讨在诸多变异中,Ｔ１７６２Ａ１７６４变异对Ｃ区启动子（ＣＰ）活性究竟起何作用。方法用克隆及ＰＣＲ产物直接测序,检测Ｔ１７６２Ａ１７６４变异;并将含调节序列的ＰＣＲ产物插入到氯霉素乙酰转移酶（ＣＡＴ）表达质粒中,转染ＨｅｐＧ2细胞并瞬时表达。结果通过比较野生株及变异株在ＣＰ区序列及ＣＡＴ表达水平显示,Ｔ１７６２Ａ１７６４变异在使ＣＡＴ表达下调中起主要作用。结论Ｔ１７６２Ａ１７６４变异在使ＣＰ活性下调中起主要作用。     

核酸探针在结核病实验室诊断中的应用进展

核酸探针杂交技术在结核分枝杆菌的分子生物学研究、细菌分类与鉴定、流行病学调查等方面具有十分重要的作用。本文综述了同位素标记核酸探针（包括全染色体探针、克隆重DNA片段探针、cDNA探针）和非同位素标记核酸探针（包括AP－DNA探针、AAF－DNA探针、AE－DNA探针、Dig－DNA探针）在结核病实验室诊断中的应用进展。