家蝇抗真菌肽MAF-1原核表达条件优化及活性验证

目的 优化家蝇抗真菌肽(MAF-1)原核表达条件及重组蛋白的活性验证。方法 利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Quantity One凝胶电泳图像分析系统研究不同的诱导温度、异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导浓度和诱导时间对融合蛋白表达的影响;融合蛋白用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行蛋白纯化,切除His标签后进行活性验证。结果 在加入浓度为25μmol/L的IPTG,34℃诱导18 h,融合蛋白的表达量最高;融合蛋白纯化后浓度为0.706 mg/mL,其最低抑杀白色念珠菌的浓度为70μg/mL。结论 成功获得重组融合蛋白的最佳表达条件,并纯化目的蛋白,切除His标签后的目的蛋白具有抗真菌活性。     

家蝇热休克蛋白HSP20基因克隆、表达和序列分析

目的对家蝇热休克蛋白20(HSP20)基因进行生物信息学分析, 并进行克隆、表达研究。方法利用美国国家生物技术信息中心和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统中有关基因和蛋白序列的分析工具, 结合其他生物信息学分析软件包, 从GenBank上家蝇基因组序列识别出编码HSP20的基因, 分析预测该蛋白质的结构功能;设计引物PCR扩增HSP20基因, 将其克隆到原核表达质粒PEASY-E1中, 重组质粒在大肠杆菌OrigmiB/DE3中经用异丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达, 表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。结果HSP20基因序列全长865bp, 最大开放阅读框(ORF)为567bp, 编码188个氨基酸, 理论分子量为21443.2 Da, 等电点为5.96;所构建的重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定成功;SDS-PAGE分析结果显示, 重组质粒在OrigmiB/DE3中表达并纯化, 得到的融合蛋白相对分子质量约为21443.2 Da, 诱导12 h蛋白表达量最高, SDS-PAGE法得到的蛋白条带与目的蛋白大小相符。结论成功构建PEASY-E1-HSP20重组原核表达质粒并表达出融合HSP20蛋白, 为进一步研究该蛋白的功能奠定基础。     

内镜全层切除术治疗胃黏膜下肿瘤的临床效果分析

目的研究内镜下全层切除术(EFTR)在治疗胃黏膜下肿瘤(SMT)中的临床价值。方法回顾性分析2015年12月-2017年6月宿州市第一人民医院应用EFTR治疗的52例胃SMT的临床资料,统计手术成功率、SMT完整切除率,记录手术时间;观察患者术后有无出血、穿孔等并发症;术后内镜随访,评估患者术后创面愈合及病变残留、复发情况。结果运用EFTR成功剥离52例患者合计53枚SMT,手术时间35.0～78.0 min,平均45.2 min,手术成功率100.0%,肿瘤完整切除率100.0%,肿瘤直径大小为1.0～3.2 cm,平均1.5 cm。病灶位于贲门下23枚(43.4%),胃底17枚(32.1%),胃体10枚(18.8%),胃窦2枚(3.8%),胃角1枚(1.9%);术中2例患者发生动脉性出血(3.8%),应用热活检钳止血成功。术后随访3～6个月,所有病例创面愈合良好。术后石蜡病理诊断结果为间质瘤36枚(67.9%),平滑肌瘤15枚(28.3%),异位胰腺2枚(3.8%)。术后无迟发性出血及迟发穿孔发生。52例患者术后3～6个月复查胃镜,病灶均完全消失,术后创面愈合良好,治疗有效率为100.0%(52/52)。结论 EFTR治疗胃SMT是一种安全、有效的临床技术。     

罕见腹膜后坏死性筋膜炎1例报告

腹膜后坏死性筋膜炎是一种罕见疾病,可能致命的感染并发症。早期诊断至关重要[1-2]。腹膜后坏死性筋膜炎为肛周脓肿的严重并发症,临床表现最初为会阴部局部的肿胀疼痛,迅速蔓延至肛周、腹壁、进一步导致全身感染、中毒性休克,危及生命[3-4]。现将笔者单位收治的1例肛周脓肿并发坏死性筋膜炎病例报告如下。     

开放无张力疝修补与腹腔镜疝修补治疗成人原发性腹股沟疝的临床效果比较

目的 探究开放无张力疝修补与腹腔镜疝修补治疗成人原发性腹股沟疝的临床效果.方法 回顾性分析2017年1月～2018年12月宿州市第一人民医院收治的64例原发性腹沟股疝患者的临床资料,按照治疗方法的不同分为A组(34例)和B组(30例).A组行开放小切口无张力疝修补术组(Lichtenstein术),B组行腹腔镜疝修补术...     

家蝇溶菌酶MDLZM基因克隆、表达和序列分析

目的 探讨家蝇溶菌酶(MDLZM)基因及编码的蛋白质结构和特征。 方法 利用美国国家生物技术信息中心和瑞士生物信息学研究所的蛋白分析专家系统中有关基因和蛋白序列的分析工具, 结合其他生物信息学分析软件包, 从GenBank上家蝇基因组序列识别出编码MDLZM的基因, 分析预测该蛋白质的结构功能;设计引物PCR扩增MDLZM基因, 将其克隆到原核表达质粒PEASY-E1中, 重组质粒在大肠杆菌中的表达产物用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定。结果 MDLZM基因序列最大开放阅读框(ORF)为435 bp, 编码145个氨基酸, 理论分子量为15 958.4 Da, 等电点为8.65;构建的重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定确为MDLZM基因;SDS-PAGE分析结果显示, 重组质粒可在大肠杆菌OrigmiB/DE3中表达, 表达产物纯化后得到的融合蛋白相对分子质量约为15958.4 Da, 诱导18 h蛋白表达量最高, SDS-PAGE鉴定得到的蛋白条带与目的蛋白大小相符。结论 成功构建PEASY-E1-MDLZM重组原核表达质粒并表达出融合MDLZM蛋白。