不同温度下体外大鼠睾丸支持细胞胶质细胞源性神经生长因子的表达

目的:通过观察不同温度下体外大鼠睾丸支持细胞(Sertoli cell,SC)胶质细胞源性神经生长因子(GDNF)表达特点,探讨高温致不育的机制。方法:采用组合酶消化法和选择性贴壁法分离雄性Wistar大鼠睾丸SC,将分离的SC分别置于不同温度进行体外培养,观察其贴壁、形态学变化,FasL免疫组化鉴定。实验分为对照组(35℃)、实验组(36℃、37℃、38℃、39℃)。CCK-8法检测SC增殖情况,HE染色观察细胞形态及结构,RTPCR、免疫荧光及Western印迹检测细胞GDNF的表达。结果:本实验条件下,体外分离培养SC纯度=(95.30±2.15)%(n=10),CCK-8实验结果显示,36℃时细胞增殖率最高(P0.01),36℃时,随着温度的提高,增殖率逐渐降低,39℃对细胞增殖具有明显抑制作用(P0.01);免疫荧光结果显示,GDNF表达于SC胞质,36℃时荧光最强,RT-PCR及Western印迹检测结果显示,高于36℃时,GDNF mRNA及蛋白的表达随着温度的增加而降低,36℃、37℃、38℃、39℃4组与对照组比较,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:不同温度下,体外培养SC的增殖能力和GDNF表达明显不同。36℃时,随着温度的提高,增殖能力受到抑制,GDNF表达水平显著降低。本研究结果证实,高温下大鼠睾丸SC正常功能受到抑制,从而影响生精功能。     

双酚A对大鼠睾丸支持细胞糖代谢的影响

目的:观察不同浓度双酚A(BPA)对原代培养大鼠睾丸支持细胞(SC)糖代谢及乳酸脱氢酶(LDH)表达的影响,探讨BPA致男性不育的机制。方法:采用两步酶消化法分离雄性Wistar大鼠睾丸SC,建立SC原代培养模型,免疫组化鉴定Fas L。传代后SC随机分为对照组和实验组(100 nmol/L、10μmol/L和1 mmol/L BPA)。培养48 h后,CCK-8法测定细胞增殖活性,核磁共振波谱法测定细胞内代谢物浓度,RT-PCR及Western印迹检测LDH的表达。结果:体外分离培养SC的纯度为(96.05±1.28)%(n=10),CCK-8实验结果显示:与对照组相比,暴露于100 nmol/L BPA组[(98±8)%]、10μmol/L BPA组[(96±3)%]和1 mmol/L BPA组[(95±3)%]的细胞增殖率无明显变化(P0.05);核磁共振波谱显示:与对照组相比,10μmol/L和1 mmol/L BPA作用下SC内葡萄糖及乳酸浓度明显降低(P0.05);RT-PCR及Western印迹结果显示:LDH mRNA的表达随BPA浓度升高呈现降低趋势(100 nmol/L、10μmol/L及1 mmol/L组P均0.05),而LDH蛋白的表达只在1 mmol/L组明显降低(P0.05)。结论:较高浓度BPA降低LDH,影响SC糖代谢过程。推测BPA通过影响SC糖代谢,减少向生殖细胞乳酸的供给,影响精子发生过程。