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目的观察大鼠Nogo受体(NgR)特异性小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)在原代神经元干扰其mRNA表达的效果。方法体外培养大鼠原代皮层和海马细胞,应用阳离子脂质体转染试剂转染4对化学合成的大鼠NgR特异性siRNA,72h后提取细胞总RNA,实时荧光定量RT-PCR检测NgR mRNA表达情况。结果4对siRNA均能够下调靶基因NgR的mRNA表达水平,siNgR199、siNgR562、siNgR772和siNgR964等干扰后,NgR mRNA的表达分别为对照siRNA干扰组的6.5%、62.4%、15.2%和6.86%,与对照siRNA干扰组比较有统计学意义(P<0.05)。结论化学合成的NgR特异性siRNA能够有效的干扰大鼠原代皮层和海马细胞内NgR基因mRNA的表达水平。 相似文献
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目的总结膝内翻患者股骨侧弓角的测量方法。 方法选取2014年1月至2018年6月在上海中医药大学附属曙光医院骨科就诊的膝内翻膝关节骨关节炎患者,回顾患者既往下肢全长X线、对比膝关节内翻后股骨X线片,确定最相似的2张股骨X线片,记录对应的X线投照旋转角度。 结果膝关节骨关节炎膝内翻患者,投照股骨X线的适宜旋转角度:10°≤内翻角度<20°组:中位数10°(9°,12°);20°≤内翻角度<30°组:中位数16°(14°,20°);内翻角度≥30°组:中位数24°(21°,25°)。 结论对于膝内翻的骨关节炎患者,摄股骨X线时,投照角度适当外旋,可更准确测得股骨侧弓角。 相似文献
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该文系回顾性病例对照研究。选择1985年至2000年间339例在东京大学医院行椎板成形术治疗的患者。所患疾病包括颈椎间盘突出、后纵韧带骨化、风湿性关节炎、脑瘫及其他可影响脊柱序列的疾病。在排除因C7椎体在X线平片上显示不清而无法测量Cobb角的病例后,最后入选72例脊髓型颈椎病患者,其中手术范围为C2~731例,C3~729例,C1~75例,C3~63例,C3~T12例,C2~61例,C2~T11例;平均年龄60.0岁(26~83岁),平均症状出现时间3.0年(2个月~17年),平均随访4.0年(2~11年)。依据G椎板情况将患者分为3组,S组18例,C2椎板被完全劈开;D组20例,行C2椎板下弧形切除减压;I组34例,保留C1、2椎板的完整。 相似文献
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目的:构建大鼠Nogo受体(Nogo receptor,NgR)基因RNA干扰慢病毒表达载体,并观察其对293T细胞感染效率.方法: 应用基因工程技术,首先构建携带目的基因siNgR199的慢病毒穿梭质粒表达载体,然后使用慢病毒包装质粒混合物和构建好的慢病毒穿梭质粒共转染293T细胞,转染48 h后收集上清离心过滤后冰浴保存,最后进行病毒滴度测定,与标准病毒液分别感染293T细胞,按MOI值分为5个梯度:1、3、5、10、20,以确定病毒滴度及适合感染的MOI值.其中采用PCR方法对重组载体进行鉴定,利用绿色荧光蛋白作为报告基因,对病毒滴度和感染效率进行检测.结果: 酶切鉴定及PCR结果与病毒载体的预期结果一致,病毒滴度达1×108 ifu/m1,适合感染的MOI值为3.结论: 应用基因工程技术,成功构建了大鼠siNgR199慢病毒表达载体,为应用于治疗脊髓损伤后轴突再生创造了条件. 相似文献
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重组大鼠pEGFP-N1-IGF-1基因表达质粒的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
目的构建胰岛素样生长因子1基因的真核表达质粒(pEGFP-N1IGF-1),为基因治疗脊髓损伤(SCI)提供前提。方法应用反转录聚合酶链反应(RTPCR)方法从大鼠肝脏组织总RNA中提取并扩增胰岛素样生长因子1(IGF1)基因的全长cDNA,并将该基因连接克隆到含有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的真核表达载体pEGFPN1上,以构建重组质粒pEGFPN1IGF1。结果实验从大鼠肝脏组织中提取总RNA,以RTPCR方法获取编码IGF1基因的全序列cDNA。构建IGF1cDNA真核表达质粒时将能发出绿色荧光的EGFP报告基因融合在IGF1基因,并经酶切后DNA电泳鉴定及DNA测序证实结果。结论构建重组质粒pEGFPN1IGF1成功,实验中将能发出绿色荧光的EGFP报告基因融合在IGF1基因的3′端,并以编码柔软肽段的核苷酸连接,既保留了IGF1的神经营养活性,又便于基因治疗中可检测到蛋白表达。 相似文献
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目的评价应用腓骨复合板治疗尺骨鹰嘴骨折的疗效。方法15例尺骨鹰嘴骨折病例,均为闭合性骨折。手术采用臂丛麻醉或全麻,患肢使用止血带,采用肘后正中切口。以合适长度腓骨复合板固定骨折,术后早期行肘关节功能锻炼。采用Broberg肘关节评分标准评价手术效果。结果术后平均随访8.4个月。所有切口均Ⅰ期愈合,骨折均愈合。Broberg肘关节评分:优12例,良2例,可1例。结论腓骨复合板体积小、易塑形、力学性能良好,是治疗尺骨鹰嘴骨折的有效手段。 相似文献
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目的:将siRNA技术应用于NgR,筛选出高效的NgR(Nogo受体)特异性siRNA,并构建其表达载体。
方法:2005-03/2006-03,在杭州新瑞佳生物制药有限公司、解放军第二军医大学神经生物教研室设计筛选NgR特异性siRNA,按照Elbashir等设计原则和siRNA的要求,设计、合成4对siRNA,转染体外培养大鼠原代皮层和海马细胞,筛选出基因高沉默效率的NgR特异性siRNA;2004—03/2005-03上海生工生物工程公司将获得的高沉默效率siRNA设计成带有BamHⅠ、HindⅢ酶切粘性末端、终止识别序列和LOOP环的发卡式RNA,并将其克隆入载体pRNAT—U6.1/Neo,构建NgR特异性siRNA表达载体,然后进行酶切鉴定及基因测序。
结果:①对NgR特异siRNA中,siRNA199下调NgRmRNA的表达水平效率最高,转染72h效果最显著(96.04%)。NgR特异性siRNA199序列为:5’-CCGAAUCUCUUACGUGCCATT-3’。②将该序列的发卡式RNA成功克隆入载体pRNAT—U6.1/Neo,构建成NgR特异性siRNA199表达载体,酶切鉴定及基因测序表明设计序列完全相符,目的基因序列准确无误。
结论:NgR特异性siRNA199及其表达载体构建成功,为进一步合成病毒载体及观察NgR特异性RNA干扰抑制大鼠NgR mRNA表达对脊髓损伤的修复作用奠定了基础。 相似文献
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目的:将siRNA技术应用于NgR,筛选出高效的NgR(Nogo受体)特异性siRNA,并构建其表达载体。方法:2005-03/2006-03,在杭州新瑞佳生物制药有限公司、解放军第二军医大学神经生物教研室设计筛选NgR特异性siRNA,按照E1bashir等设计原则和siRNA的要求,设计、合成4对siRNA,转染体外培养大鼠原代皮层和海马细胞,筛选出基因高沉默效率的NgR特异性siRNA;2004-03/2005-03上海生工生物工程公司将获得的高沉默效率siRNA设计成带有BamHI、HindⅢ酶切粘性末端、终止识别序列和LOOP环的发卡式RNA,并将其克隆入载体pRNAT-U6.1/Neo,构建NgR特异性siRNA表达载体,然后进行酶切鉴定及基因测序。结果:①4对NgR特异siRNA中,siRNA199下调NgRmRNA的表达水平效率最高,转染72h效果最显著(96.04%)。NgR特异性siRNA199序列为:5’-CCGAAUCUCUUACGUGCCATT-3’。②将该序列的发卡式RNA成功克隆入载体pRNAT-U6.1/Neo,构建成NgR特异性siR-NA199表达载体,酶切鉴定及基因测序表明设计序列完全相符,目的基因序列准确无误。结论:NgR特异性siRNA199及其表达载体构建成功,为进一步合成病毒载体及观察NgR特异性RNA干扰抑制大鼠NgRmRNA表达对脊髓损伤的修复作用奠定了基础。 相似文献
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