一个遗传性非综合征型耳聋家系的突变分析

目的分析一个遗传性非综合征型耳聋家系的突变，并探讨缝隙连接蛋白beta2(gap junction protein beta 2，GJB2)基因235delC突变是否会加重线粒体A1555G突变导致的非综合征型耳聋症状。方法对一个母系遗传性非综合征型耳聋核心家系72个成员取外周血提取DNA，经聚合酶链反应扩增后，利用Alw26Ⅰ限制性内切酶酶切及直接测序验证，对其线粒体DNA突变进行研究；利用ApaⅠ限制性内切酶酶切及直接测序验证，筛查核心家系中GJB2基因235delC突变情况，并对GJB2基因235delC和线粒体A1555G突变的关系进行研究。结果在27名母系成员中均发现具有线粒体A1555G突变，呈母系遗传；具有耳聋表型的为21人(77．8％)，家族外显率高；所筛查的包括配偶在内的72名个体中，仅3例具有GJB2基因235delC杂合子突变，且均出现在母系成员中，但3例的耳聋表型却不同。结论线粒体A1555G突变是本家系耳聋遗传易感性的基础，在该家系中GJB2基因的235delC杂合子突变未加重线粒体A1555G突变导致的非综合征型耳聋。     

母系遗传耳聋大家系的线粒体基因组全序列分析

目的 在江苏淮阴一母系遗传非综合征型耳聋大家系中，寻找线粒体基因组上可能影响1555（A→G）突变表型的其他位点突变。方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP）和测序技术。检测了核心分支家系中27名母系成员的线粒体DNA上1555位点和7445位点的碱基变化，进而对该家系2名母系成员的线粒体全基因组和其他25名母系成员线粒体12S rRNA基因MTRNR1和tRNA-Ser^（UCN）基因MTTS1进行了全长测序。结果 再次证明了1555（A→G）突变是该家系成员致聋的分子生物学基础之一；并发现该家系27名母系成员的线粒体基因组中除1555（A→G）突变外，还同时存在有955-960（insC）同质型突变，两突变共分离。另外，新发现一个线粒体DNA突变——7449（insG），但该突变仅在2名母系成员中存在。结论 推测955-960（insC）突变可能通过改变12S rRNA基因的高级结构，并与1555（A→G）突变协同作用，提高了突变携带者对氨基糖甙类药物的敏感性；同时该突变可能也会导致线粒体蛋白质的合成缺陷。从而提高1555（A→G）突变致聋的外显率。     

携带人内皮抑素基因的增殖型腺病毒AdTPHre-hE对胰腺癌的体内实验研究

目的通过建立裸鼠胰腺癌肿瘤模型,在体内实验中进一步证实携带人内皮抑素基因的增殖型腺病毒AdTPHre-hE的抗肿瘤作用.方法建立AsPC-1胰腺癌细胞BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型,在瘤体内注射AdTPHre-hE治疗,观察肿瘤生长.ELISA法检测裸鼠血清中人内皮抑素浓度,肿瘤组织行Hexon单克隆抗体免疫组化染色及微血管免疫组化染色.结果AdTPHre-hE抑制肿瘤生长的作用显著强于Ad-hE(P＜0.01)和对照组(P＜0.01).随着治疗时间的延长,裸鼠血清中内皮抑素表达量不断增加,明显高于Ad-hE组(P＜0.01)和对照组(P＜0.01).病毒Hexon免疫组化染色显示,AdTPHre-hE治疗组移植瘤内可见片状或弥漫性分布的阳性染色,AdTPHre-hE治疗组瘤组织中微血管密度为16.3±4.3明显少于Ad-hE组的33.8±6.2(P＜0.01)和对照组的36.8±4.6(P＜0.01).结论增殖型腺病毒AdTPHre-hE介导人内皮抑素的表达,具有明显抑制肿瘤细胞生长的作用.     

梗阻性重型胆石性胰腺炎的临床处理

目的 探讨梗阻性重型胆石性胰腺炎的病变特点及处理原则.方法 分析温州医学院第一附属医院1997年1月~2005年10月期间收治的10例梗阻性重型胆石性胰腺炎患者的临床资料.结果 (1)6例患者存在胆总管结石,4例胆总管内未见结石;(2)4例出现Charcot三联征,1例出现Renyolds五联征;8例以右上腹痛为主,仅1例出现左上腹痛;6例呈胰头部局灶性坏死;2例见散在斑点状坏死;2例见弥漫性坏死灶.(3)外科收治的8例患者,全部采取早期手术治疗而获得治愈;内科收治的2例患者采取早期传统保守治疗,1例病情恶化第8天自动出院,1例病情好转遗留胆石病变出院.结论 (1)胆管梗阻可导致胆石性胰腺炎,梗阻是原因,病因不除,疾病难以控制;(2)胆总管内未见结石的胆石性胰腺炎也可出现胆道梗阻,应引起临床重视;(3)梗阻性重型胆石性胰腺炎的病变特点:胆道症状突出,胰腺病变以局灶性胰头部坏死为主;⑷梗阻性重型胆石性胰腺炎应采取早期手术治疗,由外科收治较为合理.     

50例肝脏炎性假瘤的临床分析

目的：探讨肝脏炎性假瘤的临床表现，为诊断及治疗提供依据。方法：收集50例经手术和病理证的肝脏炎性假瘤病例资料进行回顾分析。结果：该组平均年龄44岁，男性多见，占68％。50例患者中25例无明显症状，21例有右上腹疼痛，4例出现发热。病灶位于右叶占80％。其中84％患者B超表现为低回声或略低回声，66％边界清楚，72％肿块内部回声不均匀。CT检查示均为低密度影，形态不规则，只有19．4％的患者增强扫描后出现不同时期的增强。17例患者行MRI检查T1加权粉氏信号，不均匀，边缘模糊，质子加权为等信号；T2加权4例等低信号，2例等信号，11例为略高信号，病灶内似有分隔，增强后只有2例轻度强化。50例术后均恢复良好。结论：B超发现肝脏炎性假瘤的重要手段，动态CT扫描及MRI对于鉴别其他肝脏占位有较大帮助。手术切除仍是目前首选的治疗方法。     

含甲型H1N1流感病毒HA基因序列病毒样颗粒的制备

[目的]构建耐RNase酶的内含甲型H1N1流感病毒HA基因序列的病毒样颗粒。[方法]构建中间载体pET32a-MS2,将甲型H1N1流感病毒的HA基因片段连接中间载体上,构建原核表达载体pET32a-MS2-HA,转化宿主菌,诱导表达制备病毒样颗粒,对病毒样颗粒进行荧光定量RT-PCR检测和稳定性实验。[结果]表达载体经PCR、酶切鉴定分析后证实构建成功,荧光定量RT-PCR实验表明该病毒颗粒含有HA基因片段并且颗粒稳定性良好。[结论]成功构建了含甲型H1N1流感病毒HA基因序列的病毒样颗粒且稳定性良好,有望作为甲型H1N1流感病毒RNA检测的标准品和质控品。     

一例肝细胞癌和卵巢癌双原发癌患者的MDT诊治报道

本文介绍1例初诊原发性肝癌和卵巢癌双原发癌患者的多学科团队（multidisciplinary team,MDT）诊疗过程。该患者肝脏和盆腔占位性质难以确定。第1次MDT讨论考虑盆腔占位为卵巢癌伴盆腔局部转移,但肝脏病灶性质未定,双原发肿瘤还是转移性癌？患者行肝脏病灶穿刺活检提示肝细胞癌。第2次MDT讨论认为肝脏肿瘤容易破裂出血,2个部位病灶可同时手术切除。患者同时接受肝脏肿瘤、卵巢、子宫及系膜切除术。术后病理检查示肝细胞癌和卵巢高级别浆液性癌。术后患者采用紫杉醇+卡铂方案联合贝伐珠单抗治疗。随访至今未见复发,患者生存已38个月。MDT诊疗模式有利于这种较为罕见的肝和卵巢双原发恶性肿瘤的诊断和治疗方案的确定,患者也因此获得较好生存。     

复方玄驹胶囊治疗男性迟发性性腺功能减退临床研究

目的：观察复方玄驹胶囊治疗男性迟发性性腺功能减退的临床效果及安全性。方法：选取 120 例 迟发性性腺功能减退患者作为研究对象,采用完全随机分组法分为观察组和对照组,每组 60 例。对照组采用 安特尔治疗,观察组采用复方玄驹胶囊联合安特尔治疗。比较 2 组临床疗效、不良反应,并比较 2 组治疗前后 性激素水平、老年男性症状问卷评分（AMS）、国际勃起功能障碍问卷简表-5（IIEF-5）评分及谷草转氨酶、 血脂、血糖、总前列腺特异抗原（TPSA）及前列腺体积。结果：治疗前,2 组卵泡雌激素（FSH）、黄体生成 素 （LH）、孕酮 （P）、催乳素 （PRL）、总睾酮 （TT）、雌二醇 （E 2 ） 水平比较,差异无统计学意义 （P＞ 0.05）;治疗后,2 组 FSH、LH、P、PRL 水平均降低（P＜0.05）,TT、E 2 水平均升高（P＜0.05）,且观察组 FSH、LH、P、PRL 水平低于对照组（P＜0.05）,TT、E 2 水平高于对照组（P＜0.05）。治疗前,2 组 AMS 各症 状评分比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;治疗后,2 组 AMS 各症状评分均降低（P＜0.05）;且观察组低于 对照组（P＜0.05）。治疗前,2 组 IIEF-5 各评分比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;治疗后,2 组 IIEF-5 各 评分均升高（P＜0.05）,且观察组高于对照组（P＜0.05）。治疗前,2 组谷草转氨酶、甘油三酯、空腹血糖、 TPSA 水平及前列腺体积比较,差异无统计学意义（P＞0.05）;治疗后,2 组谷草转氨酶、甘油三酯、空腹血 糖、TPSA 水平及前列腺体积比较,差异无统计学意义（P＞0.05）。随访 6 个月,观察组对于治疗后生活质量 改善情况的总满意率为 93.33%,高于对照组 81.67%（P＜0.05）。治疗期间,2 组均未发生严重不良反应。结 论：复方玄驹胶囊联合安特尔治疗男性迟发性性腺功能减退较单独采用安特尔治疗更能改善患者临床症状,提 高男性激素水平及患者满意率。     

TaqMan荧光定量RT-PCR技术快速检测EV71方法的建立

目的:建立特异、灵敏、快速的TaqMan荧光定量RT-PCR方法,用于快速检测71型肠道病毒(EV).方法:从Genebank下载EV71型VP1基因序列,在其保守区域设计特异性引物与TaqMan探针,并对荧光定量PCR体系与反应条件进行优化,同时验证方法的特异性、敏感性和重复性.结果:该方法对EV71具有高度特异性,与非71型肠道病毒等均无交叉反应,检测灵敏度达2×10-2 TCID50/mL,反应体系具有很高的稳定性,整个操作过程仅需2.5 h.结论:所建立的TaqMan荧光定量PCR方法特异、灵敏、快速,适用于EV71的日常监测和暴发时应急诊断.     

手足口病病原液相芯片检测方法的建立

目的：建立检测手足口病病原的液相芯片方法。方法：设计、合成并修饰基因特异性引物和寡核苷酸探针,将寡核苷酸探针和荧光编码微球进行偶联,制备液相芯片;将样本核酸多重PCR扩增产物与液相芯片进行杂交,并通过液相芯片检测仪读取检测结果。结果：同时检测多种肠道病毒（EV）,肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A16型（CAV16）的病毒核酸最低检出量均为1pg,检测特异性高。与参照方法相比,EV、EV71、CAV16的检测灵敏度分别为：91．4％、92．9％、100．O％,检测特异度分别为100．0％、97．1％、98．2％,检测准确度分别为：100．0％、96．3％、87．5％。结论：构建的检测手足口病病原的液相芯片方法,具有高通量、灵敏度高、特异性强和检测时间短等优点,为手足口病的快速诊断奠定了基础。