抗菌肽SMAP-29衍生物的原核表达及纯化

目的利用大肠杆菌表达系统表达具有抗菌活性的SMAP-29衍生物,一步亲和层析法进行纯化。方法化学合成经改造的抗菌肽SMAP-29衍生物,纸片扩散法检测抗菌活性后,人工并用合成抗菌肽SMAP-29衍生物基因序列,克隆到表达载体pTYB11上,转化大肠埃希菌BL-21（DE3）,酶切和测序鉴定后,用异硫代β—D-半乳糖昔（isopropyl β—D—thiogalactoside IPTG）诱导表达融合蛋白。经几丁质亲和层析柱纯化。结朵化学合成的抗菌肽SMAP-29衍生物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌具有一定的抑菌作用,SMAP-29衍生物的编码基因按正确方向和序列插入表达载体,融合蛋白的表达量达到大肠杆菌蛋白总量的40％,几丁质亲和层析后获得了可溶性SMAP-29衍生物。结论成功构建了以融合蛋白形式表达的抗菌肽SMAP-29衍生物大肠杆菌基因工程菌,克服了抗菌肽对宿主菌的毒性,实现了用大肠杆菌高效表达和一步亲和层析纯化,为进一步检测活性及临床应用奠定了基础。     

模拟微重力条件下体外培养神经细胞模型的初步建立

目的研究模拟微重力条件下构建新生大鼠神经细胞培养体系的方法。方法分离新生鼠海马区原代神经细胞，接种于Cytodex3型微载体，培养3d后转移入旋转细胞培养系统，用倒置显微镜和扫描电镜观察神经细胞在微载体上的生长情况，进行神经元细胞特异性烯醇酶的免疫组织化学染色，用Image-Pro Plus软件进行神经细胞胞体面积的测量。结果微重力条件下神经细胞在微载体上均匀分布，免疫组织化学结果显示神经元被染成棕色，其胞体面积较正常重力条件培养的神经细胞有显著增加（P〈0．01）。结论神经细胞可以在微重力条件下进行培养，这个体系的建立有着广泛的应用前景。