小鼠白细胞介素15慢病毒载体的构建和表达

目的：克隆小鼠白细胞介素15（IL-15）基因,并构建可表达小鼠IL-15基因的重组慢病毒。方法：根据小鼠IL-15基因序列以及慢病毒穿梭载体相应的酶切位点设计合成PCR引物;提取小鼠脾脏总RNA,逆转录PCR扩增小鼠IL-15基因的编码区;克隆小鼠IL-15基因的编码区,并进行基因测序;构建含有IL-15基因的慢病毒穿梭质粒,并与其它包装质粒一起感染293T细胞;获得病毒颗粒并感染人慢性髓系白血病细胞MEG,Western Blot检测IL-15基因在MEG细胞中的表达。结果：含有小鼠IL-15基因编码区的慢病毒穿梭质粒构建成功,基因测序结果完全正确;含有小鼠IL-15基因的慢病毒载体包装成功;所得病毒上清可成功感染MEG细胞,流式细胞术检测阳性率可达98%;Western Blot结果证明小鼠IL-15基因在MEG细胞中正常表达。结论：成功扩增、克隆了小鼠IL-15基因,并建立其慢病毒表达系统,从而为后续的基础及应用研究工作奠定了基础。     

辐照对水流动力学注射介导的小鼠体内基因表达的影响

目的探寻辐照对水流动力学注射（HGT）介导的荧光素酶报告基因在小鼠体内的表达影响,从而评估水流动力学注射方法在小鼠造血干细胞移植模型中应用的有效性。方法将实验鼠分为辐照组和非辐照组,尾静脉大体积快速注射带有荧光素酶报告基因的真核表达质粒PGL3-luc。于注射后6h腹腔注射荧光素酶底物,并通过活体动物体内光学成像系统检测基因表达的初始水平。将辐照组小鼠进行700c Gy非清髓性全身照射,并于水流动力学注射后12、24、48、72、96、120 h通过活体动物体内光学成像系统对两实验组小鼠体内目的基因的表达水平进行监测。结果通过尾静脉进行水流动力学注射的PGL3-luc质粒在注射后6h于小鼠肝脏大量表达,其平均表达水平为（3739±924.8）相对荧光单位（RLU）/（sec·mg）蛋白。在各个时间监测点辐照组与非辐照组相比实验鼠体内基因表达水平差异均有统计学意义（均P〉0.05）,其表达水平均于水流动力学注射72 h后显著降低。结论小鼠移植前的辐照预处理对水流动力学注射介导的基因在小鼠体内的表达并无影响,该种新型基因转移表达方法可以有效地应用于小鼠造血干细胞移植模型中。     

小鼠IL-1α多克隆抗体的制备及应用

目的:构建小鼠白细胞介素-1α原核表达载体,表达并纯化IL-1α蛋白,制备兔抗鼠IL-1α多克隆抗体,并对抗体特性进行初步的鉴定.方法:利用RT-PCR技术,从BALB/c小鼠脾脏cDNA中扩增出IL-1α的全长基因,酶切后连接至pET32a(+)原核表达载体,重组载体测序正确后转化至BL21( DE3)大肠杆菌.利用蛋白质原核表达自动诱导方案成功表达重组蛋白.重组蛋白经电洗脱纯化后用以免疫新西兰大白兔,获得了抗小鼠IL-1α的多克隆抗体,ELISA检测抗体效价.Western blot和流式细胞术(FCM)检测抗血清的特异性.结果:成功构建了重组表达载体pET32a(+)-IL-1α,表达的重组蛋白纯化后免疫新西兰大白兔,得到的多克隆抗体ELISA显示抗体效价可达1∶25 600.Western blot和FCM分析该抗体能特异性结合IL-1α.结论:利用重组的IL-1α蛋白成功制备了高效价、高特异性的兔抗IL-1α抗体,为进一步研究IL-1α的生物学功能奠定了基础.     

供体NK细胞对非清髓异基因造血干细胞移植受体异基因反应的抑制作用

<正>异基因造血干细胞移植(allogeneic hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)可以彻底治愈恶性血液病,且复发危险小。但allo-HSCT存在发生移植物抗宿主病及移植排斥反应的风险,临床上主要采用清髓照射及非特异性免疫抑制剂来应对,但部分患