可视化血红素加氧酶-1小鼠模型用于药物肝毒性评价

目的 建立实时动态监测药物肝毒性小鼠模型,用于药物肝毒性临床前评价.方法 通过水动力高压转染法将表达萤火虫荧光素酶的血红素加氧酶-1(HO-1)报告基因质粒转染到小鼠肝细胞中,建立HO-1-Luc小鼠模型.使用HO-1-Luc小鼠模型动态监测对乙酰氨基酚(APAP)导致的肝损伤以及抗氧化剂谷胱甘肽对药物性肝损伤的治疗效...     

聚合酶链反应检测SEN病毒D和H亚型方法的建立及比较

SEN病毒(SENV)是新近发现怀疑与输血相关的non-A-E型肝炎有关的一种病毒.我们实验室首次证实在我国也存在SENV感染[1],为进一步了解其致病性,我们在前期工作的基础上,参考已发表的文献[2]及基因序列,建立了两种特异性检测SENV-D和SENV-H的套式PCR方法.     

SEN病毒D亚型中国株流行病学及序列变异

目的 了解SEN病毒D亚型中国株的流行病学特点及其进化地位。方法 分析已知的基因序列设计引物，建立半套式PCR检测方法，对58份献血者血清样本和25份non-A-E肝炎患者血清样本进行了SENV-D亚型的检测，并对部分阳性血清的PCR产物进行克隆测序。结果 无偿献血者中SENV-D亚型感染率为45％，在non-A-E肝炎患者中SENV-D亚型感染率为48％，两者间差异无显著性；但在无偿献血者中SENV-D亚型的阳性检出率大大高于国外报道。测序结果经BLASTP软件在GenBank中检索表明，各测序株均与已知的SENV-D株序列有很高的同源性，并在此基础上用MegAlign软件进行进化树分析。结论 建立的半套式PCR检测方法适用于SEN病毒D亚型检测；SENV-D亚型中国株之间以及与已发表的国外SENV-D株序列之间有变异。与无偿献血者相比，non-A-E肝炎患者血清SENV-D株无进化上的显著倾向性。在测序的部分ORFl序列中存在一个核苷酸高变区。     

HCV感染人LDLR转基因小鼠肝癌细胞的初步研究

近年来在研究HCV与易感细胞的相互作用中发现 ,血清中的HCV颗粒是与 β 脂蛋白或IgG结合形成复合物(HCV RNAcarryingmaterial,HCVrcm ) ,HCVrcm通过与细胞表面的脂蛋白受体分子结合进入细胞 ,这种复合物的形成有利于HCV与靶细胞的结合和HCV的持续感染。人低密度脂蛋白受体(hLDLR)是一种表达在细胞表面的脂蛋白受体分子 ,是HCV感染细胞的重要受体 ,它在介导LDL进入细胞的过程中同时将HCV带入胞内。HCV能感染人的肝脏细胞 ,但是不能感染小鼠的肝脏细胞 ,分析可能原因是小鼠的肝脏细胞表面的小鼠低密度脂基金项目 :国家自然科…     

腺病毒转染法构建表达乙型肝炎病毒核心蛋白小鼠肝癌细胞系及其在乙肝疫苗评价中的应用

目的 构建一种可高效表达乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)核心蛋白(HBc)C57BL/6小鼠来源肝癌细胞系,并以其作为靶细胞评价乙肝基因疫苗在C57BL/6小鼠体内所引起的HBc特异性细胞毒性T细胞(CTL)的活性.方法 以HBV全基因组为模板,采用PCR方法扩增HBc基因,插入AdEasy腺病毒穿梭载体,构建携带HBc蛋白的腺病毒穿梭载体AD-HBc,电转携带有腺病毒骨架质粒(Ad-Easy)的E.coli BJ5183感受态细胞,获得重组腺病毒质粒AD-CMV-HBc,经PmeⅠ线性化处理后转染HEK293细胞进行包装得到相关的重组腺病毒,再感染C57BL/6小鼠来源肝癌细胞系Hepa1-6.结果 成功构建表达HBc蛋白的重组腺病毒,在体外对Hepa1-6细胞的感染率几乎为100％,并且HBc蛋白得到高效表达.以此为靶细胞用于pVAX1-HBc基因疫苗免疫C57BL/6小鼠产生的CTL活性的体外检测.结论 我们成功构建HBc蛋白表达的靶细胞系,对研究乙肝病毒核心抗原(HBcAg)所引起的细胞免疫反应及乙肝发病机理等方面有重要意义.     

金纳米棒制备、修饰及与寡核苷酸适配子的耦联

目的金纳米棒的制备、修饰及与寡核苷酸适配子的耦联。方法利用种子调制生长法制备了金纳米棒,采用化学桥联方法对金纳米棒进行m-SH-PEG修饰及与靶向定位乳腺癌细胞的寡核苷酸适配子的耦联。结果成功制备了金纳米棒,以CTAB包裹的金纳米棒表面光滑、尺寸均一、分散性和稳定性良好;Zeta电位检测表明m-SH-PEG已成功修饰金纳米棒,琼脂糖电泳证实寡核苷酸适配子与金纳米棒成功耦联。结论成功地进行了金纳米棒的制备、修饰及与寡核苷酸适配子的耦联。     

T7 RNA聚合酶体外转录合成siRNA的方法

目的：建立一种应用T7 RNA聚合酶体外转录合成大量siRNA的方法。方法：以萤火虫荧光素酶为靶标，应用T7 RNA聚合酶体外转录合成siRNA，脂质体转染法将其导入HepG2细胞中，通过测定荧光素酶的量，评价siRNA对萤火虫荧光素酶基因表达的抑制作用。结果：合成了以萤火虫荧光素酶为靶标的siRNA，合成的siRNA能特异性地抑制荧光素酶基因的表达，抑制率为80％。结论：建立了一种经济简便的体外合成siRNA的方法。     

丙型肝炎病毒与宿主蛋白相互作用研究进展

宿主蛋白在丙型肝炎病毒(HCV)的复制、翻译以及致肝脏病变等过程中发挥着重要作用,本文就宿主蛋白与HCV 5′非编码区、3′编码区以及结构蛋白(核心蛋白C、包膜蛋白E1、E2)、非结构蛋白(NS3、NS4、NS5A和NS5B)之间的相互作用进行综述。     

脂联素对刀豆球蛋白A诱导小鼠免疫性肝损伤的保护作用

目的探讨脂联素(ADPN)是否对肝脏的免疫性损伤具有保护作用以及可能的作用机制。方法将小鼠ADPN基因高效表达载体导入小鼠体内,获得高血清ADPN模型小鼠(表达载体组),与导入空载体的对照小鼠(空载体组)同时静脉内注射刀豆球蛋白A(Con A),以诱导肝脏的免疫性损伤,测定不同时间点血清ALT浓度,并进行肝组织病理学检查(HE染色),观察两组小鼠肝脏损伤程度是否有差异。比较两组间血清TNFα浓度的不同,探讨可能的作用机制。结果表达载体组小鼠注射Con A后血清ALT水平的升高明显低于空载体组,差异有统计学意义(P<0.01),组织学检查也显示表达载体组小鼠的肝损伤明显低于空载体组。经统计分析表明,ALT水平与血清ADPN水平成负相关(r=-0.5034,P=0.0121)。表达组小鼠血清TNFα水平明显低于空载体组(P<0.01)。结论脂联素对Con A诱导的肝脏免疫性损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制TNFα的产生进而阻断肝细胞遭受免疫性攻击有关。