人牙周膜细胞原代培养及鉴定

目的 建立人牙周膜细胞原代培养方法.方法 取因正畸需要拔除的健康前磨牙根面中1/3的牙周膜组织,分别运用组织块法(n=12)、酶消化法(n=10)及组织块一酶消化联合培养技术(n=12)培养人牙周膜细胞.运用免疫组化染色法对培养细胞的生物学特征加以鉴定.绘制生长曲线,观察细胞生长并计算细胞群体倍增时间.结果 组织块法、酶消化法和织块一酶消化联合培养的细胞培养成功率分别为16.67%、20.00%和33.33%.培养细胞的抗波形蛋白染色阳性,抗角蛋白染色阴性;碱性磷酸酶染色阳性.细胞生长曲线有明显的滞留期、指数生长期和平台期,群体倍增时间为109.79 h.结论 成功进行人牙周膜细胞的原代培养,培养细胞具有牙周膜细胞的生物学特征.组织块-酶消化联合培养可提高人牙周膜细胞原代培养的成功率.     

人牙周膜细胞原代培养及鉴定

目的 建立人牙周膜细胞原代培养方法.方法 取因正畸需要拔除的健康前磨牙根面中1/3的牙周膜组织,分别运用组织块法(n=12)、酶消化法(n=10)及组织块一酶消化联合培养技术(n=12)培养人牙周膜细胞.运用免疫组化染色法对培养细胞的生物学特征加以鉴定.绘制生长曲线,观察细胞生长并计算细胞群体倍增时间.结果 组织块法、酶消化法和织块一酶消化联合培养的细胞培养成功率分别为16.67%、20.00%和33.33%.培养细胞的抗波形蛋白染色阳性,抗角蛋白染色阴性;碱性磷酸酶染色阳性.细胞生长曲线有明显的滞留期、指数生长期和平台期,群体倍增时间为109.79 h.结论 成功进行人牙周膜细胞的原代培养,培养细胞具有牙周膜细胞的生物学特征.组织块-酶消化联合培养可提高人牙周膜细胞原代培养的成功率.     

骨髓基质细胞的体外培养及分化为成肌样细胞的实验研究

目的:评估骨髓基质细胞(bMSCs)体外分化为成肌样细胞的能力,探讨骨髓基质细胞作为肌肉组织工程新的种子细胞的可能性。方法:体外分离培养兔骨髓基质细胞,经腺病毒介导的MyoD(Ad-MyoD)基因转染后,观察细胞的形态变化及增殖情况,并行成肌细胞标志物的检测。结果:转染后细胞形态发生明显变化,可见肌管样结构;myogenin及desmin免疫细胞化学染色呈阳性。结论:体外培养的骨髓基质细胞可以向成肌方向转化,有望成为肌肉组织工程新的种子细胞。     

一种新型机械应变细胞加载装置的研制

目的研究开发一套具有自主知识产权的数控机械应变细胞加载装置,为细胞力学研究提供必要的研究手段。方法加载装置基于圆形基底形变技术,采用数字式测控系统和基于PC机平台的专用软件,实现对体外培养细胞加载牵张应变。采用MTT比色实验检测人牙周膜细胞在弹性硅橡胶细胞培养膜上的附着生长能力。采用该装置对体外培养人牙周膜细胞加载1%、10%、20%拉伸应变0.5、1和24 h,倒置相差显微镜观察细胞形态、排列的变化。结果数控机械应变细胞加载装置可对体外培养细胞加载不同强度、频率和时间的拉伸应变,具有输出应变范围大、精度高、操作方便、显示直观等优点。硅橡胶膜和对照细胞培养板接种细胞1、2、4、7、8 d后,MTT比色实验光吸收值之间无统计学差异(P>0.05),显示弹性硅橡胶膜具有良好的细胞附着生长能力。人牙周膜细胞加载10%、20%拉伸应变24 h后,细胞形态、排列发生改变,胞体呈长梭形,并成栅栏状平行排列,细胞长轴垂直于拉伸应变方向。结论数控机械应变细胞加载装置可有效地对体外培养细胞加载动态机械拉伸应变,为体外细胞力学研究提供了必要的研究手段。     

GFP转基因鼠肌卫星细胞系的构建及基因介导成骨分化的实验研究

目的 评价肌卫星细胞(Muscle satellite cells,MSCs)体内外成骨分化的能力,探讨肌卫星细胞作为骨组织工程新的种子细胞的可能性.方法 取新生绿色荧光蛋白转基因小鼠颌面部肌肉,采用酶消化法分离出MSCs,体外原代及传代培养,经腺病毒介导的人骨形成蛋白2(Ad-BMP2)基因转染后,行成骨细胞标志物的活性检测及细胞化学染色,并进行细胞体外矿化及体内成骨的检测.结果 转染后细胞碱性磷酸酶(ALP)组织化学染色呈阳性;骨钙素(OC)免疫细胞化学染色呈阳性且OC活性增强(p＜0.05);21天后见钙结节形成;转染后的细胞与材料复合物植入裸鼠后肢肌肉内,4周后见骨组织形成.结论 体外培养的肌卫星细胞体内外可以成骨分化,可以成为骨组织工程的新的种子细胞.     

南京市公众结核病防治知识现况分析

目的 掌握南京市公众结核病防治知识知晓水平,为制定有效的防治措施提供科学依据。方法 采用多阶段概率抽样的方法在全市随机抽取1014人,使用调查问卷对调查对象进行入户面对面调查。结果 南京市公众结核病核心信息总知晓率为75.01%,全部核心信息知晓率分别为36.08%。影响核心信息总知晓率、全部核心信息知晓率的因素主要是户籍、居住地、文化程度、职业、收入水平。公众单一核心信息知晓率从高到低分别是“核心信息2”、“核心信息1”、“核心信息5”、“核心信息3”、“核心信息4”。结论 南京市结核病健康宣教工作取得较好成效。公众对结核病症状等疾病相关知识掌握较好,对结核病防治的相关政策掌握较差。学生、流动人口的结核病宣教工作需进一步加强。     

机械牵张应变对人牙周膜细胞内游离钙离子浓度的影响

目的:观察机械牵张应变作用下,人牙周膜细胞(HPDLCs)内游离Ca2 浓度的变化。方法:体外培养HPDLCs,利用动态机械应变细胞加载装置,对1%、10%和20%应变组的细胞分别进行30、60和120min的动态牵张加载,通过流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测细胞内游离Ca2 浓度的变化,并应用SPSS13.0软件包对数据进行方差分析。结果:当HPDLCs加载30min时,各组检测到的胞内游离Ca2 浓度与对照组无显著差异(P>0.05);60min时,各个应变组的胞内Ca2 浓度明显升高,与对照组相比均有非常显著的差异(P<0.01);加载时间延长到120min时,各组Ca2 浓度又降至对照组水平(P>0.05)。结论:机械牵张应变可通过钙离子信号系统影响HPDLCs的生物学活性。     

三种不同材料烤瓷冠对龈沟液内天冬氨酸转氨酶和碱性磷酸酶水平的影响

目的:通过对不同材料的烤瓷冠修复后龈沟液(gingivalcrevicularfluid,GCF)内天冬氨酸转氨酶(aspartatetransaminase,AST)和碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)总量的测定,来探讨内冠材料对牙周的影响。方法:选择临床病例26例,采用镍铬合金烤瓷冠、钛合金烤瓷冠和金铂合金烤瓷冠修复,分别在修复前、修复后1个月和3个月进行临床检查和取GCF,进行GCF量和AST、ALP总量的测定,从而进行分析。结果:1个月时,3组之间并未见指标差异;3个月时镍铬合金组和钛合金组之间未见指标差异,此时镍铬合金组和钛合金组分别与金铂合金组在指标上均有明显差异。结论:非贵金属对牙周组织有不利影响,同时通过测定GCF中AST和ALP的总量,可以方便的动态观察烤瓷冠对牙周的影响。     

IETA常规超声特征与超声造影对子宫内膜癌病理分期的评估价值

目的联合使用国际子宫内膜肿瘤分析（IETA）经阴道常规超声与超声造影评估子宫内膜癌（EC）患者肌层浸润深度及宫颈有无侵犯，预测EC的病理分期；比较此2种方法的诊断价值。 方法将南方医科大学深圳医院及中山大学附属第七医院2017年1月至2020年12月间83例已手术的EC患者纳入研究，所有患者术前1个月内均行经阴道常规超声及超声造影检查，由2名具有10年以上妇产超声工作经验的超声医师，掌握IETA专家小组拟定的子宫内膜病变共识的具体内容，对所有入组病例的常规超声及超声造影图像进行盲法分析，以病理结果为参考，比较分析常规超声主、客观测量法及超声造影主、客观测量法对EC病理分期的诊断符合率，采用Kappa检验分析超声与病理结果的一致性。同时采用受试者操作特征（ROC）曲线分析超声客观测量方法对EC深肌层浸润及宫颈有无侵犯的诊断效能。 结果本研究发现IETA专家共识总结的子宫内膜厚度、病灶回声、宫腔线的形状、子宫内膜-肌层交界处（结合带）情况、无“亮边”征及子宫内膜病灶血管模式在不同病理分期的EC中，均有较高的特异度及一致性，是预测EC较好的超声指标。超声造影主观评估法（Kappa=0.873，P＜0.001）、超声造影客观测量法（Kappa=0.842，P＜0.001）、IETA常规超声主观评估法（Kappa=0.811，P＜0.001）、IETA常规超声客观测量法（Kappa=0.764，P＜0.001）此4种诊断方法与病理结果一致性均良好，超声造影较常规超声对EC病理分期的诊断符合率有一定程度的提高［主观评估法、客观评估法：（90.36%、87.95%） vs（85.54%、81.93%）］。常规超声或超声造影显示病灶前后径、病灶的体积、病灶与子宫前后径的比值对预测EC深肌层浸润（浸润深度≥1/2）均有较好的诊断效能，ROC曲线下面积（AUC）均≥0.945，常规超声或超声造影显示病灶外缘与浆膜层的最小距离评估法诊断效能较差，AUC仅为0.414、0.462。常规超声或超声造影显示病灶下缘与宫颈外口距离评估法对预测EC有无宫颈侵犯的诊断效能一般，AUC为0.521、0.559。 结论IETA经阴道常规超声声像特征与超声造影对EC的诊断及预测病理分期均具有较好的效果，且对超声术语进行规范化描述，临床上值得推荐使用。超声造影较经阴道常规超声的诊断效能有一定程度提高，能更好地显示病变对周围肌层及宫颈的浸润深度、侵犯范围；超声造影联合经阴道常规超声，可能达到EC早期发现、准确分期、早期治疗的目的。     

超声辐照联合双自杀基因慢病毒载体微泡对宫颈癌细胞的杀伤效应

目的： 探讨超声辐照联合双自杀基因慢病毒载体微泡对宫颈癌细胞的体外杀伤效应,为宫颈癌的靶向基因治疗奠定基础。方法：构建双自杀基因慢病毒载体pLenti6-KDRP-CD/TK-EGFP,转染293T细胞并计算病毒滴度,与声诺维微泡混悬液混匀孵育,测定其包封率和载药量。运用载药微泡对宫颈癌HeLa细胞进行干预,试验设空白对照组、慢病毒组、慢病毒载体微泡组、慢病毒载体微泡联合超声辐照组,分别使用4种超声声强 (0.25、0.5、1.0、2.0 W/cm2) 300 kHz,辐照30 s。应用四甲基偶氮唑盐 (MTT)比色实验和流式细胞仪检测各组干预方法对癌细胞增殖和凋亡率的影响。结果：荧光显微镜下可观察到EGFP的表达,说明载体构建成功,转染后获得病毒滴度为3.5×1012 pfu/L,包封率为90.6％±3.1％,载药量为29.2％±0.9％。MTT检测发现与空白对照组比较,慢病毒组、慢病毒载体微泡组、不同超声声强+慢病毒载体微泡组对细胞增殖均有明显抑制作用 (P<0.05或P<0.01),随着超声辐照声强的增加,癌细胞的抑制率逐步增高 (P<0.05),但2.0 W/cm2组与1.0W/cm2组相比抑制率无明显差异 (P>0.05);各组抑制作用于24 h后均有所下降 (P均<0.05),48 h组与24 h组比较抑制作用无明显变化 (P>0.05)。通过流式细胞术检测发现与空白对照组比较,各干预处理组对HeLa细胞的凋亡作用均显著升高 (P均<0.05);运用超声辐照后,其凋亡率升高趋势更为显著 (P<0.01)。结论：双自杀基因慢病毒载体对宫颈癌HeLa细胞具有显著的杀伤效应;联合超声辐照其载药微泡的杀伤效应可明显增强,具有协同作用。