血管发生和血管新生的体外模型

血管发生（ｖａｓｃｕｌｏｇｅｎｅｓｉｓ）和血管新生（ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ）是新血管形成的最基本过程 ［１］。为探讨血管发生与血管新生的调控机理 ,评价各种因子和药物对血管形成的影响 ,可通过体内外模型。本文重点介绍研究血管发生和新生的体外模型。目前应用较多的为 ,内皮细胞（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌ,ＥＣ）的增殖试验 ,ＥＣ的迁移试验。前者通过定量 ３Ｈ -胸腺嘧啶掺入内皮细胞的ＤＮＡ测定放射活性评价细胞增殖 ,也有用比较前后细胞计数评价细胞增殖 ;迁移实验较多利用标准或改良的Ｂｏｙｄｅｎ盒的方法 ,此盒…     

体外诱导小鼠胚胎干细胞血管形成

目的探讨体外定向诱导胚胎干细胞向内皮细胞分化的条件,模拟体内血管生成和血管新生过程,为研究新血管的形成提供一种新思路。方法体外培养小鼠胚胎干细胞诱导形成胚胎小体,将11 d的胚胎小体种植到胶原中诱发出芽性血管新生;通过免疫组织化学染色方法检测胚胎小体及其出芽向内皮细胞和功能血管的分化。结果胚胎干细胞在体外能自发形成胚胎小体,其内部含有血管样结构,并伴有平滑肌的分化;种植到胶原中的胚胎小体能再现出芽性血管新生。结论胚胎干细胞存体外不但能定向分化成内皮细胞,还能再现体内血管生成、血管新生及动脉生成过程。     

不同加工方法对明党参主要化学成分的影响

目的 比较分析不同加工方法明党参化学成分含量的变化,探究明党参最佳加工方法.方法 采用紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法等方法测定不同加工方法明党参水溶性浸出物、多糖、胆碱、总香豆素、甘露醇、总氨基酸和L-天门冬酰胺的含量,结合性状等因素综合考察明党参最佳加工方法.结果 明党参经过水煮后干燥时间减少,药材外观明亮、性...     

改良三维条件下人胚胎干细胞向内皮细胞的分化及功能

目的建立一种改良的三维分化无血清方法,对人胚胎干细胞(hESCs)向内皮细胞进行分化,并对这种方法得到的人胚胎干细胞来源内皮细胞(hESC-ECs)进行功能检测。方法在低附着培养皿中培养未分化的H9 hESCs12 d,使其形成类胚体(EBs),12 d后将已形成的EBs收集起来,用浓度为1.5 mg/ml的Ⅰ型鼠尾胶原重悬,加入六孔板中,在37℃待胶原凝固后加入EGM-2培养基培养3 d,获得出芽类胚体后用0.25%胶原酶Ⅰ和0.56 U/ml LiberaseBlendzyme消化芽生类胚体各20 min,采用流式技术分选出其中CD31阳性的细胞,并用乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL)摄取实验和成管实验验证这部分细胞的内皮细胞功能。结果建立了一种基于胶原培养环境的三维分化方法,采用这种方法能够将hESCs向内皮细胞分化的效率提高到18%,最终获得的hESC-ECs具有和人脐带静脉内皮细胞(HU-VECs)相似的细胞表面标志物,并在乙酰化LDL吞噬实验和血管新生实验中表现出良好的内皮细胞功能。结论建立的改良三维分化方法能够明显提高hESCs向内皮细胞的分化效率,是一种简单高效的分化方法,同时无血清培养方法为将来hESC-ECs的临床应用提供了可能。     

认证后零售药店存在问题与对策

对零售药店实施GSP认证，是国家为保证药品质量、规范经营行为而采取的一种强制性手段，对于增强经营者的法律意识，规范药品经营行为，提高管理水平有很大的促进作用。但是通过GSP认证跟踪检查，笔者也发现了许多不容忽视的问题。     

脐血血管内皮祖细胞的分离和诱导分化

目的 从脐血中分离内皮祖细胞，诱导其向内皮细胞分化，研究内皮祖细胞的生物学特性和诱导分化条件。方法 从新鲜脐血中纯化的CD133^ 细胞接种于添加了VEGF、bFGF、IGF—1的M199培养液中，观察梭形贴壁细胞的出现时间和特异性细胞标志。结果 培养3—4d可观察到梭形贴壁细胞，14d左右可形成索条状结构，贴壁细胞表达血管内皮细胞特异性标志VE-cadherin,vWF,UEA-1和VEGFR-2。结论 脐血中含有内皮祖细胞，在一定的条件下，可分化为内皮样细胞。     

血小板内皮细胞黏附分子的剪接体在胚胎干细胞血管形成过程中的表达

目的探讨血小板内皮细胞黏附分子(PECAM)1的剪接体在胚胎干细胞分化过程中的表达规律。方法体外培养胚胎干细胞,在细胞因子的作用下形成胚胎样小体(EB);然后将EB种植到胶原中,在细胞因子的作用下诱导出芽性血管新生。分别利用免疫组织化学、流式细胞术、逆转录聚合酶链反应等方法检测胚胎干细胞及其分化过程中PECAM1、Oct4及胚胎阶段特异性抗原(SSEA)1的表达。应用克隆分析的方法检测不同的PECAM1剪接体在EB形成和出芽性血管新生过程中的表达分布。     

G-CSF动员骨髓干细胞向缺血-再灌注肾脏归巢并促进肾脏修复的研究

目的 观察粒细胞集落刺激因子(G-CSF)是否可以有效动员骨髓干细胞进入外周血并向缺血-再灌注损伤肾脏归巢,提高肾脏修复的效能.方法 6周龄全身表达绿色荧光蛋白(GFP)的C57BL/6J转基因小鼠提供骨髓,6～8周龄同种无荧光标记的C57BL/6J小鼠20只作为骨髓受体.骨髓移植前,受体小鼠接受致死剂量的γ放射线137Cs照射,骨髓重建情况经流式细胞仪检测确认.骨髓重建完毕后所有小鼠均接受单侧肾脏缺血-再灌注损伤.实验动物分组:(1)对照组(n=10),术前3d至术后4d,皮下注射生理盐水,0.2 ml/d.(2)动员组(n=10),术前3d至术后4d,皮下注射人重组粒细胞集落刺激因子200μg/(kg·d).干细胞动员效果及向肾脏归巢情况经流式细胞仪检测鉴定.损伤1周后取肾脏标本行HE染色,评估肾小管损伤程度.损伤4周后通过组织切片免疫荧光组织化学方法观察并计数血管内皮细胞数.实验数据中计量资料以均数±标准差((x-)±s)表示,两组计量资料之间比较采用独立样本t检验.结果 G-CSF动员后,分别为Sca-1、c-Kit、CD29、CD34阳性的四群干细胞占外周血非红系细胞的比例均高于对照组(P＜0.05).损伤1周后,G-CSF动员组的缺血侧肾脏中,骨髓来源并且分别表达Sca-1、c-Kit、CD34的干细胞的比例均高于对照组(P＜0.05);肾小管损伤程度评分分值低于对照组(P＜0.05).损伤4周后动员组的肾脏中CD31阳性的内皮细胞数目高于对照组(P＜0.05).结论 (1)G-CSF可以有效动员骨髓干细胞进入外周血并向缺血肾脏归巢;(2) G-CSF动员可以提高肾脏修复的效能,减轻肾脏组织病理学损伤程度.     

Livin靶向ASODN对前列腺癌PC3细胞生物学特性的影响

目的：合成Livin靶向的反义核苷酸（ASODN）,观察其对前列腺癌PC3细胞凋亡和增殖等生物学特性的影响。方法：合成全硫代磷酸化修饰的LivinASODN并通过脂质体转染前列腺癌PC3细胞。采用MTT法检测其对细胞增殖的影响,采用RT—PCR检测转染后Livin基因mRNA的表达情况,采用流式细胞仪检测转染后细胞的凋亡效应,采用体内成瘤实验比较细胞在裸鼠体内成瘤性的变化,采用激酶法测定Caspase-3活性的变化。结果：LivinASODN转染PC3细胞后,与对照组相比,实验组细胞内LivinmRNA的表达水平下调（P〈O．01）;细胞的增殖受到显著抑制（P〈O．01）;细胞凋亡率明显增高（P〈O．01）;肿瘤细胞在荷瘤鼠体内的成瘤体积小于对照组（P〈O．05）;Caspase-3活性明显增加（P〈0．05）。结论：靶向Livin基因的ASODN干扰了前列腺癌PC3细胞中Livin基因的表达,抑制了细胞的增殖并诱导其凋亡,延缓了肿瘤细胞的生长。     

分子影像学方法示踪胚胎干细胞移植治疗急性肝损伤

背景：胚胎干细胞具有多向分化潜能,已被用于急性肝损伤的治疗,但其在体内治疗过程中的增殖迁移情况尚不清楚。目的：利用分子影像技术监测移植胚胎干细胞在急性肝损伤修复过程中的行为。方法：利用慢病毒载体,将萤火虫荧光素酶、红色荧光蛋白以及单纯疱疹病毒胸苷激酶三融合基因转入小鼠胚胎干细胞（D3）中,筛选得到稳定整合3个报告基因的D3胚胎干细胞系。将上述胚胎干细胞或分化了6d的拟胚体细胞通过脾脏注射到急性肝损伤SVl29模型小鼠体内,利用生物发光成像技术监测移植的细胞。结果与结论：RT-PCR结果显示,三融合基因的转入并未影响胚胎干细胞Oct-4和Nanog的表达。利用小动物活体成像系统可以观察到移植细胞从脾脏迁移到肝脏的过程。移植的胚胎干细胞和拟胚体细胞都在肝脏处形成畸胎瘤,由于单纯疱疹病毒胸苷激酶同时也是自杀基因,可以与更昔洛韦作用诱导转基因细胞死亡,通过注射更昔洛韦来抑制畸胎瘤的生长并逐步将其杀死。组织学分析显示,畸胎瘤里包含来自于3个胚层的组织。提示三融合基因的转入并未影响胚胎干细胞的多向分化潜能,且胚胎干细胞用于细胞治疗有潜在的成瘤风险,影响了对肝损伤的修复,治疗策略有待进一步改进,并需要实时监控其在体内的行为。