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目的 探讨阻断Kupffer细胞(Kupffer cells,KCs)T细胞免疫球蛋白黏蛋白4(T-cell immunoglobulin and mucin-domain-containing molecule 4,TIM-4)诱导小鼠原位肝移植术后iTreg细胞的产生及其相关机制.方法 建立小鼠原位肝移植急性排斥反应模型,分为sham组、control mAb组、TIM-4 mAb组.流式细胞仪检测KCs活化,Western blot检测肝脏TIM-4表达,TUNEL检测肝细胞凋亡指数(apoptotic index,AI).提取KCs,激光共聚焦检测KCs TIM-4表达,将KCs和提取的初始CD4+T细胞进行共培养,激光共聚焦检测Kupffer细胞TIM-4表达,分为control组、control mAb组以及TIM-4 mAb组;CFSE检测CD4+T细胞增殖,流式细胞仪检测CD4+ CD25+ Foxp3+T细胞,ELISA检测IL-4、IL-6、IL-13水平,Western blot检测STAT6表达.建立小鼠移植模型,分为3组:iTreg组移植模型注入iTreg细胞(预先用TIM-4 mAb处理的TIM-4+ KCs与初始CD4+T细胞共培养所诱导),sham组和单纯肝移植组(LT)注入相应的PBS作为对照,检测各组AST、ALT、TBIL水平,HE染色评价肝组织排斥活动指数(rejective activity index,RAI),观察小鼠生存率.结果 肝移植术后24、48、72 h KCs的活化分别为15.9%、21.6%、28.3%,术后1、3、7 dTIM-4蛋白表达水平明显高于sham组(P<0.05);control mAb组AI值(29.23 ±2.56)明显高于sham组和TIM-4 mAb组[(0.40±0.49),(11.04 ±2.28),P<0.05].KCs与CD4+T细胞共培养后,control、control mAb以及TIM-4 mAb组CD4+T细胞的增殖率分另别为32.5%、31.6%、17.2%,CD4+ CD25+ Foxp3+T细胞分化分别为12.4%、13.9%、28.1%,共培养上清液TIM-4 mAb组IL-4、IL-6、IL-13分泌水平明显低于control mAb (P<0.05),且加入TIM-4 mAb明显降低了与TIM-4+ KCs共培养的CD4+T细胞p-STAT6蛋白表达(P<0.05),外源性加入IL-4可明显增高CD4+T细胞p-STAT6蛋白的表达(P<0.05).移植模型注入iTreg细胞,iTregz组肝功指标明显好转,与LT组比较差异有统计学意义(P<0.05).肝组织病理学检查,iTreg组RAI平均得分为(3.97±0.67),明显低于LT组[(8.47±0.90),P<0.05],且iTreg组小鼠平均存活时间延长.结论 阻断KCs TIM-4能够抑制初始CD4+T细胞IL-4/STAT6信号通路的激活,从而诱导更多iTreg细胞的生成,致使宿主对移植物产生免疫耐受. 相似文献
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目的通过高强度聚焦超声不完全消融筛选残留肝癌细胞,探讨其生物学行为改变及对血管形成的影响。方法在声功率5 W下,获得高强度聚焦超声辐照肝癌细胞的温度-时间关系,在某一温度下筛选出高强度聚焦超声不完全消融最佳肝癌细胞亚系并继续培养获得稳定子代。细胞活性实验检测细胞增殖率及热耐受性;划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测迁移和侵袭能力;观察内皮细胞管腔形成的变化。结果随着高强度聚焦超声照射时间增加,温度增加,细胞死亡率增加,在48℃及以上温度肝癌SMMC7721细胞基本全部死亡,而47℃筛选出的SMMC7721肝癌细胞亚系增殖率、热耐受性较正常肝癌细胞增强(P<0.05),运动能力、侵袭能力无明显变化(P>0.05);并能促进内皮细胞增殖、迁移和管腔形成(P<0.05)。结论高强度聚焦超声能够杀灭肿瘤细胞,然而高强度聚焦超声不完全消融会促使肝癌细胞生物学行为转变并能促进血管形成。 相似文献
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目的 探讨腹腔镜胆总管探查术(LCBDE)术后一期缝合治疗肝硬化合并胆管结石的疗效及其影响因素。方法 回顾性分析2020年3月至2022年3月遂宁市中心医院肝胆外科收治并手术的肝硬化合并胆管结石的患者124例,按随机数字表法将所有患者分为对照组62例和研究组62例。两组均行LCBDE术,对照组术后进行T管引流,研究组术后一期缝合,观察两组患者围术期指标、术后并发症发生情况、术后24 h采用疼痛视觉模拟量表(VAS)评分,logistic回归分析术后效果不良的影响因素。结果 两组术中出血量比较差异无统计学意义(P>0.05),研究组引流时间为(4.95±0.22)d,长于对照组的(4.42±0.26)d(P<0.05),手术时间和住院时间为(90.16±8.12)min和(5.19±1.16)d,短于对照组的(99.22±9.14)min和(7.62±1.26)d(P<0.05)。研究组患者术后并发症发生率为11.29%(7/62),对照组患者术后并发症发生率为9.68%(6/62),差异无统计学意义(P>0.05)。研究组术后VAS评分为(3.08±0.22)分... 相似文献
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目的 探讨肝细胞癌(HCC)患者血清miRNA-24(miR-24)和miRNA-509(miR-509)的表达及临床意义。方法 选取2019年1月—2020年10月就诊于四川省遂宁市中心医院的HCC患者94例(HCC组),另选择同期体检中心健康体检者90例(对照组),采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测人肝癌细胞系及两组入组对象血清中miR-24、miR-509表达水平,探讨miR-24、miR-509水平与HCC临床病理特征及预后的相关性。结果 HCC组患者血清中miR-24表达量明显高于对照组(3.19±0.29vs. 0.66±0.20)(t=-68.601,P<0.01),miR-509表达量明显低于对照组(0.74±0.27vs. 1.24±0.28)(t=12.331,P<0.01)。血清中miR-24表达量与甲胎蛋白(AFP)水平、是否转移、TNM分期呈正相关(r=0.821、0.510、0.762,P<0.01),与分化程度呈负相关(r=-0.771,P<0.01)。血清中miR-509表达量同AFP水平、是否转移、TNM分期呈负相关... 相似文献
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目的:探讨外源性注射骨髓来源的血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)或基质细胞源性因子-1α(stro-mal derived factor-1 alpha,SDF-1α)或两者联合,比较性评估3种方法对大鼠肝移植术后缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)的影响。方法:LEWIS大鼠骨髓EPCs提取培养,流式表型鉴定,激光共聚焦功能鉴定;建立大鼠原位肝移植模型,随机分为5组:A组(假手术组),B组(手术组),C组(SDF-1α组),D组(EPCs组),E组(SDF-1α+EPCs组);再灌注12 h后处死各组大鼠,免疫组化检测肝组织再生以及肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)的表达情况;WB检测肝组织血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、HGF、转化生长因子-β(transforming growth factor-beta,TGF-β)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)蛋白表达;ELISA检测VEGF、HGF、TGF-β表达。结果:LEWIS大鼠骨髓提取的EPCs CD34、CD133的阳性比例分别为78.32%、70.76%,同时具有结合ac-LDL和UEA-1功能的EPCs,阳性率达80%以上;SDF-1α诱导EPCs穿过的细胞数[(79.6±6.3)个]明显高于对照组[(36.2±2.9)个](P=0.000);各组大鼠肝组织中,C、D组肝组织HGF分泌和再生情况免疫评分明显高于A、B组(P=0.000),E组免疫评分明显高于C、D组(P=0.000);各组VEGF、HGF、TGF-β、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达结果,C、D组VEGF、HGF、TGF-β、Bcl-2蛋白表达明显高于A、B组(P=0.000),E组VEGF、HGF、TGF-β蛋白表达明显高于C、D组(P=0.000),而C、D、E组Bcl-2蛋白表达比较差异无统计学意义。B、C、D组Caspase-3蛋白表达明显高于A组(P=0.000),而E组Caspase-3蛋白明显低于C、D组(P=0.000);ELISA结果与Western blot结果一致。结论:外源性联合应用EPCs和SDF-1α能有效保护肝移植缺血再灌注的损伤,诱导肝细胞再生,减少肝细胞凋亡。 相似文献
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目的介绍对完全腹腔镜联合胆道镜保胆取石术的手术技巧的改进,并探讨其临床效果。方法回顾性分析我院2016年6月~2018年3月行改良法保胆取石术的112例患者的临床资料,并与2014年1月~2016年8月行常规保胆取石术的20例患者和2018年1月~2018年3月在日间手术病房行LC手术的112例患者的临床资料进行比较。结果手术时间比较:技术改良组和LC组短于保胆取石组(P0.05),而技术改良组与LC组比较无明显差异(P0.05)。术中出血量比较:技术改良组明显少于保胆取石组和LC组(P0.05),而保胆取石组和LC组比较无明显差异(P0.05)。术后住院时间比较:技术改良组和LC组短于保胆取石组(P0.05),而技术改良组和LC组两组间比较无明显差异(P0.05)。复发率比较:技术改良组(1.8%)低于保胆取石组的10%(P0.05)。结论全腹腔镜联合胆道镜保胆取石术具有手术时间短、术后住院时间短的优点;其手术时间与LC手术近似。保胆取石手术进行技术改进后可以提高患者和外科医师对该手术的接受度,有利于临床推广;但其远期的复发率尚在观察中,因此严格掌握适应证是其合理应用的关键。 相似文献
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目的 研究经门静脉CTLA4Ig、IDO基因共转染对大鼠肝移植后免疫耐受的影响.方法 建立大鼠肝移植模型,将40只大鼠分为4组:CTLA4Ig-IDO组、CTLA4Ig组、IDO组、对照组.术后14 d处死5只大鼠并收集标本检测各组白细胞介素(IL)-2、IL-4、IL-10、转化生长因子-β(TGF-β)、γ-干扰素(IFN-γ)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红集(TBIL)水平及T细胞凋亡的程度.结果 术后14 d,CLTA4Ig-IDO组血清中的AST、ALT、TBLI水平明显低于其余3组(P<0.05).CTLA4Ig组、IDO组血清中的AST、ALT及TBLI水平均与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).对照组中IL-2、IFN-γ的mRNA及蛋白表达均高于CTLA4Ig-IDO组(P<0.05),IL-4、IL-10、TGF-β的mRNA及蛋白表达均低于CT-LA4Ig-IDO组(P<0.05).结论 CTLA4Ig-IDO基因共转染能够更加显著地改善肝移植后存活率及肝功能,并且能够通过诱导T细胞凋亡缓解急性排斥反应,形成肝移植免疫耐受. 相似文献
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