嵌合抗原受体T细胞在重度免疫缺陷鼠体内的生物分布研究

目的 研究嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞在非荷瘤和荷瘤重度免疫缺陷小鼠体内的增殖、分布和存续时间。方法 非荷瘤小鼠分布研究：使用转染荧光素酶的CAR-T(CAR-T-FLuc)细胞于小鼠尾静脉给药1次,于给药后不同时间点采用活体成像的方法检测CAR-T-FLuc细胞分布情况,并在给药后3 h和2、7、14、28、56、84 d解剖动物,取血液、心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、脑、睾丸、附睾、子宫、卵巢、胃、十二指肠、骨髓、脂肪、骨骼肌,QPCR方法检测CAR-T-FLuc细胞在外周血及上述组织器官中的分布情况。荷瘤小鼠分布研究：小鼠尾静脉注射Raji细胞,建立肿瘤模型,之后给予CAR-T-FLuc细胞,并采用与非荷瘤小鼠相同的检测方法考察CAR-T-FLuc细胞在活体和各组织脏器不同时间点的表达。结果 非荷瘤小鼠CAR-T-FLuc细胞在脾脏和肺脏中分布最高,其次是血液;给药后3 h,细胞主要分布在肺脏,后转移到其他脏器;各脏器给药后2、14、56 d是CAR表达较高时间点,84 d时CAR表达接近为零。荷瘤小鼠CAR-T-FLuc细胞在脾脏中分布最高,其次是肺和血液。给药后5 min...     

高血压不同中医证候患者脑白质病变评估研究

目的评估并预测高血压不同中医证候患者脑白质病变(WMLs)的危险性,探讨高血压不同中医证候与脑白质病变间的相互关系及其影响因素。方法2019年9月—2021年12月,根据纳入、排除标准选择甘肃中医药大学附属医院心血管科等相关科室就诊患者309例,辨证分为痰瘀互结证、肾气亏虚证、肝火亢盛证、阴虚阳亢证4种证候,检测患者舒张压(DBP)、同型半胱氨酸(Hcy)、尿酸(UA)、血清胱抑素C(CysC),并运用Fazekas与ARWMC量表评估各证候高血压患者WMLs部位、量表评分、危险程度(低危、中危、高危),归纳并总结不同证候与各危险因素间的相关性。结果不同中医证候患者间舒张压、Hcy、UA、CysC差异具有统计学意义(P<0.05)。经Fazekas、ARWMC量表评估,各证候间WMLs部位分布差异无统计学意义;各证候间WMLsFazekas量表评分差异无统计学意义,ARWMC量表评分差异具有统计学意义(P<0.05);WMLsFazekas与ARWMC量表危险度分级,不同中医证候间WMLs差异有统计学意义(P<0.05)。高血压患者与WMLsFazekas量表相关的危险因素经Spearman秩相关分析,痰瘀互结证组患者WMLs程度与年龄、Hcy、UA、CysC呈正相关(r_s＝0.22、0.23、0.18、0.24,P<0.05),与高尿酸血症(HUA)、高同型半胱氨酸血症(HHcy)呈负相关(r_s＝－0.19、－0.21,P<0.05);肝火亢盛证组患者WMLs程度与UA呈正相关(r_s＝0.48,P<0.05),与HUA呈负相关(r_s＝－0.47,P<0.05);阴虚阳亢证组患者WMLs程度与HUA、年龄、CysC呈正相关(r_s＝0.27、0.37、0.27,P<0.05),与UA呈负相关(r_s＝－0.32,P<0.05);肾气亏虚证组患者WMLs程度与Hcy呈正相关(r_s＝0.33,P<0.05),与HHcy、舒张压呈负相关(r_s＝－0.32、－0.30,P<0.05);痰瘀互结证组相比于肝火亢盛证组、阴虚阳亢证组、肾气亏虚证组,差异有统计学意义(P<0.05)的危险因素最多。WMLs经ARWMC量表评估,各证型间WMLs存在差异(P<0.05),高血压患者与WMLsARWMC量表相关的危险因素经Spearman秩相关分析,阴虚阳亢证组患者WMLs程度与UA呈正相关(r_s＝0.57,P<0.05),与HUA呈负相关(r_s＝－0.58,P<0.05);肝火亢盛证组患者WMLs程度与UA呈正相关(r_s＝0.34,P<0.05),与HUA呈负相关(r_s＝－0.44,P<0.05);肾气亏虚证组患者WMLs程度与CysC呈正相关(r_s＝0.26,P<0.05),与糖尿病、HUA呈负相关(r_s＝－0.30、－0.28,P<0.05);肾气亏虚证组相比于痰瘀互结证组、肝火亢盛证组、阴虚阳亢证组,差异有统计学意义(P<0.05)的危险因素最多。结论痰瘀互结证和(或)肾气亏虚证可能是高血压病患者WMLs发病率较高的中医证候。     

CAR-T细胞治疗产品非临床药效学研究关注点

CAR-T细胞（Chimeric Antigen Receptor T Cells,CAR-T）是一种表达嵌合抗原受体的基因工程T细胞,也称"活的药物",可以增强基因工程T细胞的特异性,能够以MHC （主要组织相容性复合体,Major Histocompatibility Complex,MHC）非依赖性的方式高度靶向肿瘤抗原,是治疗肿瘤的一种新手段。最近,临床上使用CAR-T细胞治疗复发、难治性血液恶性肿瘤和多发性骨髓瘤取得了很好的疗效;同时,采用CAR-T细胞治疗实体瘤的研发也在积极开展。根据所构建的CAR-T细胞不同的适应证和作用原理,构建不同的动物肿瘤模型,研究CAR-T细胞在动物模型的抗肿瘤活性,可以对CAR-T细胞进行概念验证性研究并证明其体内药效学活性,为临床研究提供有力的数据支持。     

基因治疗药物AAV5-脂蛋白脂酶变异体在食蟹猴体内的毒性研究

目的 评估基因治疗药物AAV5-脂蛋白脂酶变异体(GC304)在食蟹猴体内的毒性。方法 30只食蟹猴,分为溶媒对照组(静脉注射溶媒)、GC304低剂量组(3×10¹³ vg·kg^-1)和高剂量组(1×10¹⁴ vg·kg^-1)。试验期间,所有动物进行临床症状和注射部位观察,每周进行摄食量和体重测定。在给药前后不同时间点进行免疫原性检测(包含抗AAV5结合抗体、中和抗体及抗LPL结合抗体)、血液学、血清生化、血凝和尿生化检查,并同时进行T淋巴细胞分型、细胞因子、心电、血压、体温和眼科检查。给药后4周和6个月解剖,动物进行大体观察、脏器称重和组织病理学检查,同时进行GC304的生物分布研究及表达产物测定,并在不同时间点对血液中目的基因DNA进行检测。结果 受试物对食蟹猴临床症状、注射部位、体重、摄食量、眼睛各项指标、体温、血压、心电图、血凝、血清生化、T淋巴细胞分型、尿液、细胞因子、脏器重量等指标未见影响。高剂量组动物给药后4周血小板下降。与给予受试物相关的组织病理学改变为脾脏和腹股沟淋巴结生发中心活跃...     

肿瘤浸润淋巴细胞在重度免疫缺陷小鼠体内毒性研究

目的 评价肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）在重度免疫缺陷小鼠体内的毒性反应。方法 使用NOG小鼠,给予TIL细胞3次,每周1次。考察小鼠临床症状、注射部位刺激性、摄食量、体重、血液学和血清生化检查、人源细胞因子检测和组织病理学检查等,同时考察受试物在血液中的分布情况。结果 两个剂量TIL注射对小鼠注射部位、体重、摄食量、血液学、血清生化、脏器重量等指标未见明显影响。在高剂量下,雌性小鼠在恢复期结束时IFN-γ浓度升高。与受试物相关的组织病理学改变为多器官混合细胞聚集,以及胸骨和大腿骨骨髓细胞数目增多。在血液中,均可检测到CD3⁺、CD3⁺CD4⁺、CD3⁺CD8⁺细胞,3种细胞变化趋势一致,且呈剂量依赖性,至末次给药后29 d,3种细胞数量基本消除。结论 NOG小鼠3次给药后,对TIL具有较好的耐受性,且在恢复期结束时TIL在小鼠血液中基本消除。