霍乱弧菌单克隆抗体诊断应用的研究——Ⅱ.酶标霍乱弧菌单克隆抗体快速检测霍乱弧菌的实验研究

本文就所获得的12株霍乱弧菌单克隆抗体中有种特异性的三株(2B_1H_1C_6,2B_1H_1F_6及2B_1H_1F_3)单克隆抗体及抗霍乱弧菌多克隆抗体,作酶标抗体直接法和间接法,对霍乱弧菌模拟标本进行快速检测,探究在临床诊断应用中的价值。结果表明,酶标McAb较酶标多克隆抗体敏感,前者在10~4/ml菌时可以检出,后者要在10~4～10~6/ml菌时才能检出;同时表明酶标间接法比直法敏感,特异性实验结果显示酶标单克隆抗体对10株霍乱弧菌有很高的     

霍乱弧菌单克隆抗体诊断应用的研究——Ⅳ.McAb吖啶橙(McAb-AO)简易免疫荧光菌团法快速检定霍乱弧菌的实验研究

将获得的12株霍乱弧菌单克隆抗体中的一株“2B_1H_1C_6”的McAb与荧光素吖啶橙标记制成简易AOFA、对霍乱弧菌模拟标本进行快速检测,研究其敏感性,特异性和实用性同时以霍乱弧菌多克隆抗体比较。结果表明:McAb-AO比PcAb-AO敏感度高,特异性强(前者仅对霍乱弧菌呈现荧光菌团,对其它肠道菌无交叉反应),在每毫升类模拟标本中含10个     

以减毒沙门菌将重组细胞因子导向免疫系统的新免疫疗法

作者用减毒沙门菌作为编码白细胞介素4(IL-4)和IL-18的原核表达质粒传递系统，并评估其在不同实验模型中调节免疫应答的能力。     

重组人内皮细胞抑制素腺病毒载体的构建及其应用

目的　构建表达人内皮细胞抑制素 (Endostatin)的重组腺病毒载体 ,并进行活性检测。方法　将含有IL3分泌肽的人Endostatin全长cDNA插入穿梭质粒pAdCMV产生重组质粒pAd IL3 Endo ,通过脂质体介导与 pBHG1 0共转染 2 93细胞 ,经同源重组产生重组腺病毒Ad IL3 Endo。体外转染人结肠癌SW62 0细胞并观察其上清对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)生长的影响。结果　扩增到的Ad IL3 Endo的滴度为 4 .3× 1 0 1 2 空斑形成单位 (pfu) /L ,多聚酶链反应 (PCR)显示在转染的细胞中有人EndostatincDNA的存在 ,Westernblot显示转染细胞上清中有人Endostatin蛋白表达 ,台盼蓝染色显示其上清作用 72h后HUVEC的生长被抑制了 67% (P <0 .0 5)。结论　所制备的重组人Endostatin腺病毒载体能有效表达具有生物学活性的人Endostatin ,为进一步的研究奠定了基础     

HCV F蛋白体外自组装以及在HCV感染者肝组织中的分布研究

目的 探讨HCV F(frameshift)蛋白是否能自组装为病毒样颗粒以及F蛋白是否存在于HCV患者肝组织中.方法 将0.5～1 g/L大肠埃希菌重组表达的F蛋白与0.006 g/L tRNA混合,于100 μl组装缓冲液中进行反应,取组装产物进行1:10稀释,2%醋酸铀复染后电镜观察是否形成病毒样颗粒.HCV感染者肝组织中F蛋白的检测采用免疫组织化学法.结果 1 g/L F蛋白与tRNA混合(167:1)后,可形成直径35 nm的病毒样颗粒.在20例HCV感染者的肝穿刺组织标本中,有2例患者的肝细胞胞浆中可检测到F蛋白.结论 F蛋白在体外可以形成病毒样颗粒,在部分HCV感染者的肝组织中存在F蛋白,F蛋白在HCV的生活周期中可能有重要功能.     

血液透析患者中TT病毒感染的检测及序列分析

目的：研究血液透析患中TT病毒（TTV）的感染状况及其致病性。方法：针对病毒基因保守区设计引物,采用套式PCR方法对69例血液透析患血清标本进行TTVDFNA检测及序列分析。并同时检测患血清丙氨酸转氨酶（ALT）及丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）。结果：患血清TTVDNA总阳性率为27.5%。对其中1例PCR扩增产物测序。结果与其他TVV分离株如GH1、TA278、TTVCHN1和TTVCHN2的核苷酸序列同源性为89%-100%,推测的氨基酸序列同源性为87%-100%。抗-HCV阳性与阴性患的TTV DNA阳性率无明显差异。所有患均未见ALT明显升高。结论：血液透析患存在较严重的TTV感染与HCV感染无明显相关性。未发现TTV感染导致ALT明显升高的证据。     

血管生成抑素endostatin的表达、纯化及活性研究

目的：将从人胎肝组织克隆的血管生成抑素endostatin基因进行原核表达、纯化,检测重组endostatin的生物学活性。方法：利用原核表达载体pBV220在大肠杆菌DH5α中表达endostatin,利用肝素Sepharose亲和层析及SephacrylS-200分子筛纯化;通过体外内皮细胞（ECV304）增殖实验及体内鸡胚尿囊膜（CAM）新生血管实验检测其抑制活性。结果：Endo-statin在DH5α中的表达率为28.5%,纯化后纯度可达90.5%.En dostatin可明显抑制体外培养的内皮细胞增殖.IC50为72ug/ml;20时使细胞于48h发生明显凋亡;200ug/ml的endostatin可使CAM新生血管化率下降30%.结论:研究结果表明endostatin对内皮细胞具有明显抑制作用.提示其在肿瘤及新生血管性疾病的治疗中有潜在的应用前景。     

肥大细胞负调控分子与变态反应性疾病

Ⅰ型变态反应病的发生率逐年上升,目前缺乏有效的治疗方法,严重影响人类的健康和患者的生活质量。近年来,利用免疫负调控作用的信号分子,抑制肥大细胞和嗜碱粒细胞释放炎性介质和细胞因子,为Ⅰ型变态反应性疾病的免疫治疗开辟了新的途径。肥大细胞和嗜碱粒细胞表面表达的IgE高亲和力受体（FceRI）在Ⅰ型变态反应发生中起着重要作用,     

脑源性神经营养因子与帕金森病

帕金森病 (PD)的最主要病理特征是中脑黑质致密部(substantia nigra pars com pacta,SNpc)多巴胺 (DA)能神经元的进行性退化变性 ,由于其机制还不清楚 ,因而限制了此病的临床治疗。脑源性神经营养因子 (brain- derived neu-rotrophic factor,BDNF)由 Barde等于 1982年在猪脑中首次发现 ,其氨基酸序列有 5 5 %～ 6 0 %与神经生长因子 (nervegrowth factor,NGF)完全相同 ,也属神经营养素 (neu-rotrophin)家族的成员 ,BDNF可通过其高亲和力受体 trk B和低亲和力受体 p75 NTR发挥生物活性 ,能够促进多种神经元的存活 ,尤其对 DA能神经…     

携带hIL-2cDNA的逆转录病毒载体的构建及其在人肝癌细胞中的特异表达研究

将人白细胞介素２（ｈＩＬ-２）ｃＤＮＡ克隆到逆转录病毒载体ＭＮＳＭ的ＰＬ位点　，分别构建了转录受ＳＶ４０早期启动子和人甲胎蛋白增强子调控的重组逆转录病毒载体ＭＮＳＩ和ＭＮＳＩＡ。用脂质体转染法将ＭＮＳＩ和ＭＮＳＩＡ分别转导ＰＡ３１７包装细胞，测质粒转染率为（５～２０）×１０~(－３)克隆／μｇＤＮＡ·１０~６细胞，病毒感染率为（５．４～４５０）×１０~４ＣＦＵ／ｍｌ。重组病毒在４μｇ／ｍｌ ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ存在条件下感染人肝癌细胞、肾癌细胞和黑色素瘤细胞，Ｎｅｏ~Ｒ克隆经Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析证明ｈＩＬ－２ｃＤＮＡ转入人肿瘤细胞并整合，　Ｒ　ＮＡ斑点杂交及ＩＬ－２活性表达分析证明，人甲胎蛋白增强子可促进异源启动子启动ｈＩＬ－２ｃＤ－ＮＡ在合成甲胎蛋白的人肝癌细胞中高效特异转录和表达。该研究对肝癌特异性免疫增强基因治疗有重要意义。