几种辐射致敏剂对γ线引起的哺乳物细胞DNA单链断裂及其重接修复的影响

用微孔滤膜过滤法从分子水平上比较了6种不同类型的辐射致敏剂对γ线引起的CHO细胞DNA单链断裂与重接修复的影响。观察到:5-溴尿嘧啶脱氧核苷能增加DNA单链断裂的产量;N-乙基马来酰亚胺和碘化钾能抑制DNA单链断裂的重接修复;阿的平这两种作用兼而有之;misonidazole仅在缺氧条件下才增加DNA单链断裂的产量并抑制重接修复,而在有氧时无效,随着misonidazole浓度的增加,致敏作用增强;放线菌素D在照射过程中对细胞DNA的单链断裂与重接修复无影响。     

不同周期的S-180V细胞DNA辐射损伤修复的比较

根据小鼠腹水瘤S-180 Ⅴ细胞的生长特点,设计了获取G_1、S、M期同步化细胞的方法,并用碱洗脱法对同步化细胞DNA单链断裂程度与重接修复速度进行了比较。观察到0～50Gyγ线照射范围内,不同周期细胞DNA单链断裂损伤无明显差别。30Gy照射后,不同周期细胞的断裂的DNA的修复速度不同,其中以S期重接修复速度最慢。     

两孔法腹腔镜下精索静脉曲张高位结扎术的应用

目的总结两孔法腹腔镜下精索静脉曲张高位结扎术的临床经验。方法回顾性分析28例两孔法腹腔镜下精索静脉曲张高位结扎术的疗效及恢复情况。结果28例手术均获成功,无并发症,平均手术时间32 min,术后住院2~3 d,术后随访7~40个月,无一例复发。结论两孔法腹腔镜精索静脉曲张高位结扎术创伤小,疗效好,恢复快,安全可靠,值得临床推广。     

胆囊嵌顿性结石并急性胆囊炎的腹腔镜手术160例分析

胆囊嵌顿性结石因胆囊颈管部的急慢性炎症使Calot三角解剖结构发生改变,从而成为腹腔镜胆囊切除术(LC)中最困难、最复杂的一种病变,即使开腹行胆囊切除术有时亦不得不采用胆囊部分切除的方法处理.现将2004年10月至2009年12月我科所行胆囊嵌顿性结石并急性胆囊炎LC的体会报道如下.     

抗肝癌细胞噬菌体单链抗体库的构建及筛选

构建抗人肝癌细胞单链抗体库 ,从中筛选与肝癌细胞特异结合的高亲和力单链抗体。从HepG2细胞免疫的BALB/c小鼠脾脏提取总RNA ,RT PCR扩增小鼠抗体重、轻链可变区基因 ,用 (Gly4Ser) 3 连接肽基因 ,经重叠延伸反应 ,在体外将VH 和VL 连接成单链抗体 (scFv)基因 ,并克隆入噬菌粒载体pCANTAB5E中 ,构建噬菌体单链抗体库。以HepG2细胞为抗原对抗体库进行淘选 ,ELISA法鉴定各单克隆与肝癌细胞的结合活性 ,并对阳性克隆进行表达。成功构建了库容为 1 1× 10 6抗肝癌细胞的噬菌体单链抗体库 ,经筛选得到了与HepG2细胞具有较强结合能力的单链抗体 ,实现了scFv在大肠杆菌中的可溶性表达。序列测定结果表明 ,VH 和VL 基因符合小鼠抗体可变区特征 ,scFv基因拼接正确     

O^6—甲基鸟嘌呤DNA—甲基转移酶活性的测定方法

O~6-甲基鸟嘌呤 DNA-甲基转移酶在哺乳动物细胞 DNA 烷化损伤的修复中起着重要作用。本文报道了以~3H-MNU(~3H-甲基亚硝脲)标记的小牛胸腺 DNA 为底物来检测 O~6-甲基鸟嘌呤 DNA-甲基转移酶的方法。该方法可用于哺乳动物细胞 DNA 损伤与修复的研究,并为有预见性地进行肿瘤选择性化疗提供了技术手段。     

重组人肝细胞生成素的理化性质研究

目的 :研究重组人肝细胞生成素 (hepatopoietin ,HPO)的理化性质。方法 :在大肠杆菌中表达的人HPO ,经凝胶过滤和离子交换柱层析进行纯化 ;通过还原型SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS PAGE)、非还原型SDS PAGE及基质辅助激光解析飞行时间质谱 (MAIDI TOF MS)等方法分别测定了人HPO的相对分子质量 ;采用等电聚焦电泳测定了人HPO的等电点 ;采用内源荧光光谱和圆二色光谱法研究了人HPO的稳定性。结果与结论 :复性后的重组人HPO主要以双体形式存在 ,其相对分子质量为 30 0 0 0 ,等电点在 5.2～ 6 .0之间。在 70℃以下、pH 2 .6以上 ,人HPO分子内部构象基本不变     

利用siRNA抑制HER-2表达的研究

目的利用siRNA抑制人乳腺癌MCF-7细胞中HER-2基因的表达。方法针对HER-2mR-NA设计了5条siRNA,并构建相应的表达质粒,将质粒转染MCF-7乳腺癌细胞,筛选稳定表达株,利用RT-PCR分析siRNA对细胞中HER-2mRNA的降解作用;利用流式细胞术分析细胞表面HER-2蛋白的表达;利用裸鼠进行体内成瘤性实验,用免疫组化法检测瘤组织中HER-2的表达。结果siRNA3P能明显降低MCF-7细胞中HER-2mRNA的丰度;流式细胞分析表明,其中siRNA2P和3P稳定转染的MCF-7细胞表面HER-2的表达明显降低;五种表达不同siRNA的MCF-7细胞在裸鼠体内的成瘤性均有所降低,并且瘤组织中HER-2蛋白的表达也明显减少。结论靶向HER-2mRNA的siRNA能在体内外有效抑制HER-2的表达,可用于乳腺癌的基因治疗。