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目的:建立可用于寡肽血液浓度测定并可与ESI-MS对接的HPLC方法。方法:以ARPAK溶栓寡肽为模型化合物,考察其对色谱系统的稳定性,选择适宜的洗脱系统,消除寡肽与血浆蛋白的相互作用,确定柱温与寡肽峰面积及保留时间的关系,寻找血液中寡肽降解酶抑制剂,比较不同的填料对从血液中提取寡肽的影响,优化寡肽柱前衍生化的温度、时间、pH环境和试剂。结果:含ARPAK的小鼠血浆在50℃、pH8.5的条件下与丹酰氯反应70min,衍生化程度可达峰值。含ARPAK的血浆溶液丹酰氯衍生化后用HClO4处理,可以有效地使被测的丹酰氯衍生化的ARPAK从蛋白中游离。pH9.4的磷酸盐缓冲溶液可以有效地阻滞ARPAK在任意时刻的降解。采用自装的XAD-2柱,可以定量从鼠血浆中回收ARPAK。ARPAK在A相为pH2.1磷酸盐缓冲液,B相为乙腈的流动相中显示最佳的分离度。室温进样,20%A:80%B至45%A:55%B,10min;45%A:55%B至70%A:30%B,1min,丹酰氯衍生化ARPAK的保留时间为11.77min,检测限为10ng。结论:上述HPLC条件以及样品前处理方法可用于寡肽血样HPLC/ESI-MS研究。 相似文献
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蛋白质及多肽的液相色谱-电喷雾离子化质谱研究进展 总被引:4,自引:0,他引:4
蛋白质及多肽的液相色谱电喷雾离子化质谱研究进展徐友宣彭师奇(北京医科大学生源药物化学中德联合实验室,北京100083)多肽及蛋白质药物对临床的重要性,已引起各国药物化学界的广泛重视。在多肽或蛋白质药物的结构研究中,MS研究有重要价值。例如FABM... 相似文献
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含Arg-Arg寡肽的液相合成及活性研究 总被引:1,自引:0,他引:1
Arg-Arg二肽的胍基可以为NO合成酶利用,产生NO样舒血管效应.Arg-Arg的羧端用-CH_3封闭,活性降低.Arg-Arg的两个α-氨基用丙二酰基或丁二酰基封闭,活性进一步降低,为了观察Arg-Arg的氨端用氨基酸封闭可能造成的影响,本文合成了Leu-Arg-Arg和Ser-Leu-Arg-Arg两种寡肽,测定了它们的抗血小板聚集作用和血管舒张作用.结果表明,Arg-Arg的氨端用氨基酸或寡肽封闭,对舒血管作用无反面影响。合成的两种寡肽还可以有效地抑制ADP诱导的血小板聚集.实验表明,设计抗血栓寡肽时,羧端引入Arg-Arg二肽可能会有益处. 相似文献
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液相色谱-大气压化学电离质谱联用在小分子药物代谢研究中的应用 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:建立可用于尿样检测的小分子药物代谢分析的液相色谱-大气压化学电离质谱联用(LC/APCI/MS)方法。方法:对14种小分子药物服用者的尿样经前处理后,考察尿样中原药和代谢产物;收集克罗帕米1次给药后24h的尿样,考察尿样中原药量与时间的关系;对1种小分子药物的葡萄糖醛酸结合物进样1μg,考察APCI/MS行为。结果:在本实验的LC/APCI/MS条件下,14种小分子药物服用者的尿样全部给出了原药或代谢产物的准分子离子峰,大多数峰为基峰,少数峰为强峰,极少数为弱峰,末发生漏检;克罗帕米服用者的尿样显示,24h内从尿样中可明确检出原药,其中3.0h和11.0h的尿样中原药浓度达峰值;雌酮的葡萄糖醛酸结合物在APCI/MS条件下既给出明确的3—O-葡萄糖醛酸—1β—基雌酮的准分子离子峰,又给出明确的雌酮碎片和β—葡萄糖醛酸碎片的互补离子蜂。结论:LC/APCI/MS用于小分子药物代谢和排泄研究既可分析经前处理的尿样,又可分析未经处理的尿样,灵敏度高,有广阔应用前景。 相似文献
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雌二醇对肿瘤部位有特别的亲和力 ,例如以雌二醇为载体苯丁酸氮芥就能够选择性地聚集在肿瘤部位并显示强抗肿瘤作用。在报道过的雌二醇载体中 1 甲基 3 羟基 1 ,3,5 ( 1 0 ) ,9( 1 1 ) 雌甾四烯 1 7 酮( 1 )的特点是对肿瘤部位的亲和力高和雌激素活性低。为了满足对雌二醇载体的需求 ,通过 1 1 α 羟基雄甾 1 ,4 二烯 3,1 7 二酮 ( 2 )和雄甾 1 ,4,9( 1 1 ) 三烯 3,1 7 二酮 ( 3)的硝甲基化和硝乙基化制备重要的雌二醇载体。用乙二胺作催化剂回流 2和硝基甲烷 ,使硝甲基化选择性地发生在 1 7位羰基以 60 %收率生成1 1α 羟基 1 7 硝基甲烯雄甾 1 ,4 二烯 3 酮 ,3位羰基不参与反应。采用相同的操作使 2和硝基乙烷以 2 3%收率生成 1 1α ,1 7β 二羟基 1 7α 乙基雄甾 1 ,4,8( 1 4) 三烯 3 酮 ,3和 1 7位羰基都不参与反应。在对甲苯磺酰氯存在下使 2以 94%收率转化为 1 1α 对甲苯磺酰氧基雄甾 1 ,4 二烯 3,1 7 二酮 ( 4 )。 90℃在醋酸钾和醋酐存在下使 4发生消除反应 ,以 80 %收率生成 3。发现 3和硝基甲烷回流 ,期间蒸去至少 1 0 %硝基甲烷 ,残留物再用乙二胺处理 ,然后回流 1h可以以 96%收率得到 1。若将 3、硝基甲烷及乙二胺的混合物简单回流 ,则以 45 %收率得到 1 7 硝基甲烯 雄甾 1 ,3,1 1 相似文献
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